从沉积物中提取生物标志物——加速溶剂萃取

1. 必需材料的收集

1. 提取样品。样品（本例中为沉积物）在提取前需经过冷冻、冷冻干燥、研磨和均质化处理，并分组进行提取以提高效率。
2. 根据样品量的大小，选用40 mL或60 mL的收集瓶。本实验使用40 mL硼硅酸盐玻璃瓶和耐溶剂瓶盖。为避免有机污染，所有收集瓶、硼硅酸盐玻璃移液管和称量锡箔均需在550 °C下灼烧6小时。
3. 二氯甲烷（DCM）和甲醇是大多数有机地球化学实验室常用的溶剂。使用前，应依次用甲醇和二氯甲烷单独冲洗实验器具和玻璃器皿。许多实验室采用二氯甲烷与甲醇（MeOH；9:1）的混合溶剂，以高效提取具有广泛极性的生物标志物。所用溶剂应不含有机污染物。
4. 准备一台加速溶剂萃取仪用于本实验。

2. 样品池的制备

1. 为每个待提取的样品以及一个空白样品分别组装一个样品管。
   1. 对于每个样品管，将一端盖拧到管体的一端。
   2. 使用经溶剂冲洗过的镊子，将一张经灼烧处理的玻璃纤维滤膜放置在每个样品管顶部，然后用滤膜推杆轻轻而缓慢地将滤膜压入管中。
   3. 对每个样品管按编号（例如 1–22）进行标记，并在空白样品管上标注"blank"。
   4. 在空白管中填充硅藻土（或沙子），并用第二个端盖封口，手动拧紧。

3. 样品制备

1. 将一个灼烧过的称量锡皿放在天平上，归零去皮。
2. 用溶剂冲洗实验室刮勺，然后用其将适量样品转移至称量锡皿中，并记录质量。
   1. 样品质量取决于其有机质含量。有机质含量较低的材料（如海洋泥）可能需要数克，而有机质含量较高的材料（如叶片组织）则需要更少。
3. 将称量锡皿中的全部样品转移至已准备好的ASE萃取池中。
4. 在萃取池顶部放置另一片玻璃纤维滤膜，然后缓慢轻柔地用滤膜推杆下压，直至其接触样品顶部。
5. 向萃取池中加入硅藻土（或沙子），直至接近装满。注意清除萃取池螺纹上的任何残留物。
6. 用另一个端盖密封萃取池顶部。
7. 对每个样品重复步骤3.1至3.6。

4. 收集瓶的准备

1. 为每个小瓶标记相应细胞的编号（例如 1 - 22 或空白），并用 ASE 收集瓶盖密封。

5. 提取

1. 将每个样品池放入上层ASE托盘的编号槽位中。
2. 将相应的收集瓶放入下层ASE托盘相同编号的槽位中。
3. 使用ASE上的键盘创建萃取方法。萃取条件为100 °C和1,200 psi。每个样品萃取3次，每次静态保持10分钟，并在每次静态保持之间用相当于样品池总体积50%的溶剂冲洗池体。
4. 确保溶剂瓶中含有足够的溶剂以完成所有样品的萃取。
5. 运行开始前，按压ASE控制面板上的 "rinse" 按钮，对ASE进行3次冲洗。
6. 按下启动按钮。