血液采集 II

此处描述的所有动物实验操作必须遵循机构动物伦理指南，并经IACUC批准。所有操作须遵守3R原则——替代（Replacement）、减少（Reduction）和优化（Refinement），并由经过培训的人员执行。

1. 小鼠下颌下出血：

下颌下静脉和面部静脉采血在IACUC方案中常被合并，因为它们涉及啮齿类动物相同的解剖区域和密切相关联的采血技术。穿刺部位针对的是颊部区域的血管，不同机构或文献中术语可能有所不同。将两者合并可避免混淆，并确保该单一操作在技术、培训及动物福利方面的标准化。

1. 设备
   1. 血液采集采用自由捕捉法直接收集至采血管或微量离心管中。在某些情况下，可直接采集至血细胞比容管中。
   2. 根据动物的年龄和性别选择合适尺寸的18–22号针头。
      1. 针头的选择应依据小鼠的年龄/体型，并遵循经批准的IACUC指南：
         22号针头：3–4周龄小鼠（体重低于15克）
         20号针头：10周龄以下雌性小鼠（体重约低于20克）
         20号针头：6周龄以下雄性小鼠（体重约低于20克）
         20号针头：用于单滴血样采集（制备血涂片）
         18号针头：10周龄以上雌性小鼠（体重约超过20克）
         18号针头：6周龄以上雄性小鼠（体重约超过20克）
         18号针头：采集大量血样
2. 固定
   1. 采用捏住颈背部皮肤的方法固定小鼠。
   2. 应尽量减少头部的左右移动，以确保针头穿刺准确且安全。
3. 采血
   1. 持针方向应与皮肤表面垂直。
   2. 在固定小鼠的同时，通过从口角延伸的直线与从外眼角延伸的直线相交处，确定下颌静脉的大致位置。该位置对应于口角后方、下颌线下方略偏处的一个小的无毛凹陷区域。
   3. 为更准确地穿刺血管，应将小鼠置于侧卧位。
   4. 用针尖在此处刺破皮肤，操作时应稳力推进，而非像投掷飞镖一样快速刺入。
   5. 针头插入深度不应超过斜面尖端。
   6. 拔出针头后，血液将开始流出。
   7. 为促进血液流动，应使小鼠头部位置低于心脏水平。
   8. 将血液收集至所需的采血管中。
   9. 用纱布轻压穿刺部位止血，注意避免触碰眼球角膜

图 1. 小鼠下颌（面部）静脉采血。

2. 隐静脉采血

1. 设备
   1. 27–25 号针头或采血针（适用于小鼠）
   2. 脱毛工具（推荐使用电动剃毛器）
   3. 血细胞比容管或适当的血液收集管
   4. 无菌纱布或棉签
   5. 无菌用品（例如手套、消毒剂）
2. 固定
   1. 轻柔的手动固定或使用固定管
   2. 用手轻柔固定小鼠，持续时间应尽可能短。
   3. 将后肢伸展，并在膝关节上方施加轻柔向下的压力以固定肢体。
   4. 该体位可拉伸踝部皮肤，便于采样时稳定肢体。
3. 采血
   1. 使用电动剃毛器去除后肢外侧从足部上方至膝关节下方的毛发。
   2. 整个操作过程中应遵循无菌技术。
   3. 在膝关节上方施加轻柔压力，以拉伸皮肤并显露外侧隐静脉。
   4. 将针头垂直置于静脉上方的皮肤处。
      小心穿刺血管，避免过深插入下方组织。
   5. 让血液在皮肤表面形成液滴，通过毛细作用吸入血细胞比容管，或让其自然滴入收集管中。
   6. 如需重复采样，可交替使用对侧肢体。每次采样最多尝试三次穿刺，24 小时内采样次数不得超过四次。
4. 止血与恢复
   1. 通过放松对肢体的抓握，并在穿刺部位用无菌棉签施加轻柔压力来停止出血。
   2. 在将动物放回饲养笼前，须确认已完全止血。
   3. 应监测动物是否出现不良反应，如瘀伤、出血、感染或偏倚对侧肢体等现象。

3. 导管插入术

1. 设备
   1. 合适的无菌导管/套管
   2. 无菌管路、帽盖和连接器
   3. 无菌用品（手套、消毒剂、无菌溶液）
   4. 保护性包扎材料
   5. 如需使用固定系统（例如背心式固定装置、固定绳、旋转接头）
2. 固定
   1. 可能需要对动物进行固定，以防止其拔除导管。
   2. 若使用固定系统（例如背心式固定装置和固定绳），应在操作前使动物预先适应。
   3. 在可行的情况下应维持群养；适当保护导管可使某些物种实现群体饲养。
3. 导管置入与使用
   1. 导管置入可用于实现重复采血，同时减少因反复固定和针刺穿刺所引起的应激。
   2. 当需要在短时间内多次采集样本时，推荐使用该技术。
   3. 操作过程中应采用无菌技术并使用无菌设备，以最大限度降低感染风险。
   4. 选择用于导管置入的动物时，应评估其健康状况及性情是否适合耐受操作和导管维护。
4. 术后护理与监测
   1. 导管置入可能引起不适，术后应给予适当的镇痛处理。
   2. 在导管留置期间，必须对动物进行密切监测。
   3. 应定期检查导管部位及系统是否存在感染、堵塞或移位的迹象。
   4. 所有采样操作过程中均应保持严格的卫生条件和无菌操作。

关键术语与定义
小鼠下颌区域存在一条下颌/面静脉，沿下颌骨走行。两条血管在下颌线下方汇入颈静脉，因此易于接近。可通过交替使用左右两侧，从任一血管进行多次采血。但每侧采血间隔不应短于5-7天。
从下颌静脉采血时，针头插入深度至关重要。若插入深度超过4-5.5 mm，可能损伤头部、颈部及口腔腔隙内的肌肉、神经及其他血管。继发并发症包括因大量出血导致的低血容量、口腔内液体引起的窒息，以及影响进食和饮水的口腔结构损伤。
动物固定对于面静脉和下颌静脉采血的成功至关重要。若抓握背部皮肤过紧，可能限制面静脉的血流，导致采集血量减少。面静脉与下颌静脉采血所获血量存在个体差异。必须严格控制采血量，确保不超过机构政策及经批准的动物实验方案所规定的存活动物最大采血限量。在采集到目标血量后确保有效止血，可防止额外或过量失血。
从隐静脉采血是另一种适用于多次采血的可行替代方法。外侧隐静脉是一条浅表血管，沿跗关节背侧而后外侧行走。尽管该方法在外观上可能比经眼眶后采血更易接受，但由于所需操作准备以及该方法无需麻醉，实际上可能对动物造成更大应激。隐静脉采血可能出现的并发症与穿刺部位相关。若针头未准确刺入血管，血液可能在皮下积聚，形成血肿。其他潜在问题包括瘀伤、可能的感染以及患肢跛行。该方法需要一定培训，但易于掌握。每次采血量为10–150 µL，具体取决于采样频率。由于样本可能混入组织成分，其质量存在变异性。同一后肢在24小时内采血不应超过四次。
本视频将帮助您解答的问题
采血方法可能影响样本分析结果。操作人员的技术水平直接影响样本质量及动物福利。麻醉剂的使用也可能影响样本质量。本文所述方法均在未使用麻醉的条件下进行，从而排除了该变量的影响。此外，所有这些技术均可用于对动物造成最小不适的多次采样。