X射线荧光（XRF）

1. 准备氮化硅窗口

1. 使用反向镊子夹取窗口片（若掉落，氮化硅窗口片会碎裂）。
2. 将窗口片放置在载玻片上，平整面朝上。
3. 在窗口片两侧粘贴小块透明胶带，并利用这些胶带将窗口片固定于培养皿底部。
4. 用紫外辐射对培养皿中的窗口片进行灭菌。可先使用紫外交联仪的自动交联程序，随后在超净台内的紫外灯下继续照射约1小时。

2. 将细胞接种到灭菌的氮化硅窗口上

1. 将培养皿倾斜约 45° 角持握。
2. 用移液器沿培养皿侧边加入培养基，缓慢恢复平放，使培养基覆盖皿底表面。
3. 以同样方式将细胞加入培养皿中，随后进行培养。
4. 定期使用光学显微镜观察细胞，以确定其是否达到使用状态。

3. 细胞的固定与干燥

1. 在超净工作台中，按照上述方法倾斜培养皿，轻柔吸除培养基。
2. 加入 PBS，将移液管对准培养皿侧壁并保持倾斜角度，缓慢恢复平放，使 PBS 覆盖玻片表面。
3. 轻柔吸除 PBS。
4. 将培养皿倾斜，移液时对准侧壁，加入足量的 4% 多聚甲醛/PBS（pH 7）以覆盖细胞，室温固定 20 分钟。
5. 移除多聚甲醛/PBS 混合液，并作为危险废物妥善处理。
6. 按照上述方法加入 PBS。
7. 重复步骤 3.5 和 3.6 两次。
8. 轻柔吸除 PBS。
9. 加入 20 mM PIPES、200 mM 蔗糖（pH 7）溶液。
10. 轻柔吸除 PIPES/蔗糖溶液。
11. 重复步骤 2.8 和 2.9 两次。
12. 用 Kimwipe 纸迅速轻拭玻片边缘及背面凹槽，然后将玻片置于洁净表面（如橡胶网格垫）上晾干。

4. 细胞的X射线荧光成像

1. 样品干燥后，使用光学显微镜检查窗口上是否存在细胞。
2. 使用指甲油将窗口固定在光束线提供的铝制样品架上。
3. 将铝制样品架插入运动学支架中，然后将其置于X射线显微镜光学系统的焦点位置，并使样品相对于入射X射线束呈约45°角，安装在样品纳米定位平台上。
4. 离开X射线显微镜仪器区域（通常为铅墙构成的屏蔽室），打开快门，后续步骤均远程操作。
5. 使用菲涅尔波带片或 Kirkpatrick-Baez 反射镜，将单色X射线束（通常能量为10 keV）聚焦至亚微米级光斑尺寸。
6. 利用纳米定位样品平台，并通过预校准的下游闪烁体相机观察X射线束在样品上的位置，确定光栅扫描的合适宽度和高度，以完整采集样品数据。
7. 将波长色散硅漂移探测器置于与入射束成90°角、距离样品约3 mm或更近的位置，以1–2秒的驻留时间采集测试谱。
8. 观察测试谱，选择合适的扫描驻留时间，以确保目标元素获得足够的信噪比。
9. 选择适当的扫描分辨率，该分辨率不应显著小于X射线束在样品上的光斑尺寸，也不应大于样品中感兴趣特征的尺寸。
10. 将扫描参数输入扫描软件，并开始图像采集。