从小鼠幼崽大脑中磁分离小胶质细胞

小胶质细胞——脑内常驻的巨噬细胞——表达CD11b，一种细胞表面整合素。

为了从幼鼠脑中分离小胶质细胞，将大脑碎片放入含有木瓜蛋白酶（一种蛋白水解酶）和脱氧核糖核酸酶的消化管中进行消化。

将试管置于机械解离仪上。运行过程中，解离仪通过机械方式破坏组织。

木瓜蛋白酶消化组织的细胞外基质，使细胞（包括小胶质细胞）释放到悬浮液中。脱氧核糖核酸酶降解悬浮液中的游离DNA，防止细胞分离效率降低。

离心。通过移液完成机械解离。将悬液经细胞滤网过滤，以去除碎片和细胞团块，获得均一的单细胞悬液。

使用偶联了抗CD11b抗体的超顺磁性微珠进行孵育。这些微珠可特异性结合表达CD11b的细胞，包括小胶质细胞。

孵育结束后，离心。弃去含有未结合磁珠的上清液。用缓冲液重悬细胞。将细胞悬液加载至置于磁力架上的层析柱中。该层析柱包含带有铁磁性磁珠的基质。

当置于分离器上时，柱内的球体可增强磁场，使与微珠结合的CD11b+细胞滞留在柱内，而其他细胞则流过。

从分离柱上取下，并用缓冲液将CD11b+细胞从柱子上洗脱下来。离心悬浮液，并将CD11b+细胞重悬于小胶质细胞培养基中。

分离的细胞已准备好进行后续分析。

根据此表格配制解离混合液。将12个脑组织样本转移至C管中，每管解离组织总重量为1.2克。随后，将C管置于带有加热功能的组织解离仪上。在解离仪中启动优化的NTDK程序。离心20秒。通过移液吹打三次完成机械解离。

将细胞转移至四个带有滤网的15毫升离心管中。用10毫升含钙和镁的HBSS冲洗滤网。离心10分钟，然后用10毫升移液器弃去上清液。小心加入10毫升含钙和镁的HBSS，重悬沉淀。再次离心并弃去上清液。

用6毫升分选缓冲液重悬沉淀。再次离心，弃去上清液。然后加入200微升CD11b-磁珠溶液，在4摄氏度孵育15至20分钟。孵育后，用6毫升分选缓冲液重悬沉淀。再次离心，并用8毫升分选缓冲液重悬沉淀。

接下来，按照分离仪上的POSSeL程序制备八根柱子。每次加入1毫升细胞悬液，使细胞通过柱子。用1毫升分选缓冲液，在无菌洗脱板上洗脱CD11b阳性细胞。将细胞收集至50毫升离心管中。

离心并用10毫升冷的小胶质细胞培养基重悬沉淀。计数CD11b阳性细胞。用冷的小胶质细胞培养基重悬细胞，使其最终浓度为每毫升650,000至700,000个细胞。