使用近红外荧光和高分辨率扫描测量啮齿动物大脑中的蛋白质表达

取载玻片，其中包含杏仁核神经元中对AMPA和NMDA受体进行免疫染色的大鼠脑组织切片。

AMPA 受体介导谷氨酸诱导的钠流入和快速兴奋性突触传递。

相比之下，NMDA 受体介导谷氨酸和共激动剂诱导的钠和钙流入，促进缓慢的兴奋性突触传递。

体用一抗染色，并使用近红外荧光团标记的二抗进行检测。

载玻片组织面朝下放在近红外扫描界面上。

调整成像参数并开始成像。

照射后，AMPA 和 NMDA 受体上的荧光团发出荧光。

近红外成像可最大限度地减少自发荧光，提高信号清晰度。

高分辨率扫描进一步确保荧光信号的清晰区分，从而能够精确地可视化杏仁核中附近的 AMPA 和 NMDA 受体。

使用成像软件，计算特定感兴趣区域的 AMPA/NMDA 荧光强度比，作为学习和记忆的标志。

将载玻片放在近红外扫描界面上，组织朝下。使用选择工具一次对多张幻灯片进行成像。使用最高质量设置对载玻片进行成像，分辨率为 21 微米。在 0 纳米的偏移量内，将图像导入图像分析软件以查看和标记以进行半定量蛋白质分析。

打开图像分析软件后，选择扫描图像的工作区域。然后，在图像分析软件中打开扫描图像以查看扫描结果，并在不改变原始图像或总量化发射的情况下调整显示的波长、对比度、亮度和放大倍率。

确定要量化的关键区域后，选择页面顶部的"分析"选项卡，然后选择"绘制矩形"以在要量化的区域上绘制一个矩形。要查看矩形大小，请选择屏幕左下角的"形状"。然后，选择右下角的列。然后，添加"高度"和"宽度"列以标识形状大小。最后，命名形状并重复。对所有区域进行采样后，继续组合和分析列选项卡中可用的数据。