柱层析法纯化总脂质提取物

1. 材料的准备与设置

1. 采用溶剂萃取法（超声处理、索氏提取或加速溶剂萃取（ASE））获得总脂质提取物（TLE）。
2. 准备以下材料：经灼烧处理的硼硅酸盐玻璃移液管和吸头、硅胶、正己烷、二氯甲烷（DCM）和甲醇。
   1. 这些材料可从任意化学品供应商处购买。试剂应保持高纯度且不含烃类污染物。
3. 同时准备经灼烧处理的玻璃棉和4 mL硼硅酸盐玻璃小瓶。
4. 确保在实验过程中有适当装置用于支撑层析柱和收集小瓶。例如，使用带夹子的支架和小瓶架。许多实验室会使用自行设计的定制支架，可同时固定多个层析柱和收集小瓶（图2），从而实现多根层析柱的并行操作。

2. 方法

1. 从4 mL小瓶中的干燥样品开始。如果干燥后的样品质量超过约10 mg，则可能需要在进行下一步操作前将样品分装，因为硅胶只能与有限质量的有机物发生反应。
2. 用少量正己烷悬浮样品。这是本实验中使用的三种溶剂中第一个且极性最低的溶剂。
3. 如果样品粘附在小瓶内壁上，将样品超声处理5分钟。
4. 使用干净的镊子将少量玻璃棉装入移液管顶部。用另一支移液管轻轻将玻璃棉推至移液管底部，形成一个塞子。
5. 小心地将硅胶转移至移液管中，直至其体积约为移液管的一半。
6. 在层析柱下方放置一个4 mL的废液收集小瓶。
7. 用3倍体积的正己烷浸泡移液管中的硅胶。此步骤用于平衡层析柱，去除气泡，并冲洗硅胶上的杂质。
8. 最后一次洗涤完成后，移除废液收集小瓶，并更换为用于收集非极性组分的小瓶。
9. 用移液管小心地将全部正己烷样品转移至层析柱上。再用少量正己烷冲洗样品小瓶两次，并将洗涤液也转移至层析柱中。让携带样品的正己烷完全渗入硅胶中。在整个操作过程中，硅胶不得干燥。
10. 继续向样品上方加入正己烷，直至层析柱下方的收集小瓶几乎装满（约4 mL）。
    1. 在开始使用下一种溶剂前，确保所有正己烷均已进入硅胶中。
11. 将中等极性组分的收集小瓶置于层析柱下方。
12. 向层析柱顶部加入二氯甲烷（DCM），直至收集小瓶几乎装满。同样，在开始使用下一种溶剂前，确保所有DCM均已进入收集小瓶。
13. 将极性组分的收集小瓶置于层析柱下方。
14. 向层析柱顶部加入甲醇，直至收集小瓶几乎装满。