进行一维薄层色谱分析

1. 薄层色谱板

1. 薄层色谱常用的吸附剂包括硅胶、氧化铝和纤维素。市售的薄层色谱板具有多种不同的性质。选择合适的薄层色谱板并裁剪至适当尺寸（通常约 5 cm × 5 cm 即可满足大多数应用需求）。对于玻璃背板的薄层色谱板，应使用直尺和玻璃切割刀在玻璃表面划痕，然后沿划线小心折断。

2. 点样

1. 用合适的溶剂溶解样品，配制成约1%的溶液。若可能，应使用非极性溶剂。若溶质浓度在0.2%至2.0%之间，柱层析馏分及其他稀溶液可直接使用，无需稀释。
2. 用铅笔在距薄层板底部约1.0 cm处划出起始线。点样位置应距离板边缘至少1.0 cm，并进行适当标记。
3. 可使用玻璃毛细管进行点样。将毛细管插入溶液中，吸入少量液体后，轻轻接触薄层板上预定位置，随即移开。
4. 也可使用微升注射器点样，每次点样约取1 μL溶液。
5. 可在同一位置连续点样多次，注意避免点样时破坏吸附剂表面。每次点样后需待溶剂完全挥发后再进行下一次点样。

3. 选择展开溶剂

1. 为获得良好的分离效果，最好使用极性尽可能低的溶剂。薄层色谱常用的溶剂包括正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲醇（表1）。
2. 寻找合适流动相的一个简便方法是将样品点在薄层板上，然后直接向斑点处加入足够量的溶剂，使其扩散形成直径为1–2 cm的圆形区域。标记该圆形的边缘。显色后，合适的溶剂系统应显示出清晰分离的环状条带，最外层的环距离圆心至溶剂前沿的距离约为50%。
3. 可通过选择两种互溶的溶剂并以不同比例混合，来调节流动相的极性。常见的混合溶剂组合有正己烷与乙酸乙酯、二氯甲烷与甲醇。

4. 发育

1. 将点样后的薄层色谱板放入含有适当展开溶剂的展开 chamber 中。溶剂液面应低于薄层色谱板上标记的起始线。
2. 展开 chamber 可以是带盖的玻璃罐，或用铝箔或塑料薄膜封口的烧杯。应选用能容纳薄层色谱板的最小容器。
3. 切勿让溶剂上升至板的顶端。当溶剂前沿（即吸附剂湿润部分的边界）距离板顶端 5–10 mm 时，立即将薄层色谱板从展开 chamber 中取出，并在溶剂干燥前用铅笔标记溶剂前沿位置。

5. 可视化

1. 有色斑点可立即观察到，并用铅笔标记。但斑点常常不可见，因此必须通过其他方法进行显色观察。
2. 薄层色谱（TLC）吸附剂中通常含有荧光指示剂。可使用手持式紫外（UV）灯观察斑点。当薄层板在短波（254 nm）紫外光照射下，能够猝灭荧光的化合物会呈现为暗斑；而具有荧光特性的化合物则会在适当波长的紫外光照射下发出亮斑。用铅笔标记每个斑点的中心位置。
3. 也可通过向薄层板施加显色试剂或染色剂来观察斑点。显色试剂可通过将薄层板浸入试剂中，或用浸透非腐蚀性试剂的棉球擦拭薄层板表面来施加。
4. 20%磷钼酸乙醇溶液适用于大多数有机化合物的显色。将薄层板用加热枪或置于烘箱中加热后，斑点即显现。
5. 其他试剂可用于特定类别化合物的显色。例如，茚三酮试剂用于氨基酸的显色，2,4-二硝基苯肼用于醛和酮的显色。

6. 分析

1. 比移值（R_f）是指化合物在薄层色谱板上迁移的距离与溶剂迁移距离的比值。可通过测量从起始线到斑点中心的距离，并将该值除以从起始线到溶剂前沿的距离来确定。
   
2. 化合物的R_f值是其物理性质的特征值，受温度、样品量、吸附剂的厚度和活性等因素影响。
3. 为确认未知物与已知化合物是否相同，应将标准品点在同一块薄层色谱板上。相同物质将具有相同的特征R_f值。