为什么AMPA/NMDA荧光强度比值对靶点验证具有重要意义？

AMPA/NMDA 荧光强度比值可作为突触可塑性以及学习和记忆过程的标志物，为评估化合物对杏仁核谷氨酸能信号传导的影响提供定量读数。

分离AMPA和NMDA受体信号如何支持发现研究流程？

AMPA和NMDA受体荧光的独立可视化可实现对受体表达平衡的精确测量，这对于评估调节突触传递化合物的作用机制至关重要。

哪些定量因变量测量可用于化合物筛选？

对特定感兴趣区域内的AMPA和NMDA受体进行半定量荧光强度测量，可实现不同实验条件下受体表达变化的客观比较。

为何复制要求对跨职能协作至关重要？

重复实验可确保不同实验室和团队之间数据生成的一致性和可靠性，这对于建立对靶点验证结果的信心以及实现可重复的临床前研究发现至关重要。

实施此方法前需要具备哪些统计分析能力？

该方法需要具备定量荧光强度、计算比值以及在组间进行统计学比较的能力，以评估与学习和记忆标志物相关的受体表达的显著变化。

利用近红外荧光与高分辨率扫描测量啮齿类动物脑组织中的蛋白质表达

JoVE Encyclopedia of Experiments

神经科学

0 次观看 • 3:03 分钟 • May 29th, 2025

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取一张载玻片，其上含有经免疫染色标记杏仁核神经元中AMPA受体和NMDA受体的大鼠脑组织切片。

AMPA受体介导谷氨酸诱导的钠离子内流及快速兴奋性突触传递。

相比之下，NMDA受体介导谷氨酸和共激动剂诱导的钠离子和钙离子内流，促进缓慢的兴奋性突触传递。

使用一抗对受体进行染色，并用近红外荧光标记的二抗进行检测。

将载玻片组织面向下放置在近红外扫描界面上。

调整成像参数并开始成像。

激光照射后，AMPA 和 NMDA 受体上的荧光团发出荧光。

近红外成像可最大限度减少自发荧光，从而提高信号清晰度。

高分辨率扫描进一步确保了荧光信号的清晰区分，从而能够精确可视化杏仁核中邻近的AMPA和NMDA受体。

使用成像软件，计算特定兴趣区域内的AMPA/NMDA荧光强度比值，作为学习与记忆的指标。

将载玻片放置在近红外扫描仪的扫描界面上，组织面朝下。使用选择工具同时对多张载玻片进行成像。采用最高质量设置进行成像，分辨率为21微米。在0纳米偏移条件下，将图像导入图像分析软件，用于查看并标记以进行半定量蛋白质分析。

打开图像分析软件后，选择图像所扫描进入的工作区域。随后，在图像分析软件中打开扫描图像以查看扫描结果，并调整显示的波长、对比度、亮度和放大倍数，但不得修改原始图像或总定量发射信号。

在确定用于定量的关键区域后，选择页面顶部的“分析”选项卡，然后选择“绘制矩形”，在需要定量的区域上绘制矩形。要查看矩形尺寸，选择屏幕左下角的“形状”选项，然后选择右下角的“列”。接着，添加“高度”和“宽度”列以确定形状的尺寸。最后，为该形状命名并重复上述步骤。当所有区域均完成取样后，继续通过“列”选项卡中提供的数据进行合并与分析。