Быстрое и поверхностным трубопровода для генерации геномной мутантов точки в C. elegans с помощью ТРИФОСФАТЫ/Cas9 Ribonucleoproteins

7.4K просмотров

Цитируется: 1

08:37 мин.

30 апреля 2018 г.

10.3791/57518-v

30 апреля 2018 г.

7.4K просмотров

Harriet Prior^*¹ , Lauren MacConnachie^*¹ , Jose L. Martinez¹ , Georgina C.B. Nicholl¹ , Asim A. Beg¹

¹Department of Pharmacology, University of Michigan

^* These authors contributed equally

Здесь мы представляем метод инженер генома C. elegans используя ТРИФОСФАТЫ-Cas9 ribonucleoproteins и гомологии зависимых ремонт шаблоны.

Больше видео

Редактирование генома C. elegans

подбор мишеней для sgRNA

шаблон ssODN для HDR

генотипирование с помощью рестриктаз

флуоресцентный маркер mCherry

верификация методом секвенирования по Сэнгеру

гомозиготные мутантные животные

экспресс-метод создания мутаций

Chapters in this video

0:04

Название

0:42

Выбор мишени для sgRNA и дизайн матрицы для гомологичной репарации

2:21

Приготовление инъекционной смеси и протокол инъекций

3:18

Скрининг планшетов P0 и отдельных особей F1 mCherry(+)

4:03

ПЦР и генотипирование отдельных червей

5:41

Идентификация и верификация последовательности отредактированных животных

6:34

Результаты: быстрое создание точечных мутаций в гене C. elegans sod-1 с помощью CRISPR/Cas9

7:50

Заключение