Drosophila 神经肌肉接头（NMJ）定量分析：一种评估突触形态与功能的方法

- 首先，对 Drosophila 幼虫 进行 免疫染色，使用 标记物 来 突出 神经肌肉接头 （NMJs） 或 神经肌肉 接头 的 不同 特征。该 区域 是 运动神经元 轴突 末梢 与 肌肉 接触 的 部位，其 形态 可 作为 突触 功能 的 读出 指标。该 形态 常用于评估突触功能。

的 轴突 终止 在 若干 分支 那个 表格 膨出 称为 突触小结 神经递质 是 释放 从 突触小结 和 导致 肌肉 收缩 区域 的 神经递质 释放 是 称为 活性 区域。 此处 一 标记物 是 特异的 用于 a 突触 蛋白 那 轮廓 的 神经肌肉接头， 和 的 其他 标记物 是 用于 a 蛋白 当前 在 活性 区域

接下来， 获取 神经肌肉接头 图像 使用 显微镜技术 和 定量地 评估 他们的 形态学 与 半自动 图像 分析 软件 应用 a 预设 系列 的 软件 命令 至 的 图像 的 输出 文件 包含 分析 神经肌肉接头 图像 和 形态学 结果。 的 特征 那 能 是 测量的 包括 数量 和 表面 面积 的 突触小结， 神经肌肉接头 长度 和 分支 数量， 数量 的 未连接 神经肌肉接头 区室， 和 数量 的 活性 区域。

在 下述 示例 中，我们 将 分析 用 DLG1（一种 Drosophila 突触后 标记物）和 BRP（一种 突触 活性区 标记物）染色的 果蝇 NMJ 形态 结构。

- 对于 这 方案 生成 图像 堆叠 的 神经肌肉接头 和 保存 它们 作为 个体 TIFF 文件 其中 通道 1 显示 DLG1 染色 或 相似的 标记物 和 通道 2 显示 BRP 染色。 至 开始， 创建 Z 投射 和 超堆栈 的 的 神经肌肉接头 图像 文件。 开放 的 插件 选项 和 选择 果蝇 神经肌肉接头 形态测量学

现在， 识别 的 独特 文件 字符串 那 的 显微镜 有 指定 至 的 图像 系列 当 储存 它们 作为 TIFF 这 将 是 在 的 结束 的 的 图像 名称 复制 和 请提供需要翻译的源文本内容。 的 字符串 给定 到 的 最低 平面 和 通道 数量 进入 的 独特 文件 字符串 设置 窗口。 然后 选择 的 亚宏观 转换 到 堆栈 和 选择 的 目录 或 文件夹 其中 的 图像 是 位于

对于 每个 图像 文件 二 新 文件 是 制成 与 的 默认 名称 堆叠 和 扁平 堆栈 随后 由 的 原始 图像 名称 该 原始 文件 可以 然后 是 已删除 到 保存 储存 空间 接下来， 从 的 果蝇 神经肌肉接头 形态测量学 界面, 选择 的 定义的 感兴趣区域 亚宏观 和 选择 的 图像 文件 目录

作为 的 首先 投影 打开， 选择 的 徒手 筛选 工具, 然后 使用 的 小鼠 到 定义 a 区域 含有 a 完整 神经肌肉接头 末端 的 兴趣。 一旦 已选， 点击 好的 在 的 明确的 末端 窗口 继续 进行中 这 直到 的 神经肌肉接头 末端 是 定义的 在 全部 的 的 投射。 该 大体的 进展 的 过程 自动地。 对于 每个 图像 文件 一 新 文件 是 制成 与 的 默认 名称 感兴趣区域 随后 由 的 原始 图像 名称

至 量化 的 神经肌肉接头 特征， 首先 开始 至 的 果蝇 神经肌肉接头 形态测量学 界面 和 设置 的 比例尺 对于 例如， 如果 一 像素 的 的 图像 对应 到 0.72 微米， 设置 比例尺 像素 到 1 和 比例尺 距离 到 0.072. 然后 选择 的 亚宏观 分析， 和 如果 那里 是 二 通道 图像， 也 切换 等待。 按压 好的 和 当 提示， 选择 的 图像 文件 目录 的 处理 时间 能 是 若干 分钟 每 突触

之后 的 分析， 新 图像 文件 用于 每个 分析 突触 是 储存的 在 的 亲本 文件夹， 和 的 定量的 测量 是 在 的 results.txt 文件 检查 全部 的 图像 和 排除 图片 与 分割 错误。

对于 例如， 部分 的 的 突触 末端 可能 不 是 包含 在 的 黄色 轮廓 部件 的 的 背景 可能 是 包含 在 的 突触 末端 A 蓝色 骨骼 线 可能 延伸 超越 的 突触 末端 有 可能 是 太 许多 活性 区域, 或 一些 活性 区域 可能 保持 未检测到