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取装有重组丙型肝炎病毒或含有编码分泌荧光素酶报告基因的 RNA 的 HCV 混悬液的试管。
将抗病毒测试化合物和溶剂添加到测试管和阴性对照管中。
测试化合物与 HCV 糖蛋白结合，使病毒灭活。
孵育后，稀释混合物以防止后续步骤中的化合物-细胞相互作用。
将这些稀释的混合物添加到支持HCV复制的肝癌单层上。孵化。
化合物灭活的HCV不能附着在特定的细胞表面受体上，而活性HCV糖蛋白与这些受体结合，促进细胞附着。
去除未吸附的HCV。用缓冲液洗涤并加入培养基。长时间孵育。
结合的 HCV 被内化，释放病毒 RNA 并导致从细胞分泌的病毒蛋白和荧光素酶合成。
收集含荧光素酶的培养上清液。离心并向上清液中加入荧光素酶底物。
荧光素酶氧化基材，发光。
对照孔中的发光高于测试中的发光表明该化合物使病毒失活。
要开始病毒灭活测定，首先，在 96 孔板中每孔将 1 次 10 次接种到第四个细胞。将细胞与 5% 二氧化碳在 37 摄氏度下孵育过夜以进行附着。对于感染，制备高斯荧光素酶报告基因标记的丙型肝炎病毒或HCV颗粒，如文本方案中所述。
在无菌管中，将 100 微升 100 微摩尔 CHLA 或 PUG 与 100 微升 10 混合至HCV 的第四个病灶形成单元或 FFU。对于阳性对照，将 HCV 与肝素混合，终浓度为 1,000 微克/毫升。在37摄氏度下孵育三个小时。
三小时后，在室温下用9.8毫升基础培养基将病毒化合物混合物稀释50倍。然后，制备新的病毒化合物混合物，并立即在基础培养基中稀释该混合物，用于零小时孵育样品。从细胞中取出孵育培养基后，每孔加入100微升稀释的病毒药物溶液，一式三份。
该溶液现在每孔包含 10 到第二个 FFU。在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育三个小时，以允许细胞感染病毒。孵育后，从孔中取出病毒悬液，并用200微升PBS轻轻洗涤细胞两次。
将细胞在 100 微升基础培养基中孵育 72 小时，以进行病毒复制并将荧光素酶报告基因释放到上清液中。然后，将培养物中的上清液收集在微管中，并在4摄氏度下以17,000倍g离心5分钟，以去除细胞碎片。将 20 微升每种上清液与 50 微升高斯荧光素酶测定试剂混合，并在光度计中测量荧光素酶报告基因活性的发光。
