Name: Kweken van Menselijke neus epitheelcellen op de Air Liquid Interface (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-08T17:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 38 s
Description: Leer het kweken van menselijke neusepitheelcellen op de air-liquid interface voor respiratoir onderzoek. Deze methode creëert een betrouwbaar model dat het neusepitheel in vivo nabootst.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag Lisa Dailey bedanken voor de nuttige ingangen. Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health (ES013611 en HL095163), de Steward Medical Research Institute (FAMRI) en de Environmental Protection Agency (CR83346301) en verklaart geen belangenconflict. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en niet noodzakelijkerwijs het officiële standpunt van de National Institutes of Health. Hoewel de in dit artikel beschreven onderzoek is mede gefinancierd door het US Environmental Protection Agency via samenwerkingsovereenkomst CR83346301 met het Center for Environmental Medicine, Astma en Long Biologie aan de Universiteit van North Carolina, Chapel Hill, is het niet onderworpen aan de bureau&#39;s nodig collegiale en beleidsevaluatie en dus niet noodzakelijk overeen met de standpunten van het agentschap, en geen officiële goedkeuring moet worden afgeleid. Vermelden of handelsnamen of commerciële producten vormt geen goedkeuring of aanbeveling voor gebruik. Loretta Müller wordt ondersteund door de Zwitserse National Science Foundation met een persoonlijke subsidie.

1. Bereid Plastic Ware: Jas Plate <ol><li> Voeg 500 ul PureCol (1:100 verdund met steriel water) aan elk putje van een 12-wells plaat. </li><li> Incubeer bij 37 ° C in een incubator gedurende 30 minuten, verwijder de PureCol en spoel af met HBSS vlak voor de cellen worden toegevoegd aan de plaat (zie stap 3.1 hieronder). </li></ol> 2. Verkrijgen en voorbehandeling van biopsie van Human NEC <ol><li> Nasale schrapen biopsie <ol><li> Verkrijgen oppervlakkige EC langs de neusschelpen onder direct zicht door een 9 mm herbruikbare polypropyleen nasale speculum (model 22009) op een operationele otoscoop met speculum (model 21700). Dit apparaat zorgt voor een optimale visualisatie van de neusschelpen en de flexibiliteit van de beweging. </li><li> Voer de biopten met het onderwerp rechtop gezeten in een rechte stoel met hoofd iets gekanteld of liggend in een liggende positie op een onderzoekstafel. </li><li> Plaats de otoscoop speculum in het neusgat en de inferieure turbinate gevisualiseerd met verlichting. </li><li> Plaats een steriele thermoplastisch curette via speculum met de punt distaal uitgebreid naar de achterkant van de turbinate. </li><li> Met behulp van zachte druk op de inferieure oppervlak van de turbinate, wordt de curette over het mucosale oppervlak 5x getrokken en teruggetrokken. Een succesvolle ophalen van slijmvliescellen gehouden door capillaire werking zal duidelijk zijn in de beker van de curette. </li></ol></li><li> Plaats monster in een 15 ml conische buis met 8 ml RPMI 1640, vervoer op het ijs. </li><li> Gebruik een tang om de sonde te halen, los weefsel van neushoorn sonde met een P-1000 pipet, gooi sonde </li><li> Centrifuge tot pellet (4 ° C, 400 xg, 5 min), aspireren supernatant (opgelet: voorzichtig de pellet niet te zuigen). </li><li> Resuspendeer de pellet in 1 ml BEGM met 10 ul van 100x DNase 1. </li><li> Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten. </li><li> Centrifuge (4 ° C, 400 xg, 5 min), NIET het supernatans aspireren! </li></ol> 3. Seed de Cellen op Plastic (Dag 0) <ol><li> Verwijder de PureCol van de plaat en spoel af met HBSS (zie ook stap 1.2). </li><li> Voeg een minimumhoeveelheid BEGM + + media (80-100 ul tot een meniscus media wordt in het midden van de put) in 1-4 putjes (afhankelijk biopsie grootte) van de beklede plaat. </li><li> Gebruik een P-1000 pipet om verwijder voorzichtig de pellet van de biopsie weefsel van de buis, zonder opzuigen teveel media. </li><li> Breng de pellet in het midden van de putten, houdt de biopsie samen als een cluster van cellen en niet breken tot een enkele celsuspensie te maken. Een goede biopsie opbrengsten tot 4 putjes die kunnen worden gezaaid. Plaats de plaat in weefselkweek incubator (37 ° C, 5% CO 2,&gt; 90% relatieve vochtigheid). </li><li> Controleer na twee uur om te verzekeren dat er voldoende media (zonder de meniscus). </li><li> Dag1, 24 uur na het zaaien: verzamel alle niet-hechtende cellen van alle putjes (tilt plaat en media met cellen te verzamelen in een P-1000, collect alle putjes in een 1,5 ml centrifugebuis). </li><li> Centrifuge (4 ° C, 400 xg, 5 min.). </li><li> Terwijl centrifugeren celsuspensie: voeg 250 ul BEGM + + en 250 pl BEGM + medium aan de cellen gezaaid op dag 0. </li><li> Herhaal stap 3.1-3.5 voor de niet-hechtende cellen. </li><li> Dag 2-5: verandering media van de cellen dagelijks, voeg 500 ul media aan elk putje, de hoeveelheid BEGM + + media stapsgewijs (dag 2 te verminderen na het uitzaaien: 125 ul BEGM + + plus 375 ul BEGM +, day3 na zaaien en de volgende dagen: 73 pi BEGM + + plus 427 ul BEGM +). </li></ol> 4. Uitbreiding van de cellen in de kolven <ol><li> Monitor cellen dagelijks, zodra ze 80-90% confluentie (meestal 5-7 dagen na de biopsie, als het langer duurt voordat ze zullen niet succesvol te groeien) lift cellen hebben bereikt als volgt: zorgvuldig aspireren media; voeg 500 ul van 0,25% trypsine per putje houden bij 37 ° C totdat de cellen losgemaakt (duurt meestal 2-3 min). </li><li> Bereid de noodzaaked volume van de Boon trypsineremmer (SBTI) (750 pi per 1 ml trypsine) in een 15 ml buis. </li><li> Verjagen cellen door herhaaldelijk op en neer pipetteren de trypsine-oplossing; overdracht vrijstaande cellen in de 15 ml conische buis met SBTI. </li><li> Spoel alle putjes met in totaal 1 ml HBSS, voeg HBSS aan de buis met de cellen. </li><li> Centrifuge tot pellet (4 ° C, 400 xg, 5 min.), zuig de media, resuspendeer in 1 ml BEGM + media en vortex de buis. </li><li> Expand cellen in een T25 of T75 fles, afhankelijk van korrelgrootte (dit is p1; ongeveer twee samenvloeiing putten gaan in een T75 kolf, een samenvloeiing goed genoeg is voor een T25, meestal 2 samenvloeiing putten leveren een T75). <ol><li> Voeg BEGM + aan de kolven (elk 5 ml voor T75, 3 ml elk voor een T25). </li><li> Voeg de celsuspensie aan de kolven. Breng de kolven in een weefselkweek incubator. </li></ol></li><li> 24 uur na fles-zaaien: voeg extra BEGM + media aan de kolf (3 ml tot een T25, 10 ml tot een T75). </li><li><strong&gt; onderhouden van de cellen in de kolven: Verwijder media (aspireren uit de hoek) en voeg BEGM + media (5 ml/T25, 20 ml/T75). De media moet elke 2-3 dagen vervangen. Houd de cellen in de kolf totdat ze ongeveer 80% confluent (confluentie mogelijk niet eens het gehele kolf, dit duurt gewoonlijk tussen 7-10 dagen, als ze niet confluent na 10 dagen zullen zij niet succesvol te groeien). </li></ol> 5. Zaad van de Cellen op Tissue Culture Inserts <ol><li> Verwijder het papier uit de kolf en voeg Trypsin (3 ml voor T25, 4 ml voor T75 kolf). </li><li> Incubeer bij 37 ° C totdat de cellen losgemaakt (ongeveer 2-3 minuten). </li><li> Bereid SBTI (750 pi per 1 ml trypsine&gt; 2,25 ml voor T25, 3 ml voor T75) in een 15 ml buis. </li><li> Los cellen door taping de kolf en neer te pipetteren en transfer naar conische buis met de SBTI. </li><li> Spoel de kolf met HBSS (1 ml voor T25, 2 ml voor T75), voeg de HBSS aan de buis van 15 ml. </li><li> Centrifugetot pellet (4 ° C, 400 xg, 5 min), verwijder supernatant voorzichtig. </li><li> Bereid de platen: beslissen hoeveel platen zullen gezaaid worden, het etiket van de platen met voorbeeldcode en nummer, passage nummer (dwz p2) en datum. Voeg 700 ul BEGM + media om de basale kamer. </li><li> Resuspendeer de cel pellet in 1 ml BEGM ALI media door vortexen de buis. </li><li> Tel de cellen met een hemocytometer (een T25 produceert meestal ongeveer 4 miljoen cellen, een T75 kan maximaal 20 miljoen cellen hebben, afhankelijk van het eilandje, gebruik 1-2.000.000 van cellen voor een 12-well plaat) en verdun de celsuspensie met BEGM ALI media om het totale volume nodig is voor de hoeveelheid platen die moet worden gezaaid (1,2 x 10 6 cellen in 2,5 ml media per plaat) (Let op:. Als een deel van de cellen wilt worden bevroren, het etiket van de buis en verwijder cellen hier: we meestal bevriezen 2 x 10 6 cellen in 2 ml van het bevriezen media) </li><li> Voeg 200 ul celsuspensie aan de apicale zijde van elke ongestreken Corning 12well celSteek (&gt; dit zal ongeveer 80,000-150,000 cellen / insert zijn; 12 mm transwells met 0,4 micrometer porie polyester (polyethyleentereftalaat (PET)) membraan insert); zetten in weefselkweek incubator. </li><li> Na 24 uur, veranderen de apicale media (200 ul expansie gemiddeld). </li><li> Handhaving van de celculturen: Verander de media (BEGM ALI media; 700 ul basolaterale en 200 ul apicale) om de andere dag. Inserts hebben ondergedompeld te worden gehandhaafd tot cellen zijn totaal samenvloeiing (geen gaten in de monolaag zijn zichtbaar). Afhankelijk van het aantal cellen dit duurt meestal tussen de 2-6 dagen, als het langer duurt de cellen zal zeer waarschijnlijk niet levensvatbaar zijn. </li></ol> 6. Vestigen Air Liquid Interface Zodra de Cellen zijn volledig Confluent (wanneer de cellen op de Transwells zijn volledig Confluent) <ol><li> Zodra de cellen zijn volledig samenvloeiing vervangen zowel apicale en basolaterale media met BEGM ALI media aangevuld met 500 nM retinoinezuur voor 48 uur. </li><li> 48 uur na het toevoegen van de retinoinezuur aangevuld BEGM ALI media: Bereid PneumaCult-ALI Maintenance Medium (instructies na de fabrikant): Bereken het volume van het medium nodig (voor een plaat meestal 8,5 ml voor basaal compartimenten), voeg per 1 ml PneumaCult Compleet Base Medium : 10 pl PneumaCult 100x Onderhoud Supplement 2 ul heparine (van 2 mg / ml voorraadoplossing) 5 pl Hydrocortison (van een 96 ul / ml stockoplossing). </li><li> Verwijder alle media en voeg 700 ul PneumaCult-ALI onderhoud media om de basolaterale zijde (geen medium aan de apicale kant). </li><li> Handhaving van de celculturen gedurende 4 weken bij de ALI: <ol><li> Wijzig de media om de andere dag (maandag, woensdag en vrijdag schema werkt goed voor ons). </li><li> Na een week bij ALI, een keer per week (woensdag) het apicale oppervlak wordt gespoeld: voeg 200 ul HBSS aan de apicale kant, houd ze gedurende 10 minuten in de incubator, voorzichtig zuig hetHBSS (gebruik een 9 in glazen pipet aan de vacuüm val de biologische veiligheidskast, gebruikt 200 ul uiteinden op de punt van de pipet te zuigen uit de HBSS). </li></ol></li></ol> Opmerking: Verander tips tussen de platen, evenals het veranderen van de tips als ik van apicale oppervlak versus basolaterale. Na ongeveer 2 weken in het ALI, cellen beginnen te differentiëren en cilia verschijnen. Celculturen bereiken het volledige differentiatie na ongeveer 4 weken in het ALI.

<ol><li>Swamy, M., Jamora, C., Havran, W., Hayday, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+decision+makers%3A+in+search+of+the+%27epimmunome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Epithelial decision makers: in search of the 'epimmunome.</a> Nat. Immunol. 11, 656-665 (2010).</li>
<li>Vareille, M., Kieninger, E., Edwards, M. R., Regamey, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+airway+epithelium%3A+soldier+in+the+fight+against+respiratory+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">The airway epithelium: soldier in the fight against respiratory viruses.</a> Clin. Microbiol Rev. 24, 210-229 (2011).</li>
<li>Muller, L., Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cells%2C+the+%22switchboard%22+of+respiratory+immune+defense+responses%3A+Effects+of+air+pollutants%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Med.+Wkly%22%5BJournal%5D)">Epithelial cells, the "switchboard" of respiratory immune defense responses: Effects of air pollutants.</a> Swiss Med. Wkly. , (2012).</li>
<li>Sanders, C. J., Doherty, P. C., Thomas, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+epithelial+cells+in+innate+immunity+to+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Respiratory epithelial cells in innate immunity to influenza virus infection.</a> Cell Tissue Res. 343, 13-21 (2011).</li>
<li>Robertson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+chemokines+in+the+biology+of+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of chemokines in the biology of natural killer cells.</a> J. Leukoc. Biol. 71, 173-183 (2002).</li>
<li>Adachi, M., Matsukura, S., Tokunaga, H., Kokubu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+cytokines+on+human+bronchial+epithelial+cells+induced+by+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22A.+Int.+Arch.+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of cytokines on human bronchial epithelial cells induced by influenza virus.</a> A. Int. Arch. Allergy Immunol. 113, 307-311 (1997).</li>
<li>Borchers, M. T., Harris, N. L., Wesselkamper, S. C., Vitucci, M., Cosman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NKG2D+ligands+are+expressed+on+stressed+human+airway+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">NKG2D ligands are expressed on stressed human airway epithelial cells.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 291, L222-L231 (2006).</li>
<li>Groh, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Costimulation+of+CD8alphabeta+T+cells+by+NKG2D+via+engagement+by+MIC+induced+on+virus-infected+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Costimulation of CD8alphabeta T cells by NKG2D via engagement by MIC induced on virus-infected cells.</a> Nat. Immunol. 2, 255-260 (2001).</li>
<li>Obeidy, P., Sharland, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NKG2D+and+its+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J.+Biochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">NKG2D and its ligands.</a> Int J. Biochem. Cell Biol. 41, 2364-2367 (2009).</li>
<li>Horvath, K. M., Brighton, L. E., Zhang, W., Carson, J. L., Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+Cells+From+Smokers+Modify+Dendritic+Cell+Responses+in+the+Context+of+Influenza+Infection+1%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Resp.+Cell%22%5BJournal%5D)">Epithelial Cells From Smokers Modify Dendritic Cell Responses in the Context of Influenza Infection 1.</a> Am. J. Resp. Cell. , (2010).</li>
<li>Muller, L., Brighton, L. E., Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ozone+exposed+epithelial+cells+modify+co-cultured+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22AJP+Lung%22%5BJournal%5D)">Ozone exposed epithelial cells modify co-cultured natural killer cells.</a> AJP Lung. , (2013).</li>
<li>Turi, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress+activates+anion+exchange+protein+2+and+AP-1+in+airway+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 283, 791-798 (2002).</li>
<li>Zimmermann, G. S., Neurohr, C., Villena-Hermoza, H., Hatz, R., Behr, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effects+of+antibacterials+on+human+Bronchial+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Respir.+Res%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effects of antibacterials on human Bronchial epithelial cells.</a> Respir. Res. 10, 89(2009).</li>
<li>Lopez-Souza, N., Avila, P. C., Widdicombe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarized+cultures+of+human+airway+epithelium+from+nasal+scrapings+and+bronchial+brushings%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol.+Anim%22%5BJournal%5D)">Polarized cultures of human airway epithelium from nasal scrapings and bronchial brushings.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 39 (2003), 266-269 (2003).</li>
<li>Gray, T. E., Guzman, K., Davis, C. W., Abdullah, L. H., Nettesheim, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucociliary+differentiation+of+serially+passaged+normal+human+tracheobronchial+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mo.l+Biol%22%5BJournal%5D)">Mucociliary differentiation of serially passaged normal human tracheobronchial epithelial cells.</a> Am. J. Respir. Cell Mo.l Biol. 14, 104-112 (1996).</li>
<li>Adler, K. B., Schwarz, J. E., Whitcutt, M. J., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+New+Chamber+System+for+Maintaining+Differentiated+Guinea-Pig+Respiratory+Epithelial-Cells+between+Air+and+Liquid-Phases%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">A New Chamber System for Maintaining Differentiated Guinea-Pig Respiratory Epithelial-Cells between Air and Liquid-Phases.</a> Biotechniques. 5, 462(1987).</li>
<li>Whitcutt, M. J., Adler, K. B., Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biphasic+chamber+system+for+maintaining+polarity+of+differentiation+of+cultured+respiratory+tract+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A biphasic chamber system for maintaining polarity of differentiation of cultured respiratory tract epithelial cells.</a> In Vitro Cell. Dev. Biol. 24, 420-428 (1988).</li>
<li>Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+expression+of+IRF7+in+nasal+epithelial+cells+from+smokers+after+infection+with+influenza%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Reduced expression of IRF7 in nasal epithelial cells from smokers after infection with influenza.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 43, 368-375 (2010).</li>
<li>Muller, L., Brighton, L. E., Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ozone+exposed+epithelial+cells+modify+cocultured+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ozone exposed epithelial cells modify cocultured natural killer cells.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 304, 332-341 (2013).</li>
<li>Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOchs%2C+M+%22Fishman%27s+Pulmoary+Diseases+and+Disorders%22">Fishman's Pulmoary Diseases and Disorders</a>. Fishmanetal, A. P., et al. 4, Mc Graw Hill. New York, NY. 23-69 (2008).</li>
<li>Kesic, M. J., Meyer, M., Bauer, R., Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+Ozone+Modulates+Human+Airway+Protease%2FAntiprotease+Balance+Contributing+to+Increased+Influenza+A+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Exposure to Ozone Modulates Human Airway Protease/Antiprotease Balance Contributing to Increased Influenza A Infection.</a> PLoS ONE. 7, e35108(2012).</li>
<li>Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diesel+exhaust+enhances+influenza+virus+infections+in+respiratory+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Diesel exhaust enhances influenza virus infections in respiratory epithelial cells.</a> Toxicol. Sci. 85, 990-1002 (2005).</li>
<li>Jaspers, I., Flescher, E., Chen, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ozone-induced+IL-8+expression+and+transcription+factor+binding+in+respiratory+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ozone-induced IL-8 expression and transcription factor binding in respiratory epithelial cells.</a> Am. J. Physiol. 272, L504-L511 (1997).</li>
<li>Blume, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Barrier+responses+of+human+bronchial+epithelial+cells+to+grass+pollen+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Barrier responses of human bronchial epithelial cells to grass pollen exposure.</a> Eur. Respir. J. , (2012).</li>
<li>Bauer, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+enhances+caspase-1+in+bronchial+epithelial+cells+from+asthmatic+volunteers+and+is+associated+with+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Allergy+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Influenza enhances caspase-1 in bronchial epithelial cells from asthmatic volunteers and is associated with pathogenesis.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 130, 958-967 (2012).</li>
<li>Ostrowski, L. E., Stewart, D., Hazucha, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon+gamma+stimulates+accumulation+of+gas+phase+nitric+oxide+in+differentiated+cultures+of+normal+and+cystic+fibrosis+airway+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lung%22%5BJournal%5D)">Interferon gamma stimulates accumulation of gas phase nitric oxide in differentiated cultures of normal and cystic fibrosis airway epithelial cells.</a> Lung. 190, 563-571 (2012).</li>
<li>Jardim, M. J., Fry, R. C., Jaspers, I., Dailey, L., Diaz-Sanchez, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+microRNA+expression+in+human+airway+cells+by+diesel+exhaust+particles+is+linked+to+tumorigenesis-associated+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Disruption of microRNA expression in human airway cells by diesel exhaust particles is linked to tumorigenesis-associated pathways.</a> Environ. Health Perspect. 117, 1745-1751 (2009).</li>
<li>Horvath, K. M., Brighton, L. E., Herbst, M., Noah, T. L., Jaspers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+Attenuated+Influenza+Virus+%28LAIV%29+induces+different+mucosal+T+cell+function+in+nonsmokers+and+smokers%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Live Attenuated Influenza Virus (LAIV) induces different mucosal T cell function in nonsmokers and smokers.</a> Clin. Immunol. 142, 232-236 (2012).</li>
<li>Horvath, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+lavage+natural+killer+cell+function+is+suppressed+in+smokers+after+live+attenuated+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Respir.+Res%22%5BJournal%5D)">Nasal lavage natural killer cell function is suppressed in smokers after live attenuated influenza virus.</a> Respir. Res. 12, 102(2011).</li>
<li>Noah, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tobacco+smoke+exposure+and+altered+nasal+responses+to+live+attenuated+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Tobacco smoke exposure and altered nasal responses to live attenuated influenza virus.</a> Environ. Health Perspect. 119, 78-83 (2011).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

EC Respiratory niet alleen een fysieke barrière voor het menselijk lichaam te beschermen tegen exogene stimuli 20, maar ook als een schakelbord te initiëren en te reguleren respiratoire immuunsysteem responsen 1-3 via uitscheiding van oplosbare mediatoren of direct receptor-ligand cel-cel interacties. Om verdere analyse van de rol van EC in de immuunrespons op potentiaalverschillen tussen EC van zieke populaties te onderzoeken of de effecten van exogene stressoren EC bestuderen, is het belangrijk o...

Doel van de techniek Epitheelcellen (EC) in de luchtwegen zijn een van de eerste sites die rechtstreeks worden blootgesteld aan geïnhaleerde negatieve milieu-invloeden, zoals ziektekiemen, allergenen of luchtverontreinigende stoffen. EC meer dan een structurele belemmering: Zij fungeren als een schakelbord via de afgifte van oplosbare mediators 4-6 en de expressie van liganden / receptoren op hun surfac 7-9 initiëren en reguleren de immuunrespons respiratoire 1-3. Terwijl geïmmortaliseerde cellijnen kunnen worden gebruikt als modellen voor respiratoire EC studie in vitro, ze niet differentiëren in heterogene celpopulaties uit gepolariseerde trilharen en slijm producerende cellen, vergelijkbaar met wat wordt waargenomen in vivo. Belangrijke kenmerken van de respiratoire epitheel waargenomen in vivo Resumerend kan worden primaire luchtweg EC gebruikt. Daarom is ons doel was om onze methode waarbij nasale EC (NEM) te optimaliseren verkregen uit menselijke vrijwilligers. De NEC&#39;s worden uitgebreid en in vitro gekweekt, wat een celcultuur model van gedifferentieerde NEC&#39;s die veel van de kenmerken van de nasale epitheel gezien in vivo nabootst. Motivering Het gebruik van in vitro modellen met menselijke primaire EC nabootsen in vivo situatie - zoals beschreven in deze studie - geeft unieke mogelijkheden ziekte specifieke verschillen van EC, fysiologische parameters geassocieerd met het luchtwegepitheel of de interacties tussen EC en andere celtypes te bestuderen, zoals dendritische cel 10, natural killer cellen 11 of macrofagen. Verschillende bestaande methoden maken gebruik van bronchiale EC, die invasief via borstel biopten kan worden verkregen tijdens bronchoscopies, of op een andere wijze weggegooid longweefsel 12-17. Bovendien, commerciële bronnen om volledig gedifferentieerde menselijke luchtwegen epitheelcelkweken verkrijgen bestaan ​​(EpiAirway model uit MatTek, Ashland, MA, Cloneticsvan Lonza, Bazel, Zwitserland, MucilAir van Epithelix Sars, Genève Zwitserland), waar onderzoekers kunnen kiezen uit verschillende donoren. Vanwege de beperkte pool van commercieel beschikbare epitheelcellen, beperkt of voorgeschreven set parameters, de kosten verbonden aan commercieel verkrijgen primaire menselijke luchtwegen EC en de beperkte toegang tot verwijderd longweefsel of pas verkregen humane bronchiale biopsie weefsel, verbieden vele onderzoekers van uitvoeren van onderzoek bij volledig gedifferentieerde menselijke luchtwegen EC. Daarom hebben we besloten om een ​​techniek die 1) zal gebruik maken van niet-invasief verkregen menselijke NEM, 2) een protocol waardoor culturen van gedifferentieerde menselijke luchtwegepitheel, en 3) zijn reproduceerbaar in de meeste lab instellingen met een bestaande weefselkweek infrastructuur te ontwikkelen. Voordelen ten opzichte van bestaande technieken / modellen Geweest nieuw NEC in vergelijking met bronchiale of kleine luchtwegen EC, is veel minder invasief, individueles kan meerdere keren worden biopsied zonder significante bijwerkingen, en oppervlakkige nasale schrapen biopten kunnen worden uitgevoerd in de zieke bevolking die anders niet in aanmerking zouden komen voor onderzoeksgerelateerde bronchoscopies. Niet-invasieve oppervlakkige schaaf biopten naar NEC te verkrijgen, zodat de onderzoeker om donor specificatie stellen a priori, zoals leeftijd, geslacht, status van de ziekte, enz., in overeenstemming met het doel van het onderzoek te worden uitgevoerd. Dus, bij het ontwerpen van onderzoeken onderzoekers zijn niet beperkt door klinisch beschikbaar weefsels / epitheliale specimen, kopen dure gedifferentieerde celcultuur modellen van commerciële leveranciers, of ontwerp invasieve bronchoscopie studies. Bovendien, het gemak om NEM verkrijgen vergroot de mogelijkheid om experimenten in cellen van verschillende donoren, die statistische validatie van de waargenomen resultaten verbetert. Ten slotte, de neus is een van de eerste sites die worden blootgesteld aan elke vorm van stressoren lucht overgedragen. Aldus genereren in organotypischevitro kweeksystemen nabootsen het nasale epitheel zijn nuttig voor het bestuderen inhalatie van virale deeltjes, stoffen, allergenen, of gassen, die gemakkelijk kan worden bereikt door deze celcultuur.

<table><tbody><tr><td>Nasale speculum</td><td>Welch Allyn</td><td>Model 22009</td><td>9 mm, herbruikbaar polypropyleen</td></tr><tr><td>Operationele otoscoop</td><td>Welch Allyn</td><td>Model 21700</td><td></td></tr><tr><td>Rhino probe cell cuvette</td><td>Arlington Scientific</td><td>SY-96-092</td><td>buig het hoofd van de cuvette iets meer</td></tr><tr><td>12-well cultuurplaten</td><td>Corning</td><td>3512</td><td></td></tr><tr><td>Transwell membraan celcultuur inserts</td><td>Corning</td><td>3460</td><td></td></tr><tr><td>Weefselkweekkolf</td><td>Corning</td><td>430639 en 430641</td><td>T25 en T75 geventileerde kolf</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media (met L-Glutamine)</td><td>Gibco</td><td>11875</td><td></td></tr><tr><td>Bronchiaal/Tracheal Epitheelcel Groeimedium</td><td>Cell applications</td><td>511-500</td><td></td></tr><tr><td>BEGM Bronchiale Epitheelcel Groeimedium</td><td>Lonza</td><td>CC-3170</td><td>Dit komt als een kit van één fles medium en flesjes met supplementen.</td></tr><tr><td>Natrium Bicarbonaat 7,5% oplossing</td><td>Gibco</td><td>25080</td><td>Gebruik zoals het is.</td></tr><tr><td>NuSerum</td><td>BD Biosciences</td><td>355104</td><td>Gebruik zoals het is.</td></tr><tr><td>BAMBANKER vriesmedia</td><td>BAMBANKER</td><td>302-14681</td><td>Gebruik zoals het is.</td></tr><tr><td>CoolCell </td><td>Biocision</td><td>HTBCS-136</td><td>(CryoPrep alcoholvrije celvriescontainer)</td></tr><tr><td>PureCol</td><td>AdvancedBioMatrix</td><td>5005-B</td><td>Verdun 1:100 met steriel water (moet ongeveer 0,03 mg/ml zijn) gebruik 500 µl/putje van een 12-putjes plaat</td></tr><tr><td>HBSS met Ca2 en Mg2+</td><td>Gibco</td><td>14025</td><td></td></tr><tr><td>DNAse 1</td><td>Sigma</td><td>DN25</td><td>Los op bij 1,5 mg/ml, dit is een 100x oplossing, voeg 10 µl toe aan elke ml medium</td></tr><tr><td>Trypsine, 0,25%, 1x, met fenolrood</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Gebruik zoals het is</td></tr><tr><td>Sojaboon Trypsine Inhibitor (SBTI)</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Gebruik opgelost in HBSS bij een concentratie van 1 mg/ml</td></tr><tr><td>Retinoïnezuur</td><td>Sigma</td><td>R7632</td><td>Maak een 100 µM stamoplossing (zie hieronder), verdun tot 10 µM met absoluut alcohol, neem 5 µl hiervan en voeg het toe aan 1 ml BEGM medium (onze werkoplossing). All-trans Retinol heeft een extinctiecoëfficiënt van 52.480 in ethanol bij 325 nm. Los 25 mg op in 50 ml absoluut ethanol. Serie verdunningen moeten worden gemaakt, verdun 50 ml stam in 450 ml absoluut ethanol, neem 50 ml hiervan, verdun in 450 ml absoluut ethanol, neem 50 ml hiervan, verdun in 450 ml absoluut ethanol, en neem weer 50 ml hiervan, verdun in 450 ml absoluut Ethanol, neem 100 ml hiervan en verdun in 900 ml absoluut ethanol en lees in de spectrofotometer bij 325 nm, dit getal wordt vervolgens vermenigvuldigd met de verdunningsfactor, vervolgens gedeeld door de extinctiecoëfficiënt van 52.480, dit geeft een getal in mM. Maak een 100 mM stamoplossing (bewaar bij -20 °C) en van deze stamoplossing wordt een 10 mM aliquot gemaakt, de dagelijks benodigde retinoïnezuur zou 5 ml van dit 10 mM aliquot in 995 ml ALI medium zijn. Voorbeeld: 325nm lezing is 1,15. 1,15 x 10.000 (verdunningsfactor) / 52.480 = 0,219 = 219 mM, maak hiervan een 100 mM stamoplossing in absoluut ethanol.</td></tr><tr><td>DMEM hoge glucose (1x), vloeibaar, met L-glutamine en natriumpyruvaat</td><td>Gibco</td><td>11995</td><td></td></tr><tr><td>Rundvlees Hypofyse Extract</td><td>Gibco</td><td>13028-014</td><td>Gebruikt voor BEGM ALI medium.</td></tr><tr><td>Nystatine</td><td>Sigma</td><td>N4014-50 mg</td><td>Maak een oplossing van 3,3 mg/ml.</td></tr><tr><td>Rundvlees Serum Albumine</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1600-100</td><td>Maak een oplossing van 10 mg/ml oplossing in milliQ water.</td></tr><tr><td>PneumaCult-ALI media</td><td>StemCell</td><td>5001</td><td>Dit komt als een kit van één fles medium en flesjes met supplementen. Voor details zie hieronder.</td></tr><tr><td>Hydrocortison </td><td>StemCell</td><td>7904</td><td>Los 2,4 mg hydrocortison op in 1 ml ddH2O (gebruikt om de 200x Hydrocortison stamoplossing te maken)</td></tr><tr><td>Heparine Natriumzout in PBS (2 mg/ml)</td><td>StemCell</td><td>7980</td><td>Gebruik zoals het is. </td></tr><tr><td>Filter kolven (500 ml)</td><td>Corning</td><td>431097</td><td>0,22 µm poriegrootte</td></tr><tr><td>Filter buizen (50 ml)</td><td>Millipore</td><td>SCGP00525</td><td>Steriflip, 0,22 µm poriegrootte</td></tr><tr><td>Pipet tips - ART Barrier Tips</td><td>Molecular Bioproducts</td><td>2139RI, 2069RI, 2179RI</td><td></td></tr><tr><td>Conische buizen, steriel, 15 ml en 50 ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ddH2O, absoluut ethanol, ijs</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>gekoelde centrifuge</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>biologische veiligheidskast</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pipetten (p2, p200, p1000), 9 in glazen pipetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>handschoenen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>labjas met strakke manchetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4"> <table border="1"> <tbody> <tr> <td>Media en oplossingen gebruikt:</td> <td>Recept</td> <td>Gebruikt voor</td> </tr> <tr> <td colspan="3">Algemene opmerking: verwarm altijd het medium tot kam

kweken van menselijke neus epitheelcellen op de air liquid interface

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

In vitro-modellen met humane primaire epitheliale cellen zijn essentieel begrijpen belangrijkste functies van de respiratoire epitheel in het kader van microbiële infecties of geïnhaleerd middelen. Directe vergelijkingen van cellen verkregen van zieke populatie kunnen we verschillende fenotypes karakteriseren en ontleden de onderliggende mechanismen bemiddelen veranderingen in de epitheliale cel functie. Het kweken van epitheliale cellen van de humane tracheobronchiale gebied is goed gedocumenteerd, maar is beperkt door de beschikbaarheid van menselijk longweefsel of invasiviteit van de verkrijging van de bronchiale biopsieën borstels. Nasale epitheelcellen worden verkregen door middel van veel minder invasief oppervlakkige neus schrapen biopsieën en onderwerpen kan meerdere keren worden biopsied zonder significante bijwerkingen. Bovendien, de neus is het toegangspunt tot de luchtwegen en daarmee een van de eerste sites die worden blootgesteld aan elke vorm van lucht overgedragen stressor, zoals microbiële agentia, Verontreinigende stoffen of allergenen. In het kort, nasale epitheelcellen verkregen uit menselijke vrijwilligers worden uitgebreid op gecoate weefselkweek platen, en vervolgens overgebracht op celkweek inserts. Bij het bereiken van confluentie, cellen verder worden gekweekt bij de lucht-vloeistof-interface (ALI), enkele weken, met meer fysiologisch relevante omstandigheden schept. De ALI kweekomstandigheid gebruikt gedefinieerde media leidt tot een gedifferentieerd epitheel dat morfologische en functionele kenmerken vergelijkbaar met de menselijke nasale epitheel, met zowel trilharen en slijm producerende cellen vertoont. Weefselkweek inserts met gedifferentieerde nasale epitheelcellen kunnen worden gemanipuleerd op verschillende manieren, afhankelijk van de onderzoeksvragen (behandeling met farmacologische agentia, transductie met lentivirale vectoren, blootstelling aan gassen of infectie met microbiële agentia) en talrijke verschillende eindpunten vinden geanalyseerd cellulaire en moleculaire pathways, functionele changes, morfologie, enz. In vitro modellen van gedifferentieerde menselijke nasale epitheelcellen onderzoekers kunnen geven tot nieuwe en belangrijke vragen pakken met organotypische experimentele modellen die de nasale epitheel in vivo grotendeels bootsen.

NEC gekweekt volgens de hier beschreven protocol opnieuw differentiëren tot een heterogene laag EC uit trilharen en niet-haarcellen, die de situatie in vivo (figuur 1). Sommige van de gedifferentieerde NEC&#39;s zijn slijm produceren (cellen kleuring in blauw met AB / PAS, figuur 1B). Hoewel de hier gepresenteerde protocol is geoptimaliseerd, kan differentiatie variëren met betrekking tot de verdeling van de totale cel populaties (verschillende verhoudingen van haarcel...

Nasale epitheelcellen, verkregen door middel van oppervlakkige schaaf biopsie van menselijke vrijwilligers, worden uitgebreid en overgebracht naar weefselkweek inserts. Bij het bereiken van confluentie, worden cellen gekweekt bij lucht-water grensvlak, waardoor culturen van trilharen en niet-haarcellen. Gedifferentieerde nasale epitheelcelkweken voorzien levensvatbare experimentele modellen voor het bestuderen van de respiratoire mucosa.

Kweken van Menselijke neus epitheelcellen op de Air Liquid Interface

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

Het algemene doel van deze procedure is het kweken van ongedifferentieerde nasale epitheelcellen aan het lucht-vloeistofgrensvlak. Dit wordt bereikt door eerst oppervlakkige nasale epitheelcellen te verkrijgen van een menselijke vrijwilliger. De tweede stap is het uitplaten van de cellen op weefselkweekplaten om ze vervolgens in flessen te expanderen.Vervolgens worden de uitgebreide cellen in transwells gezaaid en gekweekt tot confluentie. De laatste stap is het verwijderen van het apicale weefselkweekmedium van de confluente celculturen op de transwells om air-liquid interface-kweekcondities te creëren. Uiteindelijk zullen cellen die drie tot vier weken bij de air-liquid interface zijn gekweekt, redifferentiëren tot een mucociliaire nasale epitheelcelcultuur, die het fenotype van het nasale epitheel in vivo nabootst.Het belangrijkste voordeel van deze techniek ten opzichte van bestaande methoden, zoals het kweken van bronchiale epitheelcellen of het verkrijgen van commercieel beschikbare respiratoire epitheelcellen, is de mogelijkheid voor de onderzoeker om vooraf de populatie vast te stellen waaruit de nasale epitheelcellen worden bemonsterd. Nasale biopsieën zijn veel minder inv

culturing-of-human-nasal-epithelial-cells-at-the-air-liquid-interface

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol beschrijft een microfluïdisch co-cultuur model voor gelijktijdige en gelokaliseerde cultuur van epitheliale cellen en bacteriën. Dit model kan gebruikt worden voor het onderzoeken van de rol van verschillende oplosbare moleculaire signalen op pathogenese en het scherm van de effectiviteit van de vermeende probiotische bacteriestammen.

Microfluïdische Co-cultuur van epitheliale cellen en bacteriën voor het onderzoeken van Oplosbaar Signal-gemedieerde interacties

Source: Montefusco-Pereira, C. V. et al. P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives. J. Vis. Exp.(2020)This video demonstrates a co-culture model of bronchial epithelial cells and macrophage-like cells at the air-liquid interface to study host-pathogen interactions. Pathogenic bacterial infection compromises epithelial membrane integrity, triggering macrophage-like cell activation and...

Establishing a Co-Culture Model to Study Host-Pathogen Interactions at the Air-Liquid Interface

Bron: Otter, C. J., et al. Infection of Primary Nasal Epithelial Cells Grown at an Air-Liquid Interface to Characterize Human Coronavirus-Host Interactions. J. Vis. Exp. (2023)Deze video demonstreert de groei van het coronavirus in menselijke nasale epitheelcellen gekweekt op een lucht-vloeistofinterface, wat de infectie en virale replicatie in de menselijke neusholte nabootst.

Virale groei in humane nasale epitheelcellen gekweekt op een lucht-vloeistofgrensvlak

Deze publicatie toont methoden voor succesvol bemonsteren en kweken van nasale epitheliale mucosa van kinderen, en het herprogrammeren van deze cellen tot geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's).

Cultiveren primaire nasale epitheelcellen van Kinderen en Programmeer in geïnduceerde pluripotente stamcellen

Dit protocol beschrijft een onderzoek naar de vroege interacties tussen viraal geïnfecteerde neusepitheelcellen en aangeboren celactivatie. Individuele subsets van immuuncellen kunnen worden onderscheiden op basis van hun activering als reactie op virale infecties. Ze kunnen vervolgens verder worden onderzocht om hun effecten op vroege antivirale reacties te bepalen.

Contactvrij co-kweekmodel voor de studie van innate immuuncelactivering tijdens respiratoire virusinfectie

Een gedetailleerd protocol wordt hier gepresenteerd om een in vitro organoïde model van menselijke neusepitheelcellen te beschrijven. Het protocol heeft opties voor metingen die standaard laboratoriumapparatuur vereisen, met extra mogelijkheden voor gespecialiseerde apparatuur en software.

Cultuur en beeldvorming van menselijke nasale epitheliale organoïden

Dit protocol beschrijft nasale epitheelcelverzameling, uitbreiding en differentiatie naar organotypische luchtwegepitheelcelmodellen en kwantificering van de trilharenslagfrequentie via live-cell imaging en op maat gemaakte scripts.

Verzameling, uitbreiding en differentiatie van primaire menselijke nasale epitheelcelmodellen voor kwantificering van Cilia Beat Frequency

Hier beschrijven we de isolatie, versterking en differentiatie van primaire menselijke nasale epitheelcellen (HNE) op het lucht-vloeistofinterface en een biobankingprotocol dat het mogelijk maakt om met succes versterkte HNE te bevriezen en vervolgens te ontdooien. Het protocol analyseert elektrofysiologische eigenschappen van gedifferentieerde HNE-cellen en CFTR-gerelateerde chloridesecretiecorrectie bij verschillende modulatorbehandelingen.

Primaire menselijke neusepitheelcellen: biobanking in de context van precisiegeneeskunde

Recente ontwikkelingen in door de mens geïnduceerde pluripotente stamceldifferentiatieprotocollen maken de stapsgewijze afleiding van orgaanspecifieke celtypen mogelijk. Hier geven we gedetailleerde stappen voor het onderhoud en de uitbreiding van iPSC-afgeleide luchtwegbasale cellen en hun differentiatie in een mucociliair epitheel in lucht-vloeistof interfaceculturen.

Generatie van luchtwegepitheelcel lucht-vloeistof interfaceculturen uit menselijke pluripotente stamcellen

Het neusepitheel is de primaire barrièreplaats waar alle respiratoire pathogenen voorkomen. Hier schetsen we methoden om primaire neusepitheelcellen te gebruiken die zijn gekweekt als lucht-vloeistofinterface (ALI)-culturen om menselijke interacties tussen coronavirus en gastheer in een fysiologisch relevant systeem te karakteriseren.

Infectie van primaire neusepitheelcellen gekweekt op een lucht-vloeistofinterface om menselijke interacties tussen coronavirus en gastheer te karakteriseren

Hier wordt een reproduceerbare, betaalbare en robuuste methode gepresenteerd voor de isolatie en uitbreiding van primaire bronchiale epitheelcellen voor biobanking op lange termijn en het genereren van gedifferentieerde epitheelcellen door cultuur op de lucht-vloeistofinterface.

Het isoleren van bronchiale epitheelcellen uit gereseceerd longweefsel voor biobanking en het opzetten van goed gedifferentieerde lucht-vloeistof interfaceculturen

Leer het kweken van menselijke neusepitheelcellen op de air-liquid interface voor respiratoir onderzoek. Deze methode creëert een betrouwbaar model dat het neusepitheel in vivo nabootst.

Kweken van Menselijke neus epitheelcellen op de Air Liquid Interface

Meer video's verkennen