标准加入法

1. 试剂的准备

1. 100 ppm 标准 Al³⁺ 溶液：将 0.9151 g 硝酸铝（Al(NO₃)₃•9H₂O）溶于 1 L 容量瓶中，并用去离子水定容。
2. 1 M 乙酸中的 8HQ 溶液（2% 质量/体积）：将 2.0 g 8-羟基喹啉加入 100 mL 容量瓶中。
3. 小心向该 100 mL 容量瓶中加入 5.74 mL 冰乙酸，然后用去离子水定容。此步骤有助于 8-羟基喹啉溶于水相。
4. 1 M NH₄⁺/NH₃ 缓冲液（pH~8）：将 20 g 乙酸铵（NH₄OAc）加入 100 mL 试剂瓶中。
5. 向该 100 mL 试剂瓶中加入 7 mL 30% 氨水，并用去离子水定容。此步骤有助于在混合时中和 8HQ 溶液中的酸。
6. 其他试剂包括无水硫酸钠（Na₂SO₄）和氯仿（优级纯）。

2. 样品制备

1. 用移液管将1.0 mL的100 ppm储备Al³⁺溶液加入100 mL容量瓶中，配制1.00 ppm的标准Al³⁺溶液。
2. 将六个125 mL分液漏斗放置在通风橱内大铁架台的铁环上，分别标记为：BL、0、1、2、3、4。确保所有玻璃器皿都彻底清洁，因为如果氯仿小液滴附着在器皿壁上，将难以获得定量结果。
3. 用移液管向标号为0、1、2、3和4的五个分液漏斗中各加入25.00 mL未知浓度的Al³⁺溶液。本示例中，未知溶液浓度为0.110 ppm。
4. 用1 mL移液管分别向这五个分液漏斗中加入0、1.00、2.00、3.00和4.00 mL的1.00 ppm标准Al³⁺溶液。
5. 向标记为BL的分液漏斗中加入25.00 mL蒸馏水，制备空白样（BLANK）。
6. 用移液管向六个溶液中各加入1.0 mL 8-羟基喹啉溶液。
7. 用移液管向六个溶液中各加入3.0 mL缓冲溶液。
8. 每份溶液用10 mL氯仿萃取两次，每次剧烈振摇1分钟。注意：应定期打开分液漏斗排气，以释放内部积聚的压力。（注意：只有当两相之间有充分的液-液接触时，才能实现良好的萃取效果）。
9. 将氯仿层收集到洁净干燥的100 mL带标签烧杯中。氯仿密度约为1.5 g/cm³，因此位于下层。完全萃取后，水相中应无任何黄色残留。
10. 将各烧杯中合并后的氯仿萃取液转移至对应的25 mL容量瓶中，并用氯仿稀释至刻度线。务必为每个容量瓶加盖瓶塞，防止氯仿挥发。
11. 向步骤2.9中的六个100 mL烧杯中各加入约1 g无水硫酸钠（Na₂SO₄）。硫酸钠有助于去除氯仿萃取液中可能残留的微量水分。
12. 将溶液重新转移回各自的烧杯中，小心旋转以促进样品中水分的脱除。
13. 将氯仿萃取液倾入石英荧光比色皿中（注意：氯仿会溶解塑料聚苯乙烯比色皿）。

3. 选择激发波长

通过扫描确定激发和发射波长，然后在这些波长下直接读取并记录所有样品的荧光强度。激发和发射带宽预设为 5 nm。该复合物在近紫外区有吸收，因此激发波长应约为 385 nm。最初可在发射支路监测 500 nm 处的荧光。

1. 在荧光仪上，确认荧光仪的内部和外部冷却风扇已在氙灯启动前打开。氙灯工作时会产生大量热量，需要持续冷却。
2. 将光电倍增管（PMT）检测器的高压（HV）调至 400 V。
3. 打开两个快门。
4. 在计算机上打开数据采集程序，此处为"100nmFluorScan"。
5. 将“样品 + 加入 2 mL”（2）溶液放入石英比色皿中，用于确定最佳激发和发射波长。
6. 初始将发射波长设为 500 nm，以 2 nm/s 的扫描速度在 335–435 nm 范围内进行激发扫描。
7. 根据所得荧光图谱，确定最大荧光激发波长（EXλ_max），并将仪器设定为该波长值。

4. 选择发射波长

1. 将荧光计的发射波长设置为450 nm。
2. 将发射波长范围设置为450-550 nm，进行100 nm的扫描。
3. 开始扫描时，同时点击程序中的“start trial”按钮和荧光仪前面板上的“START”按钮。
4. 从所得荧光图中确定最大荧光值 发射 波长（EMλ_最大），并将仪器设定为该值（图2).

图2. 确定最佳激发波长EXλ_max和发射波长EMλ_max。

5. 测量样品的荧光

1. 所有样品均在发射波长最大值（EMλ_max）和激发波长最大值（EXλ_max）下测定。无需对每个样品进行全扫描，仅需记录在上述条件下的荧光值。从最稀释的样品（空白样）开始，将其放入石英比色皿中，然后置入仪器，记录荧光强度于实验记录本中。
2. 对所有其他样品重复该步骤。
3. 请注意，在绘制校准曲线之前，必须从各溶液的相对荧光强度中扣除空白样的相对荧光强度。

6. 创建标准加入法曲线图

1. 绘制荧光强度与加入的 Al³⁺ 质量（µg）的关系图。
2. 确定该曲线的最小二乘法拟合值，并记录斜率和截距。
3. 根据公式 Al³⁺ 的微克数 = -b/m，计算未知样品中 Al³⁺ 的含量（µg）。
4. 已知未知铝溶液的体积为 25.0 mL，加入至每个样品中，据此确定未知样品中铝的浓度。