基础护理操作程序

此处所述的所有动物实验操作必须遵循机构动物伦理指南，并经IACUC批准。所有操作必须遵守3R原则——替代（Replacement）、减少（Reduction）和优化（Refinement），并由经过培训的人员执行。

1. 免疫功能健全（常规）小鼠的处理

研究表明，小鼠的免疫系统疾病与人类非常相似。由于这些动物的免疫能力有限，因此在饲养和护理过程中已设计出相应的操作规程，通过使用工程控制措施、动物护理人员的个人防护装备以及标准操作程序，以最大限度地降低感染性疾病的风险；这些措施可有效减少动物接触的笼具及其他设备受到污染的可能性。

1. 从运输容器中拆包：接收来自其他机构或动物供应商的动物会对动物设施内已饲养的动物带来风险。在运输过程中，动物运输箱可能接触到病原体。因此，在拆开运输容器时应遵循正确的操作程序。
   1. 处理动物时，最低限度的个人防护装备（PPE）要求包括手套、洁净的实验服或刷手服、颗粒物防护口罩和护目镜。
   2. 选择合适的笼具，包括带金属网盖的笼盖和屏障顶盖。笼具内应配备适当的垫料和筑巢材料。所有笼具应在动物到达前准备妥当并放置于接收区域。
   3. 动物到达后，将运输箱置于安全且温控的房间内，然后检查容器是否有损坏。
   4. 使用适当的消毒剂对运输容器的外表面进行消毒，以杀灭任何有害病原体。确保消毒剂与箱体接触时间符合制造商的建议，通常为15–30分钟。
   5. 将容器放入动物转移站（ATS）中。ATS在罩内提供经HEPA过滤的气流，通过在操作者与工作区之间形成负压空气屏障，提供过敏原防护。这可最大程度减少动物毛发/皮屑和笼具垫料材料的暴露。单向气流还可保护动物免受周围房间空气的影响，降低污染风险。
   6. 打开运输容器后，评估动物的整体健康状况，并记录任何受伤或生病的动物。
   7. 将动物按适当群体大小放入组装好的笼具中。分组应符合空间管理规定以及其将要参与的实验方案要求。
   8. 用金属网盖盖住笼具，并固定网盖上的隔板，将网盖分为两个区域。
   9. 选择合适的食物，并将其放置在金属网盖的一侧，另一侧保持开放，以利于空气流通。
   10. 通过饮水瓶或自动供水系统提供饮水。新生断奶小鼠使用饮水瓶，以确保其能够维持足够的水合水平。对于配备自动供水系统的IVC笼具，在将笼具放上架子前需对供水管进行充水。
   11. 将笼具放置在架子上。若使用IVC笼具，需检查笼具是否完全卡入架子，并确认吸水管已牢固连接至供水系统。
2. 常规小鼠笼具更换
   1. 动物笼具在动物转移站（ATS）内进行更换。每次操作结束后应对ATS进行消毒。
   2. 每次只能打开一个笼具。
   3. 将已准备好适当垫料和筑巢材料的笼具带入动物房，并将少量笼具放入ATS中。
   4. 配备内置吸水管的IVC笼具必须预先充水，以迫使水进入吸水管，排出吸水管内的空气死腔。若未正确充水，小鼠可能无法对吸水管施加足够压力以排出其中的空气。
   5. 处理动物时，最低限度的个人防护装备（PPE）要求包括手套、洁净的实验服或刷手服、颗粒物防护口罩和护目镜。
   6. 待更换的动物笼具被移入新笼具后，再放入ATS中。
   7. 使用适当的抓取技术（如手捧法或隧道法）转移动物，以尽量减少应激。在不同笼具之间或不同小鼠组之间应更换手套，或使用无毒化学消毒剂对手套进行消毒。
   8. 研究表明，将小鼠的筑巢区域一并转移至清洁笼具中，有助于其适应新环境，尤其是群养雄性小鼠。其他环境丰富化物品也应一同转移至新笼具。
   9. 当笼盖或饲料器放置到新笼具后，添加饲料。
   10. 将屏障顶盖盖在新笼具上，然后将笼具放回架子。
   11. IVC笼具必须正确对接至架子，以确保通风和供水阀门正常启动。

2. 免疫缺陷小鼠的处理

1. 从运输集装箱中拆箱
   1. 免疫缺陷动物必须在无菌条件下拆包。所有操作免疫缺陷小鼠的人员必须穿戴经蒸汽灭菌的实验服、口罩、头帽和无菌手套。在处理这些动物时，应始终采用无菌技术。
   2. 所有设备和笼具应通过蒸汽、紫外线辐射灭菌，或使用消毒剂浸泡进行化学灭菌  至少30分钟。无菌笼具的处理有两种选择：一种是经过包裹并采用蒸汽灭菌的标准笼具，另一种是由供应商通过辐照等方式灭菌的笼具。这些笼具均为一次性使用单元。
   3. 在超净工作台内操作小鼠前，需在开启风机的情况下，用适当的消毒剂喷洒工作台内部。风机应始终保持开启状态，以维持无菌环境。每次使用后，需用消毒剂喷洒工作台，清除所有残留物，再用70%乙醇喷洒一遍。
   4. 理想情况下，接收免疫缺陷小鼠需要两人配合：一人使用无菌技术操作动物（无菌操作员），另一人处理污染物品（非无菌操作员）。非无菌操作员仍应穿戴洁净的长袖防护服、实验服或罩衫、口罩、头罩及无菌手套，以防在需要伸入生物安全柜时污染无菌内部环境。
   5. 准备层流罩，方法如前所述。建议使用专用于免疫缺陷动物的层流罩。层流罩应配备紫外线（UV）杀菌灯，用于在使用间隔对罩内进行消毒。需使用定时器，以确保层流罩表面得到充分的紫外线照射。
   6. 将所有放入生物安全柜的物品外部喷洒适当的消毒剂，包括食物、水和笼具的外包装。
   7. 在将运输箱放入生物安全柜之前，需喷洒适当的消毒剂。放入生物安全柜后，运输箱须保持封闭状态15-30分钟。
   8. 指定的动物操作人员在超净台内打开无菌饲料和水。
   9. 非无菌操作人员在超净工作台内打开运输箱。非无菌操作人员须注意避免接触超净台内表面及运输箱内部。
   10. 实验操作人员打开无菌笼盒，在笼盖上放置食物和水，完成笼盒的准备工作。随后将小鼠从运输箱中取出，放入无菌笼盒中。
   11. 由无菌动物操作人员记录动物状况。任何表现异常或有明显损伤的动物将被隔离。所有标记为需要兽医关注的动物笼具，将最后进行处理、换笼或实验操作，以减少对其他动物的潜在污染。
   12. 非无菌操作人员将把装有动物的笼盒从罩内移出。笼盒可作为静态笼盒放置在标准笼架上，或作为独立通气笼盒（IVCs）放置在通风笼架上。对于独立通气笼盒（IVCs）中的小鼠，应提供额外的筑巢材料以帮助其体温调节。
   13. 动物饲养员应在处理每个运输容器后更换手套，以避免不同动物群体之间可能的交叉污染。运输容器编号应记录在笼具卡片上，以便在动物出现疾病时追踪其来源。
   14. 未使用的物品只要原容器能够重新密封，即可保存以供将来使用。未食用的食物需从房间内移除。
   15. 小鼠在用于实验前应至少经过一周的适应期。
2. 免疫缺陷小鼠的换笼操作
   1. 小鼠笼具每周至少更换一次，必要时可增加更换频率。
   2. 准备生物安全柜、准备笼具以及人员个人防护装备的步骤与动物拆包时相同。
   3. 动物应通过杯式抓取法或隧道式抓取法进行转移，以尽量减少应激。指定的动物操作人员应在每处理5–10个笼盒后、手套破损或受到污染时，或发现动物出现疾病症状时，更换手套。
   4. 任何出现动物生病迹象的笼具将被安排在换笼顺序的最后，以避免健康动物可能暴露于病原体或污染物。
   5. 如果在下次计划更换笼具之前需要向笼内添加食物和/或水，则必须在准备好的生物安全柜中以无菌操作方式进行。

关键术语与定义
饲养/笼具
小鼠和大鼠主要饲养在底部为实心、内含垫料的鞋盒式笼具中。标准的小鼠鞋盒笼提供75平方英寸的底面积，足以容纳最多五只成年小鼠。然而，实验设计可能要求每组四只小鼠。在此情况下，应在接收动物时即按四只一组进行分组饲养，以避免实验开始时对社会群体造成干扰。通常，大鼠笼具最多可容纳两只完全成年的动物。若大鼠需长期饲养，应采用成对饲养方式。笼具可以是静态的，也可以是独立通风笼具（IVC）。静态笼具上方覆盖金属网盖，或放置在架子上，由上方的隔板作为笼顶。过滤材料可作为罩帽覆盖在金属网盖上，或作为滤纸片覆盖在架子隔板上。IVC由笼体、金属网盖和罩帽组成，放置在提供气流进入笼内的架子上。使用IVC可减少更换笼具的频率，相较于静态笼具更少更换。标准笼具系统提供水源和饲料分配区域。 
水源可通过置于笼顶的水瓶提供，也可通过饮水管供给，饮水管是动物笼具的内置组件。当笼具安装到架子上时，水被输送到饮水管中，构成自动供水系统，旨在满足整个动物设施内动物的饮水需求。笼具必须正确准备，以确保动物得到适当护理。饲料可通过置于笼内的饲喂器提供，或利用金属网盖的一部分区域储存饲料。饲料放置位置应避免被动物污染。《实验动物护理与使用指南》（"指南"）规定，所有笼具设备必须至少每两周消毒一次。某些笼具及配件可能需要更频繁更换，具体取决于 enclosure 内的气味和氨气水平。通常，IVC 每两周更换一次，除非笼内饲养四只或以上雄性小鼠，或一只带仔雌鼠；此类 enclosure 可能需要每周更换。由于换笼过程可能使免疫缺陷小鼠暴露于病原体，因此对免疫缺陷小鼠的笼具更换应尽可能减少频率。
饮食
现有多种饲料配方，其蛋白质、碳水化合物和脂肪含量各不相同。通常，饲料应包含15–19%的蛋白质、44%的碳水化合物以及4–9%的脂肪。高脂肪饲料常用于繁殖种群，以促进生殖能力。由于饲料可能成为免疫缺陷小鼠的污染源，必须经过蒸汽灭菌或辐照处理。经高压灭菌处理的饲料需特别配制以耐受该过程。然而，辐照处理不会改变饲料成分。水是免疫缺陷动物另一潜在污染源。水应通过高压灭菌或过滤处理，后者包括使水通过紫外线滤器。在高压灭菌器中对水进行蒸汽灭菌时，需用铝箔覆盖单个水瓶。带饮水管的瓶盖则需单独装入高压灭菌袋中灭菌。自动供水系统可配合一系列过滤装置使用，包括颗粒过滤器和紫外线灯过滤器。
环境
动物饲养设施内的环境条件必须严格控制。联邦法规和指南已为常用实验动物的护理与操作制定了标准。光照、环境温度、湿度和气流均需满足动物的生理需求。除免疫缺陷动物需要略高的室温外，其余参数与常规动物相同。无胸腺裸鼠还需在笼内额外提供垫料和纸条类筑巢材料，以辅助体温调节。
动物房应维持在68–72°F的温度范围内，相对湿度为40–60%。湿度低于40%可能导致小鼠和大鼠出现环尾症，即尾部皮肤干燥并紧缩缠绕尾部，严重时可导致尾部组织脱落。光照周期应设置合理，避免因光周期或光照强度不当而对动物造成应激。通常采用12小时光照、12小时黑暗的光周期。光照强度应根据房间内的活动情况调整。技术人员在动物房工作时可使用较高光照强度，但在所有操作结束后应将光照降低至约325勒克斯（lux）。灯光应由定时器控制，并通过监测系统验证光周期的准确性。根据《指南》要求，动物房每小时必须至少进行10–15次完全新鲜空气的换气。换气有助于减少动物房内的微生物和异味。在动物密度较高的房间，每小时换气次数可能需要增加。
笼具层面的环境因素包括笼具类型、笼内使用的基质、供水系统和饮食。除科学理由充分或动物与其他个体完全不相容外，社会性群养为强制要求。提供环境丰富化措施，如纸质小屋和筑巢材料，可使动物表现出物种特异性行为，从而降低应激水平，提升整体福利。筑巢材料还能形成富含镇静信息素的睡眠区域，有助于在同一笼内饲养多只雄性小鼠。在更换笼具时，应将原有的筑巢材料转移至清洁笼中，以帮助减少雄性小鼠进入新环境时可能发生的攻击行为。
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在生物医学研究中，实验动物的正确护理与操作对实验结果至关重要。相关法规和既定指南规定了许多操作规范。然而，对于具有免疫缺陷的小鼠和大鼠，还需采取额外措施，以防止其意外暴露于机会性病原体。当操作严格遵循既定程序时，实验动物的健康与福利得以提升，从而获得更可靠的实验结果。