Question 1

为什么在组织学样本制备中需要进行组织固定？

Accepted Answer

组织固定通过防止细胞死亡后自然释放的酶引起的降解来保存细胞和组织结构。固定抑制酶活性并使蛋白质裂解位点变得无法识别。两种主要机制是交联，它形成共价键以使组织变硬，以及凝固，它使用醇类或丙酮使蛋白质脱水以变形其结构。

Question 2

组织固定的两种主要机制是什么？

Accepted Answer

交联涉及蛋白质内部和蛋白质之间的共价键形成，导致组织变硬并抵抗降解。凝固通过醇类或丙酮使蛋白质脱水，变形其三级结构，使疏水区域移至蛋白质表面。凝固固定有助于使石蜡等嵌入介质更有效地渗透组织。

Question 3

福尔马林如何在组织制备中作为固定剂发挥作用？

Accepted Answer

福尔马林，即甲醛溶解在水中，会附着在氨基酸侧链上的伯胺，如赖氨酸和谷氨酰胺，形成稳定的交联键，称为亚甲基桥。这个交联过程本质上是缓慢的，需要1-2天才能完成。福尔马林在磷酸盐缓冲时效果最佳，以保持中性pH值并防止组织伪影。

Question 4

在开始组织固定之前，应考虑哪些因素？

Accepted Answer

考虑样本扩散率：固定剂以与扩散系数和时间相关的速率渗透组织，因此样本应限制在4毫米厚度以确保彻底固定。同时考虑固定剂的体积和pH。固定剂与样本的比例应至少为40:1，以防止试剂耗尽。福尔马林应该用磷酸盐缓冲以保持中性pH并避免组织伪影。

Question 5

在组织学制备中嵌入介质的目的是什么？

Accepted Answer

嵌入介质支持具有与组织本身机械刚度相似的样本。石蜡是最常见的嵌入介质。选择适当的嵌入介质至关重要，因为过硬或过软的介质会导致切片缺陷。在石蜡嵌入之前，样本必须通过用乙醇取代水，然后用二甲苯，最后用加热的石蜡来脱水。

Question 6

冷冻切片与传统的石蜡包埋切片有何不同？

Accepted Answer

冷冻切片通过在OCT（最佳切割温度）介质中快速冷冻组织，然后在保持在-20°C的低温切片机上切片来避免固定。与需要水浴处理的石蜡切片不同，冷冻切片在切片后立即直接放置在带正电的玻璃载玻片上。这种方法通过避免交联反应，更好地保存了蛋白质结构以便于抗体标记。

Question 7

除石蜡外，还有哪些其他的包埋方法？

Accepted Answer

琼脂糖嵌入将样本覆盖在新鲜制备的液态琼脂糖中，随着其冷却，琼脂糖固定组织位置。带有振动刀片的振动切片机从琼脂糖嵌入的样本中切割50-1000 µm厚的切片。通常在染色前从琼脂糖中取出样本，并用真空油脂将其安装在载玻片上。厚的琼脂糖切片最好使用光学显微镜显微镜原理仪器和应用进行高分辨率成像。

制备组织学样品用于光学显微镜技术 - 评估测验