啮齿类动物鉴定 II

此处描述的所有动物实验操作必须遵循机构动物伦理指南，并经机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准。所有操作必须遵守“3R”原则——替代（Replacement）、减少（Reduction）和优化（Refinement），并由经过培训的人员执行。

1. 尾部纹身

尾部纹身无需抓取动物即可轻松读取。

图1. 成年小鼠尾部纹身标记

1. 根据制造商的说明准备纹身设备。只需少量墨水。白化小鼠或大鼠应使用黑色染料，有色小鼠或大鼠应使用绿色染料。
2. 准备动物以进行识别。
   注意：为尽量减少动物的恐惧或痛苦，尾部纹身应在操作室中进行，而非在动物饲养区域进行。
   1. 适当固定动物以进行纹身，使其移动最小化。
   2. 断奶期大鼠使用带缺口的塑料杯进行固定，将杯口固定在纹身平台的螺栓下，尾巴从缺口处伸出。
   3. 成年小鼠可通过杯式固定器进行固定，将尾巴从开口处拉直，并通过平台或其他装置固定杯缘。
   4. 用棉签蘸取少量稀释的组织清洁剂清洁尾巴。成年大鼠尾巴上通常有鳞屑和污物积聚，在纹身前必须清除。用肥皂和水擦洗尾巴可去除大部分污垢和碎屑。在继续操作前将尾巴充分擦干。
   5. 在纹身前立即用棉签将组织油涂抹于皮肤上。组织油可软化皮肤并润滑纹身针，从而减少组织损伤。此外，油剂还能溶解清洁过程中未去除的污垢，并防止墨水沾染非纹身区域的皮肤。
3. 实施纹身。
   1. 在机器关闭的情况下，将针尖浸入色素中。
   2. 踩下脚踏板启动设备，将针尖移至纹身部位。
   3. 沿一个方向进行短而均匀的划动。数字和字母应以分段方式纹制，尽可能减少角度和曲线。
   4. 针头需足够深入真皮层，以实现色素的永久沉积。激活针头时声音的变化有助于判断刺入深度。
   5. 针头应以90^o角接触皮肤，以确保色素充分沉积。
4. 纹身后清洁与护理
   1. 用纸巾轻压（切勿擦拭）已完成的纹身，吸除多余色素。
   2. 若纹身部位或纸巾上出现血液，表明纹身过深，因此可能无法持久。
   3. 对纹身字符中较淡的区域补充色素进行加固。加固时，新色素应平行于但不覆盖已沉积的色素区域。
   4. 补充色素时，每为两只小鼠或每只为一只大鼠纹制两个字符后，均需将针尖重新浸入染料储存处。
   5. 导致纹身褪色的原因包括：色素用量不足、纹身过浅或过深、针头与皮肤角度不当、使用钝针或弯针，以及操作速度过快。
   6. 每次使用后，应根据制造商的说明彻底清洁纹身设备。

2. 新生幼崽脚趾纹身标记

实验方案可能要求在出生后第一天即对新生幼崽进行基因分型，因此必须对这些幼崽进行永久性标识。脚趾纹身法可使动物在足够大以进行耳标或耳缘打孔前持续被识别。

图 2. 对新生小鼠进行纹身时正确的固定技术。采血针尖端带有绿色染料。

1. 固定未断奶的幼崽。
   1. 将新生幼崽用手掌托住，置于纱布垫上。将幼崽的脚置于拇指与食指弯曲处之间，以暴露需要纹身的脚趾或多个脚趾。
   2. 握持脚部时应靠近脚趾，使脚趾后方有稳固支撑，防止其弯曲移位。
   3. 摆放脚部位置时，切勿过度扭转腿部。幼崽在被固定时可能会扭动，但通常不会发出叫声。
2. 准备器械。
   1. 选用一支4.5 mm的Goldenrod动物采血针。
   2. 在非多孔表面上取少量绿色纹身膏；铝箔是理想的承载材料。
   3. 仅将采血针的尖端浸入纹身膏中。
   4. 使用极少量的纹身膏即可。
3. 实施纹身。
   1. 根据编号规则，用Goldenrod采血针刺入目标脚趾。
   2. 刺破皮肤，使纹身膏进入皮内，形成标记。
   3. 在同一位置重复穿刺三次，以确保充分渗透。
   4. 避免刺入过深导致脚趾出血；出血可能导致纹身颜色变淡。
4. 纹身后清理与护理
   1. 用吸水纸巾或毛巾轻轻按压穿刺部位，去除多余纹身膏。
   2. 不要试图清洁脚部或身体其他部位残留的纹身膏。
   3. 将动物放回笼中。
   4. 若对哺乳期幼崽进行纹身，建议同时对母鼠进行纹身。此举可防止母鼠因幼崽身上的纹身膏而产生过度反应，从而避免过度舔舐纹身部位。
   5. 每窝幼崽应使用新的采血针。
   6. 应在操作次日检查纹身效果。若斑点颜色过淡或不可见，应重新纹身。若纹身后次日斑点清晰可见，则该标记应可终生保持可见。

3. 成年大鼠和小鼠的脚趾纹身标记

对一窝新生幼崽进行纹身标记时，建议同时对母鼠进行纹身，以避免幼崽身上的纹身膏对其而言成为异物而引起排斥。

1. 动物固定。
   1. 使用塑料锥形固定器或允许接触后足的有机玻璃固定装置来固定动物。
   2. 将动物的足部从固定装置中伸出。
   3. 将足部置于拇指与食指弯曲处之间，以暴露需要纹身的脚趾或多个脚趾。
   4. 握持足部时应靠近脚趾，使脚趾后方有坚实的支撑面，防止脚趾弯曲移位。
   5. 摆放足部时避免过度扭转腿部。成年动物在被固定时可能会试图收回足部。
2. 准备设备。
   1. 选择一支5 mm的Goldenrod动物采血针。
   2. 在非多孔表面上放置少量绿色纹身膏；铝箔是良好的选择。
   3. 仅将采血针的尖端浸入纹身膏中。
   4. 仅使用少量纹身膏。
3. 实施纹身。
   1. 根据编号规则，使用Goldenrod采血针刺入目标脚趾。
   2. 刺破皮肤，使纹身膏进入皮内，形成标记。
   3. 在同一位置重复穿刺三次，以确保充分渗透。
   4. 避免穿刺过深导致脚趾出血；这可能导致纹身颜色变淡。
4. 纹身后清理与护理
   1. 用吸水纸巾或毛巾轻轻按压穿刺部位，去除多余的纹身膏。
   2. 不要试图清洁足部或身体其他部位的多余纹身膏。
   3. 将动物放回笼中。
   4. 每只动物必须使用新的采血针。
   5. 应在操作后第二天检查纹身效果。若斑点颜色过淡或不可见，应重新进行纹身。若纹身后第二天斑点清晰可见，则该标记应可终生保持可见。

4. 微型芯片植入

植入RFID芯片是用于动物识别的常用方法。

1. 将微芯片装入植入器，或选择预装好的注射器。
2. 使用允许抓握肩部皮肤的有机玻璃固定管固定实验动物。
3. 提起皮肤，形成一个皮下袋。
4. 将针头刺入皮肤，针尖斜面朝上，与脊柱平行，并朝向尾部方向推进。
5. 将微芯片皮下注射至皮下袋内。
6. 拔出针头，并在注射部位捏紧皮肤以闭合穿刺点，防止微芯片随针头带出体外。持续施加压力以止血，防止皮肤出血。
7. 将动物从固定装置中取出，并用扫描仪读取芯片，确认识别编码。

图 3. 成年大鼠体内微芯片的植入位置。

5. 小鼠的临时标识

非毒性染料和动物标记物可用于小鼠的临时识别。

1. 固定小鼠，使其肩胛骨之间的区域暴露，以便在毛发上做标记。
2. 在此区域的毛发上使用标记笔、斑点或条纹状染料进行标记。该区域的选择有助于防止动物在理毛过程中清除标记。
3. 若将标记作为唯一识别方式使用超过数天，需定期检查标记是否仍清晰可见。
4. 尾部也可用于短期标记，但动物在理毛时可能会清除尾部的标记。

6. 大鼠的临时标识

1. 固定大鼠，使其标记区域易于接触。在某些情况下，若仅需标记条纹或点，则无需固定动物，可让其在笼内自由活动。
2. 通常通过抓住尾巴并拉直以进行手动固定，从而完成个体标识。
3. 对于难以控制的动物，可使用吸入性麻醉剂进行暂时性固定。
4. 若采用此方法作为持续数天以上的唯一标识方式，应定期检查标记情况。

关键术语与定义
尾部纹身在许多研究方案中具有显著优势。对于需要进行磁共振成像（MRI）的小动物，或具有溃疡性皮炎遗传倾向的动物而言，尾部纹身是一种理想的身份识别方式。在无需保定动物的情况下，通过观察尾部纹身即可快速识别笼内个体，操作简便且易于观察。然而，该技术需要熟练的技巧、反复练习以及稳定的操作手法，同时还需要专用设备。
某些实验方案可能要求在出生后第一天即对新生仔鼠进行基因分型，因此必须对这些幼鼠实施永久性标识。在这一早期阶段，耳廓尚未发育完全，无法佩戴耳标，也不适合进行耳缘打孔。过去，研究人员常采用剪趾编码的方式来识别新生仔鼠，但这种方法对幼鼠及其母鼠均造成较大应激，已被视为不符合动物福利要求。采用足趾纹身技术，可在幼鼠成长至适合佩戴耳标或进行耳缘打孔之前，实现长期、稳定的个体识别。
尽管植入微型芯片的操作过程相对简单，但在小鼠身份识别应用中仍存在若干限制因素。无菌微芯片的尺寸约相当于一粒较大的米粒，需使用10至12号针头进行植入，对于小鼠而言体积较大。此外，微芯片本身及配套读取设备的成本较高，而小鼠寿命较短、使用数量通常较多，使得该方法在经济上难以普及。对于计划接受MRI成像的动物，体内不可含有任何植入物。然而，若存在一组具有重要价值、需长期标识的动物，则可考虑使用微芯片进行识别。
对于仅需数小时或数天内识别动物的急性实验，无需采用永久性标识方法。目前已有专用于动物毛发染色的无毒标记剂，提供多种颜色选择，其着色效果可持续数周。这些标记剂也可与其他标识方法联合使用，便于在群体中快速识别特定个体。

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在选择合适的鉴定方法时，必须仔细考虑多种因素。每种技术都有其优缺点，需结合实验需求进行权衡。尽管成本需与其他因素一并考量，但技术操作的简便性以及对动物造成的不适程度应作为主要考虑因素。