通过皂化反应将脂肪酸甲酯转化为U^k'₃₇古温度计分析适用形式

1. 材料的准备与设置

1. 采用溶剂萃取法（超声处理、索氏提取或加速溶剂萃取（ASE））获取总脂质提取物（TLE）。
2. 配制含有5% H的2 N KOH溶液₂甲醇中的 O
   1. KOH 和甲醇可从化学试剂供应商处购买。这些化学品应为高纯度且不含碳氢化合物。
      1. KOH 的摩尔质量约为 56 amu，可产生 1 mol 的 OH⁻^- 每摩尔 KOH 对应。因此，要配制 2 N 浓度的溶液，需将 112 g KOH 溶解于 0.95 L 纯水和 0.05 L 甲醇中。
      2. 请注意，KOH 溶于水是放热反应，会产生大量热量。应缓慢将 KOH 颗粒加入水中，以避免发生剧烈反应。
   2. 将112 g KOH颗粒加入0.95 L纯水中，在自动搅拌器上溶解。
   3. 待所有KOH溶解后，加入0.05 L甲醇，以促进有机生物标志物在水溶液中的溶解。
3. 配制6 N盐酸（HCl）的水溶液₂O.
   1. HCl 可从化学品供应商处购买。该化学品应为纯品，且不含碳氢化合物。
   2. 盐酸通常以13 N的浓度出售。因此，将盐酸与纯水按1:1混合可得到浓度约为6.5 N的盐酸溶液，该浓度已足够接近本实验所需的6 N。
      1. 务必先将盐酸加入水中，而不可反向操作，因为将水加入浓盐酸中会释放热量，产生放热反应，可能导致盐酸飞溅。
   3. 将100 mL盐酸缓慢而轻柔地倒入盛有100 mL纯水的烧杯中，每加入一部分盐酸后轻轻旋动混合。
4. 配制5% NaCl（食盐）的H₂O溶液₂O.
   1. NaCl 可从化学试剂供应商处购买。该化学品应为纯品，且不含碳氢化合物。
   2. 计算并称取配制约1 L 5%（w/w）溶液所需的盐质量。1 L水的质量约为1 kg或1,000 g。因此，将50 g NaCl溶解于950 mL水中可得到5%的溶液（50 g + 950 g = 1,000 g；50 g / 1,000 g = 0.05或5%）。
   3. 在自动搅拌器上，将50 g NaCl轻轻加入纯水中，并等待其完全溶解。
5. 获取以下材料：2 个洁净且经灼烧处理（550 °C）的坩埚 ˚C，6 小时）40 mL 硼硅酸盐玻璃小瓶，配聚四氟乙烯衬垫瓶盖；恒温烘箱或加热块；经灼烧处理（550 ˚C 下孵育 6 小时）硼硅酸盐玻璃移液管和吸头；pH 试纸（酸性范围）；己烷（己烷可从化学品供应商处购买，应为 Optima 级或同等纯度）。

2. 方法

1. 取一个40 mL的硼硅酸盐玻璃小瓶，加入已干燥的TLE（含酯类）。
2. 向TLE中加入约10 mL的2 N KOH，盖上瓶盖。
3. 将样品置于烘箱或加热块中，在60 ˚C下加热2.5小时，以断裂酯键（图3）。
4. 将样品从热源中取出，静置冷却至室温。
5. 向TLE中加入约10 mL的5% NaCl溶液（图3）。此步骤有助于防止后续加入有机相时水相与有机相界面产生泡沫。盖上瓶盖后短暂振荡。
6. 逐滴向含盐的TLE中加入6 N HCl，直至pH达到2，以质子化O^- 并生成最终产物——稳定的羧酸（图3；使用pH试纸检测）。若TLE原本有颜色，可能在pH 2时出现颜色变化。
7. 向已酸化的、不含酯的溶液中加入约20 mL正己烷。盖上瓶盖后剧烈振荡5秒，以从水相中萃取有机化合物。
8. 静置，直至水相和有机相完全分层。盐类、离子、水及未反应的HCl保留在水相中，有机化合物则进入正己烷相。
9. 用移液器移出约75%的上层正己烷相，并转移至另一个40 mL的硼硅酸盐玻璃小瓶中。
10. 重复步骤2.7–2.9两次，每次加入约10 mL正己烷。
11. 将剩余的水相混合物倒入合适的废液容器中弃去。
12. 标记盛有正己烷及不含酯有机物的小瓶为"TLE - 皂化后。