Question 1

RNA 干扰如何在秀丽隐杆线虫中起作用以使基因沉默？

Accepted Answer

双链RNA在摄入后进入秀丽隐杆线虫细胞。酶Dicer将dsRNA切割成长度为21-23个核苷酸的短干扰RNA（siRNA）。siRNA与RNA诱导的沉默复合体（RISC）结合，并通过互补碱基配对与目标mRNA结合，导致mRNA降解和基因敲低。

Question 2

准备用于RNAi实验的细菌的第一步是什么？

Accepted Answer

将编码目标dsRNA的质粒转化到缺乏RNA聚合酶III并且含有IPTG可诱导的T7 DNA聚合酶基因的HT115(DE3) 大肠杆菌菌株中。同时用空质粒作为对照转化细菌。将转化的细菌涂布在含四环素和卡贝尼西林的LB琼脂平板上，然后在37°C下孵育过夜。

Question 3

为什么在RNAi治疗之前进行蠕虫同步很重要？

Accepted Answer

同步发育阶段确保观察到的表型差异是由基因敲低而非发育变异引起的。将L4幼虫在20°C下转移至RNAi平板过夜，使其成为年轻成虫，然后将它们移至新的平板上6-8小时以产卵。这将产生发育同步的后代供分析。

Question 4

研究人员如何使用RNAi进行逆向遗传筛选？

Accepted Answer

逆向遗传筛选通过从基因库中敲低已知基因并评估表型结果来发现基因功能。研究人员在多孔板上培养表达多个秀丽隐杆线虫基因的dsRNA的细菌，并将其喂给蠕虫。表型效应揭示了正常的体内基因功能，并可自动化以进行数千个基因的高通量分析。

Question 5

细菌培养准备阶段会发生什么？

Accepted Answer

选择一个单一的细菌菌落并将其加入1 ml LB肉汤中，含有100 μg/ml的青霉素。在37°C下摇摆孵育过夜。然后加入5 ml新鲜的LB肉汤，含有青霉素，并在37°C下孵育4-6小时。然后将这种培养物加入RNAi蠕虫平板，并在37°C下孵育过夜，以创建细菌菌落。

Question 6

分析RNAi处理过的蠕虫时可以观察到什么样的表型？

Accepted Answer

将RNAi敲低的蠕虫与对照进行比较，并注意大小、发育阶段、形态和荧光标记蛋白的定位模式的差异。科学家还可以评估发育时间效应，例如在敲低时延迟发育的基因，或参与器官开发与其他生物过程的基因。

Question 7

如何准备显微镜载玻片以观察秀丽隐杆线虫？

Accepted Answer

用贴标签胶带将两个玻璃片粘贴在一起作为间隔物。在它们之间放置一个干净的玻片，并用移液器吸取150 μl的4%熔融琼脂涂在上面。用垂直的玻片盖住，然后轻轻分开。向琼脂垫中添加10 μl的叠氮化钠麻醉剂，用铂制镊子转移蠕虫，加上盖玻片，然后在显微镜下观察。

线虫RNA干扰的简介 - 评估测验