Name: tandem mass spectrometry for biomolecule analysis
Uploaded: 2023-04-30T06:31:22.000Z
Duration: 7 min 9 s
Channel: JoVE

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Waves and Their Applications in Technologies for Information Transfer

HS-PS4-5

Tandem Mass Spectrometry

tandem-massenspektrometrie

In Tandem-Massenspektrometrie ist ein Biomolekül Interesse von einer biologischen Probe isoliert und dann in mehrere Untereinheiten fragmentiert, um zu helfen, seine Zusammensetzung und Reihenfolge aufzuklären. Dies wird erreicht, indem er Massenspektrometer in Serie. Das erste Spektrometer ionisiert eine Probe und Filter-Ionen einer bestimmten Masse, Verhältnis zu berechnen. Gefilterte Ionen sind dann fragmentiert und an einem zweiten Massenspektrometer wo sind die Fragmente analysiert.
Dieses Video stellt die Grundsätze der Tandem-Massenspektrometrie, einschließlich Auswahl und Dissoziation Methoden Masse-Verhältnis. Auch ist ein allgemeines Verfahren für die Analyse einer biochemischen Verbindung Tandem-Massenspektrometrie mit Kollision-induzierte Dissoziation verwenden. Anwendungsabschnitt behandelt die Auswahl Reaktion Überwachung, Ermittlung des Proteins nach Übersetzung Änderungen und Erkennung von Tacrolimus-Spiegel im Blut.
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Tandem-Massenspektrometrie verbindet mehrere Phasen der Massenspektrometrie zuerst ein Biomolekül zu isolieren, und ermitteln Sie Aspekte von seiner chemischen Zusammensetzung. Biomoleküle haben große, komplexe Strukturen, macht es schwierig, ihre molekulare Zusammensetzung zu bestimmen. Tandem-Massenspektrometrie wählt ein Molekül des Interesses, die später in mehrere Untereinheiten, die helfen können, seine Identifikation und Sequenz erläutern fragmentiert ist. Dieses Video zeigt die Konzepte der Tandem-Massenspektrometrie, ein allgemeines Verfahren, und einige ihrer Anwendungen in der Biochemie.
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Tandem-Massenspektrometrie beginnt als ein typisches Masse Spec Instrument: mit einer Ionenquelle, der die Probe in Ionen und eine Masse Analysator umwandelt, die trennt die Ionen anhand ihrer Masse-Ladungs-Verhältnis. Eine gemeinsame Masse Analysator, Quadrupol, erlaubt nur Ionen mit einem bestimmten Verhältnis durch, während die anderen in die Stäbe des Apparates Absturz. Die Spezies durchgelassen, nennt man das Vorläufer-Ion, das Biomolekül von Interesse. Das Ion bewegt sich in eine Kollision Zelle, in der Regel ein weiteres Quadrupol, wo Energie angewendet wird, um die Ionen in einem vorhersagbaren Muster zu fragmentieren.
Diese Fragmente verschieben in eine andere Masse Analysator, wie ein Time-of-Flight, trennt diese "Produkt-Ionen". Die Produkt-Ionen werden dann an den Detektor, wie in einem normalen MS-Instrument gesendet. Im Falle eines unbekannten Proteins enthält das resultierende Spektrum zahlreiche überlappende Fragmente, so dass eine endgültige vollständige Sequenz das Biomolekül schwer zu generieren. Allerdings ist die spektrale Muster für ein gegebenes Protein einzigartig. Analyse-Software vergleicht das Spektrum mit einer Datenbank bekannter Peptid Sequenzen, Aufklärung der unbekannten Proteins aus den sich überlappenden Fragmenten.
Je nach der Probe und dem gewünschten Grad der Fragmentierung sind mehrere Fragmentierung Methoden möglich. Fragmentierung Muster hängen davon ab, wie Energie übertragen wird, deren Höhe und Verteilung durch die Vorläufer-Ion. Energie kann über Neutralteilchen, Strahlung oder Elektronen übertragen werden. Mit neutralen Atomen, einen Prozess namens Kollision-induzierte Dissoziation oder CID, bindet sich in erster Linie auf die Peptidbindung zwischen den Aminosäuren, ideal für ihre Identifikation.
Nun, da die Grundlagen der Technik abgedeckt haben, schauen Sie sich bitte an CID Tandemmassenspektrometrie verwendet wird, um eine Komponente der Bakterienzelle Umschläge zu studieren.
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Wie bei allen massenspektrometrische Experimente ist der erste Schritt die Probe zu ionisieren. Bei Biomoleküle geschieht dies in der Regel mit Matrix assisted Laser Desorption oder Elektrospray-Ionisation. Die Vorläufer Ionen-Signal wird dann durch tuning der Ionen-Optik optimiert. Ist das erledigt, das Ziel ist isoliert und die Fragmentierung Methode gewählt wird, z. B. CID.
Die Stärke einer angelegten Spannung, die der Vorläufer-Ionen in die Zelle Kollision beschleunigt, wirkt sich den Grad der Fragmentierung. Diese Spannung wird erhöht, bis der Vorläufer etwa 10 % Häufigkeit im Vergleich zu den höchsten Produkt-Ion ist. Mehrere Spektren sind erworben und im Durchschnitt, bis ein ausreichender Signal-Rausch-Verhältnis erreicht ist. Die Anzahl der Scans benötigt ist abhängig von der Signalintensität des ursprünglichen Vorläufer Ions und kann reichen von 3 bis 300.
Der Analyt in diesem Beispiel Lipid A von Escherichia coli k-12, hatte 19 große Fragmente nach CID. Lipid A allgemeine Struktur ist bekannt, dass Software, die spezifische Zusammensetzung aus der Probe zu rekonstruieren.
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Nun, da wir das Verfahren geschaut haben, betrachten wir einige der Möglichkeiten, die tandem Massenspektrometrie in der Biochemie verwendet wird.
Ein gemeinsame Scanner-Modus im Tandem-Massenspektrometrie ist ausgewählten Reaktionskontrolle oder SRM. In SRM werden beide Massen-Analysatoren zu einem ausgewählten Masse-Ladungs-Verhältnis, mit Schwerpunkt auf bestimmte Vorläufer und Produkt Ionen fixiert. Wegen SRMs hohes Maß an Sensibilität können die Spektren von Peptid Standards bekannter Konzentration genutzt und im Vergleich zu der unbekannten Proben, so dass Proteine des Interesses quantifiziert werden.
Proteine werden häufig nach der Übersetzung in der Regel durch die Zugabe von funktionellen Gruppen wie Methylgruppen, Phosphatgruppen oder Zucker, bekannt als Glykane geändert. Diese sind wichtig in Zelle signalisieren Prozesse, Aufklärung, wie die Zellen miteinander kommunizieren. Da Tandem-Massenspektrometrie der Proteine in kleinere Komponenten Fragmente, ist es möglich, die Position des PTM bestimmtes Fragment oder sogar eine Aminosäure zu bestimmen. Einige Änderungen, wie z. B. Acetylierung und Trimethylation, sind schwer zu unterscheiden durch Masse allein, so dass chromatographische Trennung vor der Massenspektrometrie durchgeführt wird.
Viele Analyte im Blut des Patienten sind bei Konzentrationen unterhalb der Nachweisgrenze für typische Massenspektrometrie gefunden. Ein weiterer Vorteil des SRM ist, dass es alle außer einem Produkt Ion, die Empfindlichkeit zu erhöhen und verbessern die untere Nachweisgrenze von bis zu 100-fach verwirft. In diesem Beispiel konnte das Immunsuppressivum Drogen, Tacrolimus, in Stufen von 1 ng/mL nachgewiesen werden.
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Sie haben nur Jupiters Video auf Tandem-Massenspektrometrie angesehen. Dieses Video beschrieben die Theorie des Instruments, ging über ein allgemeines Verfahren und erläutert einige der Möglichkeiten, die die Technik derzeit genutzt wird. Danke fürs Zuschauen!
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Tandem-Massenspektrometrie

In tandem mass spectrometry a biomolecule of interest is isolated from a biological sample, and then fragmented into multiple subunits in order to help ...

Die Tandem-Massenspektrometrie verbindet mehrere Stufen der Massenspektrometrie, um zunächst ein Biomolekül zu isolieren und dann Aspekte seiner chemischen Zusammensetzung zu bestimmen. Biomoleküle haben große, komplexe Strukturen, die es schwierig machen, ihre molekulare Zusammensetzung zu bestimmen. Die Tandem-Massenspektrometrie wählt ein Molekül von Interesse aus, das später in mehrere Untereinheiten fragmentiert wird, was zur Aufklärung seiner Identifizierung und Sequenzierung beitragen kann. Dieses Video zeigt die Konzepte der Tandem-Massenspektrometrie, ein allgemeines Verfahren und einige seiner Anwendungen in der Biochemie. Die Tandem-Massenspektrometrie beginnt wie ein typisches Massenspektrometer-Instrument: mit einer Ionenquelle, die die Probe in Ionen umwandelt, und einem Massenanalysator, der die Ionen anhand ihres Masse-Ladungs-Verhältnisses trennt. Ein gängiger Massenanalysator, der Quadrupol, lässt nur Ionen mit einem bestimmten Verhältnis durch, während die anderen in die Stäbe der Apparatur krachen. Die Spezies, die durchgelassen wird, das sogenannte Vorläuferion, ist das Biomolekül von Interesse. Das Ion bewegt sich in eine Kollisionszelle, typischerweise einen weiteren Quadrupol, wo Energie angewendet wird, um das Ion in einem vorhersagbaren Muster zu fragmentieren. Diese Fragmente wandern in einen anderen Massenanalysator, z. B. einen Time-of-Flight, der diese "Produktionen" trennt. Die produzierten Ionen werden dann zum Detektor geschickt, wie in einem normalen MS-Instrument. Im Falle eines unbekannten Proteins enthält das resultierende Spektrum zahlreiche überlappende Fragmente, so dass eine endgültige vollständige Sequenz des Biomoleküls nur schwer zu generieren ist. Das spektrale Muster ist jedoch für ein bestimmtes Protein einzigartig. Eine Analysesoftware vergleicht das Spektrum mit einer Datenbank bekannter Peptidsequenzen und klärt das unbekannte Protein aus den überlappenden Fragmenten auf. Je nach Probe und gewünschtem Fragmentierungsgrad sind mehrere Fragmentierungsmethoden möglich. Fragmentierungsmuster hängen davon ab, wie die Energie übertragen wird, wie viel sie hat und wie sie durch das Vorläuferion verteilt wird. Energie kann über neutrale Teilchen, Strahlung oder Elektronen übertragen werden. Bei der Verwendung neutraler Atome wird ein Prozess, der als kollisionsinduzierte Dissoziation oder CID bezeichnet wird, hauptsächlich an der Peptidbindung zwischen den Aminosäuren gespalten, ideal für deren Identifizierung. Nachdem nun die Grundlagen der Technik behandelt wurden, schauen wir uns die CID-Tandem-Massenspektrometrie an, die zur Untersuchung einer Komponente von bakteriellen Zellhüllen eingesetzt wird. Wie bei allen massenspektrometrischen Experimenten besteht der erste Schritt darin, die Probe zu ionisieren. Bei Biomolekülen geschieht dies typischerweise mit matrixgestützter Laserdesorption oder Elektrospray-Ionisation. Das Vorläufer-Ionensignal wird dann durch Abstimmung der Ionenoptik optimiert. Sobald dies erledigt ist, wird das Ziel isoliert und die Fragmentierungsmethode ausgewählt, z. B. CID. Die Stärke einer angelegten Spannung, die das Vorläuferion in die Kollisionszelle beschleunigt, beeinflusst den Grad der Fragmentierung. Diese Spannung wird erhöht, bis der Vorläufer im Vergleich zum Ion mit dem höchsten Produkt eine Abundanz von etwa 10 % aufweist. Es werden mehrere Spektren erfasst und gemittelt, bis ein ausreichendes Signal-Rausch-Verhältnis erreicht ist. Die Anzahl der benötigten Scans hängt von der Signalintensität des ursprünglichen Vorläuferions ab und kann zwischen 3 und 300 liegen. Der Analyt in diesem Beispiel, Lipid A aus Escherichia coli K-12, hatte nach CID 19 Hauptfragmente. Die allgemeine Struktur von Lipid A ist gut bekannt, so dass Software die spezifische Zusammensetzung aus der Probe rekonstruieren kann. Nachdem wir uns nun das Verfahren angesehen haben, schauen wir uns einige der Möglichkeiten an, wie die Tandem-Massenspektrometrie in der Biochemie eingesetzt wird. Ein gängiger Scanmodus in der Tandem-Massenspektrometrie ist die gewählte Reaktionsüberwachung (Reaction Monitoring, SRM). Bei der SRM sind beide Massenanalysatoren auf ein ausgewähltes Masse-Ladungs-Verhältnis fixiert, wobei der Schwerpunkt auf spezifischen Vorläufer- und Produktionen liegt. Aufgrund der hohen Empfindlichkeit von SRM können die Spektren von Peptidstandards bekannter Konzentration verwendet und mit denen der unbekannten Proben verglichen werden, wodurch Proteine von Interesse quantifiziert werden können. Proteine werden in der Regel nach der Translation modifiziert, typischerweise durch Zugabe von funktionellen Gruppen wie Methylgruppen, Phosphatgruppen oder Zuckern, die als Glykane bekannt sind. Diese sind wichtig für zelluläre Signalprozesse, um aufzuklären, wie Zellen miteinander kommunizieren. Da die Tandem-Massenspektrometrie die Proteine in kleinere Bestandteile zerlegt, ist es möglich, die Position des PTM zu einem bestimmten Fragment oder sogar einer Aminosäure zu bestimmen. Einige Modifikationen, wie z. B. Acetylierung und Trimethylierung, sind allein anhand der Masse schwer zu unterscheiden, so dass die chromatographische Trennung vor der Massenspektrometrie durchgeführt wird. Viele Analyten im Blut von Patienten werden in Konzentrationen unterhalb der Nachweisgrenze für die typische Massenspektrometrie gefunden. Ein weiterer Vorteil von SRM besteht darin, dass alle bis auf ein Produktion verworfen werden, was die Empfindlichkeit erhöht und die untere Nachweisgrenze um das bis zu 100-fache erhöht. In diesem Beispiel konnte das Immunsuppressivum Tacrolimus in Konzentrationen von 1 ng/ml nachgewiesen werden. Sie haben sich gerade das Video von JoVE über die Tandem-Massenspektrometrie angesehen. Dieses Video beschreibt die Theorie des Instruments, geht auf ein allgemeines Verfahren ein und erklärt einige der Möglichkeiten, wie die Technik derzeit eingesetzt wird. Danke fürs Zuschauen!

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Chemie

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tandem mass spectrometry for biomolecule analysis

Tandem mass spectrometry is used to isolate a biomolecule and break it into smaller pieces so its makeup can be studied. Because biomolecules often have large, complex structures, it can be hard to identify their molecular composition and sequence from a single measurement. By linking mass spectrometers in series, the technique first selects one ion and then analyzes the fragments it produces.

The process starts with an ion source that converts the sample into ions. A mass analyzer then separates those ions by their mass-to-charge ratio, also called m/z. In a quadrupole, only ions with a chosen m/z pass through, while the others strike the rods. The selected precursor ion is the molecule of interest.

That ion moves into a collision cell, often another quadrupole, where energy breaks it apart in a predictable pattern. The fragments, called product ions, then enter a second mass analyzer such as a time-of-flight instrument. After separation, the detector records the signals. For an unknown protein, the spectrum can contain many overlapping fragments, but the pattern is still unique. Software can compare it with a database of known peptide sequences to identify the protein.

Different fragmentation methods can be used depending on the sample and the level of detail needed. The outcome depends on how energy is transferred, how much is transferred, and how it spreads through the precursor ion. Energy may come from neutral particles, radiation, or electrons. With collision-induced dissociation, or CID, neutral atoms are used and the peptide bond between amino acids is usually cleaved, which helps with identification.

CID tandem mass spectrometry can also be used to study a bacterial cell envelope component. In that example, the sample is first ionized by matrix assisted laser desorption or electrospray ionization. The precursor ion signal is then optimized by tuning the ion optics, and the target is isolated before CID is selected. The applied voltage controls how much fragmentation occurs, and it is increased until the precursor is about 10% as abundant as the highest product ion. Multiple scans are collected and averaged until the signal-to-noise ratio is strong enough. For lipid A from Escherichia coli K-12, 19 major fragments were observed, and its known structure let software reconstruct the composition.

Tandem mass spectrometry is also used for selected reaction monitoring, or SRM. In SRM, both mass analyzers are fixed to a chosen m/z so the instrument focuses on specific precursor and product ions. This high sensitivity makes it useful for comparing peptide standards of known concentration with unknown samples to measure proteins of interest. The method is also helpful for detecting post-translational modifications, or PTMs, such as methyl groups, phosphate groups, and sugars called glycans, which play roles in cell signaling. Because the sample is broken into smaller pieces, the modification can sometimes be placed on a specific fragment or amino acid.

Some PTMs, such as acetylation and trimethylation, are hard to tell apart by mass alone, so chromatographic separation is done before mass spectrometry. SRM can also improve detection of very low-level compounds in blood. By removing all but one product ion, it can raise sensitivity and lower the detection limit by up to 100 fold. In the example shown, the immunosuppressant tacrolimus was detected at 1 ng/mL.

Tandem Mass Spectrometry for Biomolecule Analysis

tandem-mass-spectrometry-for-biomolecule-analysis

dialysis: diffusion based separation

Dialysis for Buffer Exchange in Biochemistry

Dialysis is a common biochemistry technique for buffer exchange and desalting. It separates molecules by diffusion through a semipermeable membrane, which lets small molecules pass while holding larger biomolecules inside the sample. The membrane is the key part of the setup. Its pores create a molecular weight cutoff, so a membrane such as a 10 kDa membrane usually keeps molecules larger than 10 kilodaltons inside. This cutoff is not exact, because membranes have a range of pore sizes.

enzyme assays and kinetics

Measuring Enzyme Reaction Rates

Enzyme reaction rates can be measured with assays that track how substrate or product levels change over time. Enzymes are proteins, or sometimes RNAs, that speed up chemical reactions by lowering the activation energy needed to start them. They act on a specific substrate and help form a product that supports life processes. Enzymatic reactions are often described in three steps. First, the substrate binds to the enzyme active site and forms an enzyme-substrate complex. That complex can fall...

maldi-tof mass spectrometry

How MALDI-TOF Reads Biomolecules

MALDI-TOF mass spectrometry reads biomolecules by using a laser, a matrix, and a time-of-flight analyzer. MALDI, or matrix-assisted laser desorption ionization, helps fragile molecules keep their structure while they are moved into the mass analyzer. The analyzer then separates compounds based on size and charge. In MALDI, the sample is mixed into a matrix, usually an organic compound with aromatic and conjugated double bonds. A laser pulse strikes the spot, and the matrix absorbs most of the...

tandem mass spectrometry

Tandem mass spectrometry is used to isolate a biomolecule and break it into smaller pieces so its makeup can be studied. Because biomolecules often have large, complex structures, it can be hard to identify their molecular composition and sequence from a single measurement. By linking mass spectrometers in series, the technique first selects one ion and then analyzes the fragments it produces. The process starts with an ion source that converts the sample into ions. A mass analyzer then...

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Protein Crystals for Structure Analysis

Protein crystals help scientists study protein structure and function. A crystal is a solid lattice made from purified protein molecules. These crystals are useful in structural biology because they reveal details that methods like mass spectrometry and SDS-PAGE cannot show on their own. Protein crystallization is paired with recombinant protein expression and x-ray diffraction to support this work. The process starts with a large amount of very pure protein. Researchers often make that...

chromatography-based biomolecule purification methods

chromatography-based-biomolecule-purification-methods

Protein Purification with SEC and IMAC

Protein purification with size-exclusion chromatography and affinity chromatography helps isolate biomolecules from complex mixtures. These methods are common in biochemistry because purified samples are needed before a biomolecule’s properties and activity can be studied. The video focuses on the principles behind size-exclusion chromatography, affinity chromatography, and immobilized metal affinity chromatography, or IMAC. Size-exclusion chromatography, or SEC, separates molecules by size. A...

two-dimensional gel electrophoresis

Protein Mapping with 2D Gel Electrophoresis

Protein mapping with 2D gel electrophoresis separates complex protein mixtures across two steps. The method combines isoelectric focusing, or IEF, with sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, or SDS-PAGE. Together, these methods can resolve thousands of biomolecules from a single sample by their isoelectric point and molecular weight. The first dimension is IEF. Each protein has an isoelectric point, or pI, which is the pH where its net charge is zero. Proteins are loaded...

metabolic labeling

Tracking Cell Chemistry with Metabolic Labels

Metabolic labeling tracks cell chemistry by using chemical analogs that cells take up and build into biomolecules. These labels help scientists follow biochemical changes and modifications inside cells. The labeled products can then be studied with tools such as SDS-PAGE and NMR to learn more about metabolic pathways. Several labeling strategies are shown here. Isotopic labeling uses analogs that match the natural molecule but contain uncommon isotopes, such as carbon-13 and nitrogen-15 in an...

electrophoretic mobility shift assay (emsa)

electrophoretic-mobility-shift-assay-emsa

Detecting Protein-DNA Binding by EMSA

Electrophoretic mobility shift assay, or EMSA, is a biochemical method used to detect binding between proteins and nucleic acids. It is also called a gel shift assay. The test compares how a labeled nucleic acid moves through a gel before and after it binds a protein. EMSA is used to see whether a specific protein binds to a specific nucleic acid. First, the nucleic acid is labeled to make a probe. The transcript describes radioactive phosphorus-32 as a common label. The probe is then mixed...

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Measuring Protein Concentration with Absorbance

Measuring protein concentration with absorbance is a key step in many biochemical assays. Photometric methods use the fact that samples with more light-absorbing material transmit less light. Because concentration and absorption are directly related, this makes it possible to measure an unknown sample. The core idea comes from the Beer-Lambert Law. This law states that the concentration of a light-absorbing species is proportional to its absorbance. The video also introduces the Bradford assay...

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Sucrose Gradient Separation in an Ultracentrifuge

Sucrose gradient separation in an ultracentrifuge is a lab method for isolating cell parts and biomolecules. It uses differences in density to make particles sink or rise in a liquid. A high-speed ultracentrifuge speeds up this process so components can be separated without destroying them. The basic idea starts with a suspension, which is particles mixed in a liquid solvent. Particles that are denser than the solvent sediment, while less dense particles float. A rotor inside the...

co-immunoprecipitation and pull-down assays

co-immunoprecipitation-and-pull-down-assays

Protein Interaction Capture Methods in Cells

Co-immunoprecipitation and pull-down assays are laboratory methods used to capture stable protein-protein interactions. Protein-protein interactions help control many biological functions, but many of them have not yet been identified. These assays are related to immunoprecipitation, which isolates a target protein from a mixed sample using an antibody. In co-immunoprecipitation, or CoIP, an antibody binds the target protein, and that protein is already attached to another protein that the...

reconstitution of membrane proteins

Membrane Proteins in Liposome Models

Membrane proteins can be moved into liposome models so their function can be studied outside a cell. Reconstitution means restoring an isolated biomolecule to a working form. For membrane proteins, that usually means placing a purified protein into an artificial lipid membrane. Cell membranes are made mainly of phospholipids and membrane proteins. The phospholipids form a bilayer with hydrophilic phosphate heads facing water and hydrophobic fatty acid tails facing inward. Some membrane...

f&#246;rster resonance energy transfer (fret)

FRET as a Molecular Ruler in Cells

Föster resonance energy transfer, or FRET, is a way to study close-range biochemical interactions using light-emitting molecules. A donor fluorophore can pass energy to an acceptor fluorophore when their emission and absorption spectra overlap. This transfer happens only when the pair is very close together, usually within 10 nm. Because FRET depends on distance, it is often called a molecular or spectroscopic ruler. The strength of the signal is measured as FRET efficiency, which describes...

surface plasmon resonance (spr)

SPR Biosensors for Tracking Binding Kinetics

Surface plasmon resonance, or SPR, is a way to track biomolecular binding on a label-free biosensor. It is used to measure molecular affinity, kinetics, specificity, and concentration. The method works with a thin metal layer on a prism, where changes in reflected light reveal interactions in real time. SPR sensors use a thin layer of a noble metal on the face of a prism. Light is reflected from the prism-metal interface into a photodetector. At one specific angle, called the surface plasmon...

biochemistry

Diese Sammlung enthält häufig verwendete Methoden zur Reinigung, wie z. b. Affinity Chromatographie, sowie analytische Methoden wie MALDI-TOF. Darüber hinaus präsentieren die Videos Methoden zur Beurteilung von Biomolekül Interaktion und Funktion, wie Co-Immunopräzipitation und metabolische Kennzeichnung.

Learn how tandem mass spectrometry isolates biomolecules, fragments them, and helps detect proteins, PTMs, and low-level drugs in blood.

Tandem Mass Spectrometry for Biomolecule Analysis | JoVE K12

new-york-state-science-learning-standards

New York State Science Learning Standards

HS. Waves and Electromagnetic Radiation

HS-PS4-5.

Life Science

matter-and-energy-in-organisms-and-ecosystems

Matter and Energy in Organisms and Ecosystems

HS-LS1-6.

Overview

Principles of Tandem Mass Spectrometry

Instrumental Operation

Applications

Summary

Travelling Waves

A wave is a disturbance that propagates from its source, repeating itself periodically, and is typically associated with simple harmonic motion. ...

Wave Parameters

The simplest mechanical waves are associated with simple harmonic motion and repeat themselves for several cycles. These simple harmonic waves can be ...

Equations of Wave Motion

Mathematically, the motion of a wave can be studied using a wavefunction. Consider a string oscillating up and down in simple harmonic motion, having a ...

Graphing the Wave Function

Consider the wave equation for a sinusoidal wave moving in the positive x-direction. The wave equation is a function of both position and time. From the ...

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Velocity and Acceleration of a Wave

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Kinetic and Potential Energy of a Wave

All forms of waves carry energy; this is directly visualized in nature. For instance, the waves of earthquakes are so intense that they can shake huge ...

Energy and Power of a Wave

The total energy associated with a wavelength is the sum of the potential energy and the kinetic energy. The average rate of energy transfer associated ...

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When a wave propagates from one medium to another, part of it may get reflected in the first medium, and part of it may get transmitted to the second ...

Sound Waves

Sound waves can be thought of as fluctuations in the pressure of a medium through which they propagate. Since the pressure also makes the medium&#39;s ...

Sound as Pressure Waves

Sound waves, which are longitudinal waves, can be modeled as the displacement amplitude varying as a function of the spatial and temporal coordinates. As ...

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Speed of Sound in Solids and Liquids

Most solids and liquids are incompressible&#8212;their densities remain constant throughout. In the presence of an external force, the molecules tend to ...

Speed of Sound in Gases

The speed of sound in a gaseous medium depends on various factors. Since gases constitute molecules that are free to move, they are highly compressible. ...

Doppler Effect - I

The Doppler effect and Doppler shift were named after the Austrian physicist and mathematician Christian Johann Doppler in 1842, who conducted experiments ...

Doppler Effect - II

The Doppler effect has several practical, real-world applications. For instance, meteorologists use Doppler radars to interpret weather events based on ...

Shock Waves

While deriving the Doppler formula for the observed frequency of a sound wave, it is assumed that the speed of sound in the medium is greater than the ...

Echo

The human ear cannot distinguish between two sources of sound if they happen to reach within a specific time interval, typically 0.1 seconds apart. More ...

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Electromagnetic Waves

James Clerk Maxwell formulated a single theory combining all the electric and magnetic effects scientists knew during that time, calling the phenomena his ...

Generating Electromagnetic Radiations

The German physicist Heinrich Hertz (1857&#8211;1894) was the first to generate and detect certain types of electromagnetic waves in the laboratory. ...

Electromagnetic Wave Equation

Maxwell&#39;s equations for electromagnetic fields are related to source charges, either static or moving. These fields act on a test charge, whose ...

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Propagation Speed of Electromagnetic Waves

Electromagnetic waves are consistent with Ampere&#39;s law. Assuming there is no conduction current Ampere&#39;s law is given as:


Consider a plane ...

Electromagnetic Waves in Matter

Electromagnetic waves can travel in the vacuum as well as in matter. For example light, which is an electromagnetic wave, can travel through air, water, ...

Energy Carried By Electromagnetic Waves

Anyone who has used a microwave oven knows there is energy in electromagnetic waves. Sometimes, this energy is obvious, such as in the summer sun&#39;s ...

The Wave Nature of Light

The nature of light has been a subject of inquiry since antiquity. In the seventeenth century, Isaac Newton performed experiments with lenses and prisms ...

Use mathematical representations to support a claim regarding relationships among the frequency, wavelength, and speed of waves traveling in various media. [Clarification Statement: Examples of data could include electromagnetic radiation traveling in a vacuum and glass, sound waves traveling through air and water, and seismic waves traveling through the earth.] [Assessment Boundary: Assessment is limited to algebraic relationships and describing those relationships qualitatively.]

HS-PS4-1

The Electromagnetic Spectrum

Electromagnetic waves are categorized according to their wavelengths and frequencies, giving the electromagnetic spectrum. These waves are classified as ...

Classification of Signals

Signals are categorized as Continuous-time or discrete-time, Periodic or aperiodic, Analog or digital, and Causal or noncausal.
A continuous-time signal ...

Discrete Fourier Transform

Consider a vibration sensor that continuously captures data in the form of a continuous time-dependent signal.
However, in reality, the sensor can only ...

Discrete-Time Fourier Series

The Discrete-Time Fourier Series is a counterpart to the Fourier-series expansion of continuous-time periodic signals.
Calculating the expansion ...

Sampling Theorem

Consider the continuous-time signal x(t), and a train of impulses where Ts,&#xA0; is the sampling interval, and fs, is the sampling frequency.
Multiplying ...

Properties of Fourier Transform I

In radio broadcasting, Fourier Transform properties are applied in simultaneous multi-channel transmission, adjusting audio clip speeds, live broadcast ...

Signal and System

Signals are sets of data or information.
One-dimensional signals include single-variable functions, such as the variations in air pressure over time in ...

Methods of Documentation VII: EMR

Electronic Medical Records (EMRs) primarily center around electronically documenting patients&#39; health information within a single healthcare ...

Fast Fourier Transform

The Fast Fourier Transform, FFT, is a computational algorithm for calculating the Discrete Fourier Transform by breaking the calculations into smaller, ...

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Reconstruction of Signal using Interpolation

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Applying a zero-order hold to the sampled signal results in a piecewise ...

Downsampling

Consider a sampled sequence with zero values between sampling instants. Replace it by taking every N-th value of the sampled sequence.
The original and ...

Design Example

An engineer designs a circuit for a speaker system with a 2 kHz crossover frequency requirement, considering the speaker&#39;s resistance of 8 ohms.
The ...

Upsampling

Consider a decimated signal with a reduced frequency range due to its lower sampling rate.
Insert zeros between each sample to upsample, that introduces ...

Properties of DTFT I

Consider two discrete-time signals, each with their respective Discrete-Time Fourier Transforms DTFTs.
The signals are first multiplied by constants a and ...

Relation of DFT to z-Transform

The Discrete Fourier Transform (DFT) analyzes the frequency content of discrete-time signals.
It maps the N-sampled discrete time-domain sequence to its ...

Feedback control systems

Feedback control systems are categorized as linear or nonlinear, time-varying or time-invariant, and classified by signal types as continuous or ...

Properties of the z-Transform I

Certain properties provide a solid foundation for analyzing discrete-time systems using the Z-transform.
Considering two discrete-time signals, the ...

Magnetic Resonance Imaging

Magnetic resonance imaging (MRI) is a noninvasive medical imaging technique based on a phenomenon of nuclear physics discovered in the 1930s, in which ...

Evaluate questions about the advantages of using digital transmission and storage of information. [Clarification Statement: Examples of advantages could include that digital information is stable because it can be stored reliably in computer memory, transferred easily, and copied and shared rapidly. Disadvantages could include issues of easy deletion, security, and theft.]

HS-PS4-2

Interference and Superposition of Waves

When two waves of the same nature occur in the same region simultaneously, they result in interference. Interference of waves implies that the net effect ...

Sound Waves: Interference

Sound waves can be modeled either as longitudinal waves, wherein the molecules of the medium oscillate around an equilibrium position, or as pressure ...

Interference: Path Lengths

Consider two sources of sound, that may or may not be in phase, emitting waves at a single frequency, and consider the frequencies to be the same.
Two ...

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Concept of Resonance and its Characteristics

If a driven oscillator needs to resonate at a specific frequency, then very light damping is required. An example of light damping includes playing piano ...

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Sound Waves: Resonance

Resonance is produced depending on the boundary conditions imposed on a wave. Resonance can be produced in a string under tension with symmetrical ...

Reflection of Waves

When a wave travels from one medium to another, it gets reflected at the boundary of the second medium. A common example of this is when a person yells at ...

Standing Waves

Sometimes waves do not seem to move; rather, they just vibrate in place. Unmoving waves can be seen on the surface of a glass of milk kept in a ...

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Modes of Standing Waves - I

A close look at earthquakes provides evidence for the conditions appropriate for resonance, standing waves, and constructive and destructive interference. ...

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Evaluate the claims, evidence, and reasoning behind the idea that electromagnetic radiation can be described either by a wave model or a particle model, and that for some situations one model is more useful than the other. [Clarification Statement: Emphasis is on how the experimental evidence supports the claim and how a theory is generally modified in light of new evidence. Examples of a phenomenon could include resonance, interference, diffraction, and photoelectric effect.] [Assessment Boundary: Assessment does not include using quantum theory.]

HS-PS4-3

Tandem Mass Spectrometry for Biomolecule Analysis

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