细胞高碘酸-希夫染色:一种检测外周血单核细胞中糖原水平的体外技术

外周血单核细胞（PBMC）是具有单个大细胞核的循环血细胞，包括B淋巴细胞和T淋巴细胞、自然杀伤细胞、单核细胞和树突状细胞。PBMC 以聚合物形式将多余的葡萄糖以糖原（一种支链多糖）的形式储存在细胞质中。

为了检测PBMC中糖原的存在，请在载玻片上制备分离的PBMC的均匀涂片。用福尔马林（一种固定溶液）处理细胞，可交联细胞生物分子，保持PBMC的结构完整性。

载玻片部分浸入淀粉酶溶液中。这种酶进入细胞并水解处理过的细胞中的糖原。这导致了两种不同的细胞群——酶处理的、糖原缺陷的细胞和未淀粉酶处理的富含糖原的细胞。

过碘酸溶液覆盖它们，该溶液将糖原分子的羟基氧化转化为醛。

水冲洗载玻片以停止氧化反应并去除多余的过碘酸。用希夫试剂处理载玻片，希夫试剂与经过碘酸处理的糖原的醛基反应，生成不溶性洋红色复合物。

成像过程中应用封片介质以限制细胞。放置盖玻片，将安装介质铺在整个载玻片表面上，以获得更好的可视化效果。对染色细胞进行成像。

未经淀粉酶处理的细胞含有洋红色糖原颗粒，这在酶处理的细胞中不存在。

在此步骤中，将载玻片放在平坦的表面上。在样品上涂抹 2 毫升过碘酸溶液，并在室温下孵育 5 分钟。然后，用蒸馏水冲洗载玻片数次。在载玻片上涂抹 2 毫升 Schiff 试剂，并在室温下孵育 15 分钟。

随后，用蒸馏水清洗载玻片 5 分钟，然后风干。接下来，在载玻片上涂上 100 微升封片介质，并用一个大盖玻片覆盖它，或涂上 50 微升并使用两个小盖玻片。之后，在盖玻片的边缘涂上透明指甲油。让它们干燥过夜。

然后，使用双目光学显微镜使用 100X 物镜获取图像。