富集培养：在选择性和鉴别培养基上培养需氧与厌氧微生物

1. 准备

1. 开始前，彻底洗手并戴上合适尺寸的手套。
2. 用5%次氯酸钠（漂白剂）对工作台面进行消毒，并彻底擦干。
3. 将接种环放入一个空的120 mL锥形瓶中，确保操作过程中不接触实验台面。

2. 培养基与培养条件

1. 从冰箱中取出四块甘露醇盐琼脂（MSA）、伊红美蓝琼脂（EMB）和八块胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板（可购自商业供应商）。
2. 将平板放置在已清洁的工作区域上。
3. 准备以下液体培养物：Escherichia coli、Staphylococcus aureus、Staphylococcus epidermidis 和 Proteus vulgaris。注意：由于这些为需氧微生物，试管帽应略微松开。
4. 将所有培养物置于已清洁工作台面上的试管架中。

3. 转接培养物与培养

1. 站立或坐在实验台前，确保所有材料均在触手可及范围内。
2. 使用无菌技术将细菌转移至平板时，首先将接种环灼烧至发红发亮，然后在空气中冷却。
3. 在接种环冷却的同时，取一管大肠杆菌（E. coli）液体培养物，用小指打开管盖。
4. 迅速灼烧试管口，以防止污染。
5. 将接种环浸入培养管中，然后在EMB平板的第一象限区域划线接种。
6. 完成第一区划线后，再次灼烧接种环，然后进行第二区划线，仅与第一区交叉一到两次。此操作有助于分离单菌落并检测是否存在污染。
7. 重复上述步骤，直至完成平板上全部四个象限的划线。
8. 接着，以相同的划线接种方法，依次将其余四种微生物分别接种，最终每种微生物应各有一块MSA平板、一块EMB平板和两块独立的TSA平板。
9. 所有微生物接种完成后，将接种环进行最后一次灼烧灭菌，并妥善存放。
10. 将每种微生物对应的一块TSA平板放入气体袋中，轻轻摇动气体小包后将其与平板一同置入密封舱内，确保密封严密。
11. 将所有平板于37°C条件下过夜培养。
12. 最后使用5%次氯酸钠溶液对工作台面进行一次彻底消毒。

4. 读取并记录结果

1. 从培养箱中取出培养皿，放置在干净的实验台上
2. 在实验记录本中记录每个培养皿上微生物的生长情况。特别注意详细记录以下内容：
   1. 每种接种菌株在各培养皿上的菌落数量和大小（如有）
   2. 在甘露醇盐琼脂（MSA）平板上生长菌落周围琼脂的外观
   3. 在伊红美蓝琼脂（EMB）平板上生长菌落的外观
   4. 置于气体包装外部与内部的胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板之间生长差异