通过结肠组织切片的免疫组织化学分析评估化学诱导的结肠炎

在小鼠中，结肠粘膜层由含有固有层的免疫细胞组成，周围环绕着保护粘膜的紧密堆积的上皮细胞。用葡聚糖硫酸钠进行化学处理会破坏紧密连接，导致上皮细胞损伤，并使管腔微生物能够穿透固有层。

结肠中的微生物识别触发趋化因子分泌，导致免疫细胞浸润和促炎细胞因子的释放。这种过度的免疫反应会导致结肠炎症或结肠炎。

要评估化学诱发的结肠炎，首先使用载玻片，载有固定的、预处理的小鼠结肠组织切片，该切片表现出化学诱发的结肠炎。用对免疫细胞受体具有特异性的一抗混合物处理切片，这些受体与各自的免疫细胞结合。

洗涤以去除未结合的抗体。将组织切片与生物素化二抗一起孵育，二抗与一抗特异性结合。与链霉亲和素-偶联物孵育，链霉亲和素-偶联物与生物素相互作用，形成复合物。

显色底物覆盖组织切片;酶-底物相互作用赋予免疫细胞棕色。用苏木精染料复染切片以染色细胞核。

显微镜下观察染色载玻片。受损区域丰富的棕色免疫细胞表明化学诱发的结肠炎。

对于免疫组织化学分析，在热板上加热切片20分钟后，在PBS中洗涤载玻片3次，每次洗涤10分钟，并用3%过氧化氢孵育10分钟去除内源性过氧化物酶。

孵育结束时，如图所示，在PBS中洗涤样品3次，并用封闭缓冲液阻断任何非特异性结合，在室温下至少一小时。然后，用感兴趣的一抗混合物替换封闭缓冲液，在 4 摄氏度下孵育过夜。

第二天早上，吸出多余的一抗溶液，并在PBS中洗涤载玻片3次。最后一次洗涤后，将载玻片与适当的生物素化二抗混合物一起孵育，然后在室温下用链霉亲和素辣根过氧化物酶复合物标记。

为了可视化免疫反应细胞，用DAB标记样品，直到出现浅棕色或深棕色，并用苏木精和0.3%稀释的氨复染切片。

载玻片干燥后，使用光学显微镜在10倍放大倍率下获得组织切片的明场图像，并使用图像处理程序识别和量化上皮和固有层中标记的免疫细胞群。