Question 1

什么是质粒，为什么它在细菌转化中被使用？

Accepted Answer

质粒是一种小型、环状的、双链DNA分子，可以通过超螺旋减少其大小，使其能够通过细菌细胞膜孔。质粒包含一个多重克隆位点用于插入 DNA片段、一个DNA复制起始位点以及一个抗生素抗性基因，使转化的细胞能够在含有抗生素的培养基中存活。

Question 2

氯化钙如何使细菌细胞具备受体能力？

Accepted Answer

氯化钙创造了一个富含钙的环境，其中正钙离子中和质粒DNA和细菌细胞壁上的负电荷。这种中和作用减少了静电排斥并削弱了细胞壁，使细胞在热休克过程中能够吸收外源性DNA。

Question 3

在细菌转化的热休克步骤中会发生什么？

Accepted Answer

突然将温度升高至42°C持续30秒会在细胞的内部和外部产生压力差，诱导细菌膜形成孔隙。超螺旋质粒DNA通过这些孔隙进入。热休克后，细胞立即在冰上冷却，使细胞壁自我修复并稳定内部的质粒。

Question 4

什么是转化效率，如何计算？

Accepted Answer

转化效率衡量转化程序的成功率。它是通过将成功的转化子（含有质粒的菌落）数量除以涂布的总DNA量来计算的。这一指标帮助研究人员评估热激法将质粒引入细菌细胞的有效性。

Question 5

在进行热激转化之前，如何准备化学能胜任的细胞？

Accepted Answer

将细菌培养至对数中期，然后离心并用冷氯化钙溶液多次洗涤以去除培养基。最后一次洗涤后，将细胞重悬于氯化钙和15%甘油中，分配到微型离心管中，并在-80°C下储存，待转化使用。

Question 6

为什么在细菌转化过程中保持无菌技术很重要？

Accepted Answer

无菌技术通过防止空气中的污染物进入工作区域，在整个转化过程中保持无菌。文森特酒精灯通过灭菌仪器和试剂的同时，创造一个对流电流，使污染物远离。这确保只有所需的转化细菌在琼脂板上生长。

Question 7

转化细菌平板培养后会发生什么，下一步是什么？

Accepted Answer

将培养板倒置于37°C下过夜孵化以防止冷凝水的暴露。第二天，含有质粒的菌落可见，并且可以计数以计算转化效率。然后，可以在含抗生素的液体培养基中培养所选菌落，以便进一步实验使用 质粒纯化 分离和纯化 的质粒DNA。

细菌转化:热激法 - 评估测验