从小鼠幼崽大脑中磁性分离小胶质细胞

小胶质细胞——大脑驻留的巨噬细胞——表达 CD11b，一种细胞表面整合素。

要从小鼠幼崽大脑中分离小胶质细胞，请在含有木瓜蛋白酶、蛋白水解酶和脱氧核糖核酸酶缓冲液的解离管中取出大脑片段。

将试管放在机械解离器上。在运行过程中，解离剂会机械地破坏组织。

木瓜蛋白酶消化组织的细胞外基质，将包括小胶质细胞在内的细胞释放成悬浮液。脱氧核糖核酸酶降解悬浮液中的游离DNA，防止细胞分离效率低下。

离心机。通过移液完成机械解离。通过细胞过滤器转移悬液以去除碎片和细胞团块，并获得均匀的单细胞群。

与用抗 CD11b 抗体功能化的超顺磁性微珠一起孵育。微珠特异性地与细胞（包括小胶质细胞）上的CD11b结合。

孵育后，离心。除去含有未结合珠子的上清液。将细胞重悬于缓冲液中。加载到放置在磁选机上的色谱柱上。该色谱柱包括带有铁磁珠的基质。

当放置在分离器上时，色谱柱内的球体会放大磁场，将微珠结合的 CD11b+ 细胞保留在色谱柱内，而其他细胞则流过。

从分离器中取出，使用缓冲液从色谱柱中洗脱 CD11b+ 细胞。离心悬浮液并将 CD11b+ 细胞重悬于小胶质细胞培养基中。

的细胞已准备好进行进一步分析。

根据此表制备解离混合物。将 12 个脑片转移到 C 管中，每个解离管的总重量为 1.2 克。然后，将 C 管放在加热的解离器上。在解离器中启动优化的NTDK程序。离心20秒。通过移液三次完成机械解离。

将细胞转移到四个带有过滤器的 15 毫升管中。用 10 毫升含钙和镁的 HBSS 冲洗过滤器。离心10分钟，用10毫升移液器除去上清液。小心地，加入 10 毫升含有钙和镁的 HBSS，然后重悬沉淀。再次离心并除去上清液。

6 毫升分选缓冲液重悬沉淀。重复离心，并丢弃上清液。然后，加入 200 微升 CD11b-微珠溶液，并将试管在 4 摄氏度下孵育 15 至 20 分钟。孵育后，用6毫升分选缓冲液重悬沉淀。重复离心，并用 8 毫升分选缓冲液重悬沉淀。

接下来，按照分离器上的POSSEL程序准备八根色谱柱。通过一次添加 1 毫升细胞悬液将细胞通过色谱柱。用 1 毫升分选缓冲液，在无菌洗脱板上洗脱 CD11b 阳性细胞。将细胞汇集在 50 毫升管中。

心并用 10 毫升冷小胶质细胞培养基重悬沉淀。计数CD11b阳性细胞。将细胞重悬于冷小胶质细胞培养基中，以获得每毫升 650,000 至 700,000 个细胞的最终浓度。