Ein auf Raman-Spektroskopie basierender direkter Immunoassay zum Nachweis eines spezifischen Antigens

Beginnen Sie mit der Inkubation von Raman-Reporterfarbstoffmolekülen mit Goldnanopartikeln, damit Reporter an die Nanopartikel binden können.

Fügen Sie Polyethylenglykol und PEG-konjugierte Antikörper hinzu, die spezifisch für das Zielantigen sind. Die Antikörper binden sich durch Gold-Disulfid-Bindung kovalent an die Nanopartikel. Fügen Sie Thiol-konjugierte PEGs hinzu, um die verbleibenden Nanopartikelstellen zu blockieren und die Aggregation von Nanopartikeln zu verhindern, wodurch Nanopartikelsonden gebildet werden.

die Immunoassay-Plattenvertiefungen mit dem Zielantigen. Blockieren Sie die verbleibenden Plattenstellen mit einer proteinhaltigen Lösung. Fügen Sie die Nanopartikelsonden hinzu. Führen Sie eine serielle Sondenverdünnung über die Vertiefungen durch. Inkubieren Sie, bis die Antikörper in den Sonden an die Antigene binden und Komplexe bilden.

Verwenden Sie ein Raman-Mikroskop, um die optische Reaktion der Sonde zu bestimmen. Der einfallende monochromatische Laser regt die Oberflächenelektronen der Goldnanopartikel an und bewirkt deren Schwingung, wodurch ein hohes lokales elektromagnetisches Feld auf der Sondenoberfläche entsteht.

Der einfallende Strahl und die Raman-Reporter interagieren, was aufgrund des verstärkten elektromagnetischen Feldes zu verstärktem inelastischem Licht oder Raman-Streuung mit unterschiedlichen Wellenlängen und Frequenzen führt. Das unelastisch ausgestrahlte Raman-Signal wird zur Erzeugung des Raman-Spektrums verwendet.

Plotten Sie den Spektralbereich des Raman-Reporterpeaks gegen die Sondenkonzentration, um die untere Grenze des Sondennachweises zu ermitteln und einen empfindlicheren Nachweis des Antigens zu ermöglichen.