细胞的过碘酸-雪夫染色：一种体外检测外周血单个核细胞糖原水平的技术

外周血单个核细胞（PBMCs）是具有单个大细胞核的循环血细胞，包括B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤细胞、单核细胞和树突状细胞。PBMCs在细胞质中以糖原（一种支链多糖）的聚合形式储存多余的葡萄糖。

为了检测PBMCs中糖原的存在，将分离的PBMCs均匀涂布在玻璃载片上制成涂片。用甲醛溶液（一种交联细胞生物分子的固定剂）处理细胞，以保持PBMCs的结构完整性。

将载玻片部分浸入淀粉酶溶液中。该酶进入细胞并水解经处理细胞中的糖原。这会产生两个不同的细胞群体——经酶处理的、缺乏糖原的细胞和未经淀粉酶处理的、富含糖原的细胞。

加入高碘酸溶液覆盖样本，该溶液可将糖原分子中的羟基氧化转化为醛基。

用清水冲洗载玻片，以终止氧化反应并去除多余的过碘酸。将载玻片用希夫试剂处理，该试剂与经过碘酸处理的糖原产生的醛基发生反应，生成不溶性的品红色复合物。

加入封片剂以在成像过程中固定细胞。放置盖玻片，使封片剂均匀覆盖整个载玻片表面，以获得更清晰的观察效果。对染色后的细胞进行成像。

未经淀粉酶处理的细胞含有品红色的糖原颗粒，而经酶处理的细胞中则无此颗粒。

在此步骤中，将载玻片置于平坦表面上。在样本上加入 2 毫升过碘酸溶液，在室温下孵育 5 分钟。然后用蒸馏水冲洗载玻片数次。在载玻片上加入 2 毫升希夫试剂，于室温孵育 15 分钟。

随后，用蒸馏水清洗载玻片5分钟，然后使其自然晾干。接着，在载玻片上滴加100 µL封片剂，并用一张大的盖玻片覆盖；或者滴加50 µL，使用两张小的盖玻片。之后，在盖玻片边缘涂抹透明指甲油，室温下静置过夜使其完全干燥。

然后，使用100倍物镜通过双目光学显微镜获取图像。