使用基于水凝胶的微柱开发微组织工程神经网络

从包含微柱的培养皿开始。微柱具有水凝胶外壳和细胞外基质或ECM核心。

将培养基滴入同一培养皿中。

神经元细胞聚集体转移到培养皿中，然后将它们放入其中一个培养基液滴中。

在体视显微镜下观察，并在微柱的两端插入细胞聚集体。

然后，将接种的微柱转移到培养基中以获得细胞活力。

育以允许细胞附着到ECM上。

使用体视显微镜确认细胞附着。然后，加入培养基覆盖培养皿并孵育。

附着的神经元开始通过 ECM 延伸它们的轴突。

定期用新鲜培养基替换半培养基以保持营养水平。

随着时间的推移，轴突生长并跨越微柱的整个长度，形成神经网络。

开发的微组织工程神经网络已准备好重建受损的神经回路。

孵育后立即进行细胞接种。将大约 10 至 20 微升培养基转移到培养皿中放置微柱的两个自由区域。使用微量移液器单独收集神经元聚集体，并将它们转移到含有构建体的培养皿中。用镊子将聚集体移至培养基的小池之一，以保持细胞健康。

体视显微镜下观察时，使用镊子在微柱的一端插入聚集体以进行单向微TENN或在两端插入聚集体以进行双向结构。然后，将接种的微柱移至另一个小培养基池中，以避免脱水并保持聚集体健康。当所有微柱都上样后，在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下孵育 45 分钟，以使聚集体粘附在 ECM 上。

孵育后，使用体视显微镜验证聚集体是否保留在微柱的末端。最后，使用移液器用培养基小心地用培养基淹没含有微TENN的培养皿。将培养皿放入 37 摄氏度和 5% 二氧化碳的培养箱中进行长期培养。