Question 1

DNA和RNA转染到细胞中有什么区别？

Accepted Answer

DNA转染使用细胞的机制实现蛋白质表达，而RNA转染，特别是双链RNA或siRNA，通过停止翻译关闭特定蛋白质的生产。DNA必须到达细胞核才能有效表达，而RNA在细胞质中起作用。DNA可以稳定地整合到基因组中或暂时表达，而RNA的效果是暂时的。

Question 2

化学转染方法如何将遗传物质输送到细胞中？

Accepted Answer

化学转染使用带正电的载体分子（例如阳离子脂质、磷酸钙或聚合物）与带负电的核酸形成复合物。这些复合物通过静电吸引作用附着到带负电的细胞膜上，然后通过称为内体的膜结合小泡进入细胞，即内吞作用。核酸逃离内体并到达细胞质或细胞核中的目的地。

Question 3

什么细胞条件可以优化转染效率？

Accepted Answer

细胞应处于对数相生长期，并在转染时达到40到80%的融合度。通过前一天收集细胞、计数并以适当浓度接种来准备细胞。添加核酸-试剂复合物后，孵育过夜以允许附着和转染。24小时后用新鲜培养基更换培养基以支持细胞恢复和基因表达。

Question 4

如何在细胞中测量转染效率？

Accepted Answer

连接到插入基因的报告基因系统测量DNA转染效率。绿色荧光蛋白可以直接观察，而荧光素酶活性通过比色测定法测量。通过基因组分析（如RT-PCR）验证稳定转染。对于siRNA沉默的成功，免疫印迹分析决定目标蛋白质水平；成功的转染降低目标蛋白水平，而GAPDH等家庭基因保持稳定。

Question 5

稳定转染和瞬时转染有什么区别？

Accepted Answer

稳定转染发生在转染的DNA整合到基因组中并在细胞分裂过程中持续存在时，产生永久性遗传变化。瞬时转染涉及留在基因组外的DNA，导致持续24至96小时的临时蛋白表达，然后消失。稳定转染通过基因组分析进行测量，而瞬时效应通过报告系统检测。

Question 6

有哪些替代的物理方法可以用来转染细胞？

Accepted Answer

电穿孔法利用电流暂时损伤细胞膜，在细胞修复之前允许DNA或RNA进入。基因枪将涂有DNA的金粒子直接射入细胞；到达细胞质的粒子能够实现转染。这些物理方法补充了化学方法，并且对于对化学试剂有抗性的细胞类型或用于体内应用（如脑组织转染）很有用。

Question 7

如何使用共转染来研究蛋白质突变？

Accepted Answer

共同转染同时将干扰RNA和突变DNA引入同一细胞中。RNAi下调内源性蛋白质，同时产生转染的突变版本。通过比较功能结果——例如荧光报告信号的恢复——揭示突变是否保留或损害蛋白质功能。这种方法能够直接评估突变对细胞过程的影响。

细胞转染介绍 - 评估测验