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要使用斑点印迹测定法定量病毒 DNA，请从分离的病毒 DNA 悬浮液开始。用碱性溶液处理，将双链DNA变性为单链，以便随后杂交。
用预润湿的尼龙膜组装点印装置。将变性病毒 DNA 和线性化标准质粒 DNA 溶液加载到孔中。施加适当的真空，促进有效的带负电荷的病毒单链DNA转移，并通过静电相互作用结合到带正电荷的膜表面，形成点状图案。
运行后，用柠檬酸钠缓冲液洗涤膜，有助于提高测定灵敏度。干燥后，将膜暴露在紫外线下，将印迹的 DNA 交联到膜上。
在杂交缓冲液中加入热变性、非异源 DNA 片段和病毒基因组特异性放射性磷标记的 DNA 探针悬浮液到膜中。孵育，促进杂交。
DNA 片段充当封闭剂，与剩余的膜区域结合，最大限度地减少非特异性探针结合。放射性探针与病毒单链DNA上的互补序列杂交。
用洗涤缓冲液洗涤以去除未杂交的探针。使用荧光粉图像扫描系统，量化与膜上病毒基因组杂交的放射性探针发出的放射性信号，以获得点印迹信号。
从标准曲线来看，膜上每个点的信号强度可用于计算样品中病毒DNA的量。
要进行点印迹测定，请通过在水或 Tris-HCl 缓冲液中将 AAV 载体基因组质粒 DNA 稀释至每微升 10 纳克来制备质粒 DNA 标准品。将 25 微升等分试样的稀释质粒 DNA 转移到新鲜管中，并用适当的限制性内切酶在 50 微升反应体积中线性化一小时。
将 450 微升水或 TE 加入装有消化质粒 DNA 标准品的试管中，并充分混合。然后，将 70 微升该混合物转移到装有 1,330 微升水或 TE 的新 1.5 毫升微量离心管中，以制备稀释的质粒标准品。
要设置点印迹装置，请使用剪刀将印迹膜切割成适合样品和标准品数量的大小。将膜用水浸泡 10 分钟，然后将其放在印迹装置上。然后，盖上未使用的井。向将装载样品的孔中加水。使用真空吸尘器，将水拉过井，检查是否有错误，然后重新拧紧螺钉。如有必要，请重新测试。
将400 微升每种稀释的质粒 DNA 标准品施用于每个孔中，并运行四条标准稀释液泳道。使用标准摘要的两个单独等分试样，并一式两份加载每个等分试样。然后，每孔施用 200 微升每个病毒 DNA 样品。施加温和的真空，使 DNA 溶液通过孔汇集。然后，一旦所有孔都排空，通过调整三通阀释放真空。
向每个孔中加入 400 微升 1X 碱性溶液。然后，等待五分钟，然后重新应用真空以清空孔。重新施加真空并拆卸印迹装置。然后，取出膜并用 2X SSC 冲洗。
将膜放在干净的纸巾上，DNA结合的一面朝上，以去除多余的缓冲液。使用适当的 UV 交联剂将印迹的 DNA 紫外交联到膜上。该膜现在已准备好进行杂交。
将膜放入杂交瓶中，DNA结合面朝上。用 5 至 10 毫升预热的杂交缓冲液冲洗膜，然后丢弃缓冲液。然后，加入 10 毫升预热的杂交缓冲液，并将瓶子放入设置为 65 摄氏度的旋转杂交烘箱中。旋转瓶子至少五分钟。
将变性精子DNA和放射性探针快速加入瓶中的杂交缓冲液中，摇动10秒混合。将瓶子放回 65 摄氏度的烤箱中，并在 65 摄氏度下旋转孵育至少四个小时。
杂交完成后，停止旋转，取出杂交瓶，然后将放射性探针溶液倒入带有防漏塞密封盖的 50 毫升锥形管中。要洗涤膜，请将 20 至 30 微升预热的洗涤缓冲液加入杂交瓶中，并旋转 5 分钟。再重复两次洗涤。
第三次洗涤后，从杂交瓶中取出膜，并用纸巾从膜上去除多余的缓冲液。然后，将膜放入透明塑料纸架中。使用盖革计数器检查膜上的放射性信号。
[颤动]
将擦除的荧光粉成像屏幕暴露在膜上后，使用荧光粉图像扫描系统扫描屏幕，并获得每个点的信号强度数据。
