Name: 当然の雌ラットをサイクリングで馴化恐怖の消滅を研究するためのプロトコル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: 学ぶ雌ラットの発情周期モニタリングとエストラジオール投与による恐怖消去メモリの変化。性腺ホルモンが記憶形成に与える影響を神経科学と行動心理学の観点から解明する実験プロトコルです。

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Mohammed R. Miladは、NIMHの助成金R01 MH097880とMGHの精神医学科からの機関資金によってサポートされています。

注：このプロトコルですべての手順は、マサチューセッツ総合病院のための施設内動物管理使用委員会（IACUC）となって研究動物管理小委員会によって承認され、健康のガイドラインの国立研究所に準拠しているされています。 1.動物住宅及び取扱い手順<ol><li>木材チップの寝具3-4インチのプラスチックビンのグループで到着すると、家の大人のSprague Dawley雌ラット（200〜225グラムの重さ）、年齢の約8〜10週間。固形飼料および水に自由摂取へのアクセスの食事と12時間の明/暗サイクルでそれらを維持する。 1週間の最低住宅事情と動物施設に順応するために、ラットのままにしておきます。 注：この原稿のすべての手順は、光サイクル中に行われている。 </li><li>この順応期間の後、2〜3日間、5分ごとに、すべての動物を扱う。適切に（胴体によってませ尾でサポートされている）一度にラット1を拾う、確実に固定して保持し、この時間の間に、それらをペット。激しく揺れる、またはより長い期間のために心配して、ストレスをより多く表示された動物を扱う。このプロトコルでは、次の手順に影響を与える可能性があり、ストレスを扱う最小化するためにこれを行います。 注記：動物の取り扱い時の日数および量は、異なる研究室間で変化させることができる。しかし、これらは、同じラボ内での実験の間で一貫している必要があります。 </li></ol>膣スワブスミアと染色手順：発情周期を監視する2. <ol><li> 0.9％食塩水（塩化ナトリウムを蒸留水に溶解）を作る。この溶液中で綿棒を湿らせます。不十分なサンプル収集または細胞の喪失につながる可能性が過飽和を回避するためにペーパータオルを使用して先端ブロット。上向きに離れて膣口から尾を持ち、静かに緩い膣の細胞を捕捉するために、壁の周りの膣管とロール状に綿棒を挿入します。 </li><li>動物はベッドに排尿した場合尿汚染が相同定のために、それが困難になりますようにトンの先端は、新しいものと交換してください。ストレスへの暴露が発情周期を混乱されるため、この手順の間に動物に苦痛を与えないよう十分に注意してください。拭き取りすると、偽妊娠を誘導することができる子宮頸部への余分な刺激を最小にする深すぎないが、迅速挿抜を実現することを目指しています。 注：偽妊娠、 すなわち典型的には約12日間続く ​​非環発情周期、発情25の連続した日として同定することができる。 </li><li>慎重にアプリケータ先端部を除去し、予め標識顕微鏡スライド上にそれをロール。スライド上あまりにも多くの流体としてあまりにもハードダウン押すとドライ一度相同定を困難にすることができないようにしてください。 注：これは個人の好みに応じて行うことができるが、一つのスライドは、各動物の複数の日を含むことができる。 </li><li>スライド上のサンプルの転送を確認してください。断つためのサンプルを収集1スライド上のAl日間連続、より追跡できるようにし、毎日の発情期の変更を識別します。 注：可能な場合はサンプルを収集する人々は、すべての動物のために同じままなら、それはまた、理想的です。 </li><li>スライドが乾燥していると、位相識別のための染色プロトコルを開始する。染色キット（材料の表を参照）を使用し、固定液（水色）のスライドを10回浸す、（ピンク）染色液で10倍、と対比溶液中の5倍（紫）。流水で軽くスライドをすすぐ。顕微鏡下で表示する前にスライドを完全に空気乾燥してみましょう。 NOTE：発情（E）、発情（M）、発情間期（D）、および発情前期（P）26：一般的に4~5日長い発情周期を（この順序で）で構成されている。発情期は、青、角化細胞によって特徴付けられる白血球による発情及び角化および有核細胞の組み合わせ、それらは非常に疎である以外は、発情間期細胞型の存在下での発情と同様であり、紫色に染色された凝集によって発情さの有核細胞（ 図1）。膣スミア診のために等しく有効である上述のものに加えて、種々の染色手順は、がある。 </li><li>実験前に正確に位相を監視するために、少なくとも2つの完全なサイクル（〜8〜10日）のためにサンプルを収集する。サンプルが取られる時間帯と一致している。全体と実験の終了まで毎日の膣スメアサンプルを収集します。 </li></ol> 3.事前暴露<ol><li>実験の開始前に、チャンバーは動物がどんな行動試験の前にコンテキスト（空調室）に順応できるように調節する動物​​を事前に公開します。 <ol><li>すべての実験の前に3日間、一日あたり20〜30分に家のライトが付いている（音減衰ボックスにあります）空調室にメスを事前に公開します。彼らは研究のための彼らの室と事前にさらされているボックスを割り当てます。完全に洗浄トン彼らは行動と発情周期に影響を与えることができるので、臭いを除去するためのセッションと動物の間、彼は箱（壁やトレー）。 </li></ol></li></ol> 4. 1日目：馴化/恐怖条件付け<ol><li>動物は彼らの発情周期の発情期にあることが確認された後、3日間の実験の馴化/コンディショニングフェーズを開始。 <ol><li>実験前の各日に刺激（CS）のプレゼンテーションを条件付け最初のトーンに凍結の前トーンベースライン対策を行ってください。 CS発症前の最初のCS-単独の裁判の開始時に刺激不在の時間間隔の間に（100を掛けた裁判の期間によって不動費やし秒で除して算出、）％の凍結のスコアを取得することによってこれを行います。 注：これらの対策は、馴化、コンディショニング、消滅、およびリコール時とベースライン凍結レベルを評価し、比較することができる。 </li><li>発情後期フェーズの間に絶滅の研修を実施する、発情期の彼らの最後の日に、ラットを条件付け。綿棒と識別する発情期（ステップ2）実験プロトコル（空調/絶滅/リコール）を開始する前に、毎日。発情期は1日より長く続くことのような動物がトレーニングを開始する準備ができたら、使用サイクル履歴が決定するために、位相の長さを予測する。 </li></ol></li><li>空調室では、電気刺激発生器に足ショックグリッドの床に接続します。無条件刺激（US）として0.5〜0.6ミリアンペアの刺激レベルを使用します。条件刺激（CS）として4 kHzの、80デシベルの音を使用してください。 注：これらのパラメータは、実験室間で異なることができ、最適なコンディショニングのために修飾することができる。 <ol><li>凍結解析プログラムは、視覚的な手がかりを（一時的ではなく）が必要な場合は、トーンにLED光を共活性化する。ビデオフレーム内の、オペラントチャンバーの外側に光を置きます。各試験の開始時に、LEDライトを活性化し、それが目の終わりまで照らされ続けるEトライアル。 注：この光は動物では表示されませんとだけ開始及び（凍結挙動を測定するために使用される）を記録したビデオファイル内の試験終了のためのマーカーとして役立つ。 </li></ol></li><li>慣れの5 CS-単独の試験のための空調室に動物を置きます。すぐに慣れセッション以下、恐怖条件付けの7ペアCS-USの試験を行う。 CS音が30秒間持続し、0.5秒、米国のショックにcoterminatesていることを確認してください。 3分を平均可変試行間間隔ですべてのセッション（慣れ、エアコン、絶滅、およびリコール）で試験を実行します。 </li><li>コンディショニングセッションの最後に、次の日まで、ホームケージに及び動物施設に動物を返す。 </li></ol> 5. 2日目：エストラジオール準備<ol><li>このプロトコルの1日目を受けたすべての動物のための発情期を綿棒識別する。エストラジオールを準備します（またE2、、17β-エストラジオール、またはとして知られているビヒクルとしてゴマ油または0.9％生理食塩水を用いて15μgの/ kgの用量の皮下注射のためのベータ - エストラジオール）。 </li><li>注射の準備をそれらがこのプロトコルの1日目に調整したときに測定し、記録した全ての動物の体重を使用するエストラジオールの量を算出する。 </li><li>ラットあたりエストラジオール（ すなわち 0.2ミリリットル）の投与量を標準化するために計算を行う。エストラジオールは、その水不溶性に溶解させることは困難であり、少量のために大量の溶媒を必要とするので、溶解するまで、弱火ゴマ油中のエストラジオールを混合することにより原液を調製。次いで、溶液を汚染物質を除去するために0.22μmのフィルターを通過させることができる。例えば、動物当たり0.2ミリリットル注入量では15μg/ kgの用量を達成するために、ごま油の合計に必要な体積に3000μgのエストラジオール/ 1ミリリットルゴマ油原液の計算されたボリュームを追加する。 注：あるいは、エストロゲンTHAの他の形態を使用する<html> tは、水溶性および溶解が容易である。 </li></ol> 6. 2日目：エストラジオール管理/絶滅トレーニング<ol><li>エストラジオールを皮下投与する。穏やかなピンチに首、肩甲骨の間でたるんだ皮膚を持ち上げ、皮膚折り目によって形成される三角形に注射針を挿入します。 </li><li>エストラジオールの皮下注射後30分、再びコンディショニング室で動物を配置し、絶滅のトレーニングを始める。この絶滅セッションでは、3分の平均を可変試行間間隔で発表され、30秒、4 kHzの、80デシベルの音、からなる各試行で、20 CS-単独の試験を行う。 注：エストラジオール前絶滅の訓練にか、すぐに絶滅後に投与されたときにリコールに対するエストラジオールの効果が発生します。効果は4時間後に絶滅を観察していないので、それはトレーニングセッション15の開始または終了に時間的に近い注入することをお勧めします。 </li></ol>ル &quot;&gt; 7 3日目：絶滅リコール<ol><li>絶滅のトレーニング後24時間、1日目とこのプロトコルの2を完了した動物が綿棒。 </li><li> （1日目と2と同じ）、割り当てられた空調室に動物を置きます。ステップ6.2で説明したように絶滅の訓練のために投与20試行に似て試行間間隔を持つ唯一の3.80デシベルCS-単独の臨床試験で構成されて3 CS-単独の臨床試験（絶滅のリコールの3件の試験）を、提示することによって、絶滅リコールセッションを開始します。 </li><li>リコールセッションが完了すると、ホームケージに動物を返す。 </li></ol> 8.データ解析<ol><li>映像を通じて行動データを取得し、コンピュータソフトウェアを使用して分析する。 注：凍結スコアは手動でも各試行のCSプレゼンテーション中に凍結発作のタイミングによる薬物治療に盲目である実験者によってカウントすることができ、音の間に凍結した時間の割合として表さ。凍結がある30秒CS-USの試験中の呼吸を除いて、運動の完全な欠如によって定義される。 100を掛けた30秒（トライアルの期間）によって（不動）を凍結費やし秒で割って％の凍結を計算します。 </li></ol>

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この原稿の著者は、開示することはなく、競合する経済的利益やその他の利害関係はありません。

恐怖の絶滅は、様々な操作の下で特定され、評価され、馴化恐怖消去を仲介する神経機構と雄ラットで広く研究されてきた。比較的少数の研究は、雌ラットや恐怖消去における性腺ホルモンの役割を検討した。特に恐怖消去に対するエストロゲンの効果を研究するために、自然に循環する雌ラットは、3日間の行動パラダイムに供される。この手順では、馴化/エアコン、絶滅、絶滅リコールのフェーズで構成されています。このプロトコルを使用して、メスのラットは、高エストロゲン発情前期15で消滅する雌に比べて低エストロゲン発情後期段階を示す、より高い冷凍（または損なわ消光リコール）の間に絶滅の訓練を受けたことが実証されている。発情期の間消光トレーニング前のエストラジオールの投与は、消光メモリ16の連結を調節する。これはfreezinの減少によって証明される絶滅のリコール時にグラム。まとめると、これらの結果は、卵巣ホルモンの影響や行動上の発情周期に着目して女性の研究を行うことの重要性を強調。対照実験は、ここに記載されていないが、それはない消光基、すなわち 、さらなる消光記憶固定に関与するプロセスにおけるエストロゲンの影響...

固有性差は、ヒトとげっ歯類の両方で様々な認知行動や学習パラダイム間で観察される。例えば、男性は、良好な空間能力1-3を有し、一方、女性は、一般的に、より強力な口頭および詳細指向能力を有することが報告されている。これらの性差は、性腺ホルモンの影響に一部起因することができる。高いエストラジオールレベルは、女性がより良いである、タスクのパフォーマンスを向上させることが、男性は一般的にうまく4-6を行うタスクのパフォーマンスを悪化させる。この証拠は説得力があるが、完全にヒトでの研究で、実験環境を制御するために、限られた能力は、行動上のこれらの効果はホルモンに特異的に起因することができた場合、それが困難に決定することができる。動物実験は、対照的に、完全に制御された状況を可能にする。 恐怖消去の基本的な神経機構が同定されており、よく男性で研究されているが、かどうかは不明であるこれらのシステムは、女性またはそれらがどのように発情周期にわたって変更は同じである。恐怖条件付けと絶滅広く不安障害に関連する研究を行うために、げっ歯類およびヒトにおける行動パラダイムを使用している。女性は、不安障害のリスクが高いだけでなく、より高い症状の持続期間および重症度7~13を有することを考えれば、これらの研究において、女性を含めることが重要である。本研究では、女性の過少は、性ホルモンの行動への影響のための発情期の監視と会計の課題に起因すると考えられる。しばしば報告されていない行くか、または彼らの研究のための方法に記載されていないこの点に関して遭遇問題にメスを調べてやる研究所。 げっ歯類で証拠を新興恐怖消去における性差は生殖腺ホルモン14-18で変調されていることを示唆している。恐怖条件付けでは、動物は特定の刺激を恐れるように訓練されている。の未強化の発表数の後刺激は、動物はキュー、絶滅と呼ばれるプロセスを恐れることはない学ぶ。どれだけ動物を学習し、絶滅のトレーニングの後にいくつかの時間を与えられた吸光リコールテスト中に観察することができ、このタスクを学習するのメモリを統合します。絶滅のリコール時の少ない恐怖式が良い絶滅メモリの統合を示しています。私たちの研究室からの最近の知見は、エストロゲンは恐怖消去メモリの統合を調節し、絶滅のリコールを改善できることを示唆している。具体的には、発情前期に消滅している雌ラットは、発情周期の位相はその間エストロゲンレベルのピーク、絶滅メモリの展示強化保持を循環させる。対照的に、前または直後の吸光トレーニング15,16の後、外因性エストラジオールの投与によって改善することができ、低エストロゲン発情後期相表示比較的乏しい吸光リコールに消滅する雌。絶滅メモリの統合の神経機構（税込雌の生殖腺ホルモンの役割を）udingすることは明らかではない。 実験動物では、ホルモンの役割は、去勢および卵巣摘出などの侵襲的な外科的除去の手順を使用して調べることができる。手術からの回復に続いて、性腺ホルモンは、多くの場合、外因的行動のタスク19の実行中に操作されます。このアプローチは、性ホルモンについての重要な情報を提供し、それが20〜23（タイミングと投与量の面で）性腺ホルモンのよく制御された操作を可能にしているため便利ですしている。しかし、このアプローチは、発情周期にわたって生じる、天然に存在する変動の影響を評価せず、また、彼らは、それによってヒトの研究に並進可能性を制限する、「正常な」動物を表しています。これは、特定の発情周期の位相、及びサイクル内のエストロゲン受容体発現の変化で女性ホルモンのレベルがピークと衰退することを十分に文書化された、と卵巣摘出24の後。したがって、確実に高および低エストロゲン状態はそれらの寿命を通して、女性に与えることができるという効果を研究するために無傷の生殖腺とメスの研究を実施し、実験計画を改善する必要がある。 このプロトコルは、恐怖消去に関与神経生物学的システムでのエストロゲンの影響に焦点を当てています。 1）慎重に、発情周期を監視2）全身投与のためのエストラジオールの効果的な用量を準備し、3）恐怖条件、絶滅が含ま行動パラダイムに従っており、自然にサイクリング雌ラットをでリコール：それはどのように説明しています。このプロトコルは、より良好な消光挙動恐怖条件付けで観察された性差を理解するために研究を支援するために他の薬理学的操作および細胞および分子ツールを使用して修飾することができる。以下の手順は、私たちの研究室内で利用するものである、と私はこれらの手順の多くの変形が存在することに注意してくださいnの文学。

<table><tbody><tr><td>恐怖コンディショニングチャンバー</td><td>Coulbourn Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graphic State</td><td>Coulbourn Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sound-attenuating box</td><td>Med Associates, Inc.</td><td>NIR-022MD</td><td></td></tr><tr><td>エストラジオール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1024</td><td>皮下注射用ごま油</td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3547-250ML</td><td></td></tr><tr><td>Freezescan</td><td>Cleversys, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ディップクイックステイン</td><td>ヨルゲンセンラボラトリーズ株式会社</td><td>J0322A1、J0322A2、J0322A3</td><td></td></tr><tr><td>コットンチップアプリケーター</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>23-400-114</td><td>6インチ、滅菌</td></tr><tr><td>0.9% 生理食塩水</td><td>LabChem, Inc.</td><td>LC23460-2</td><td>塩化ナトリウム w/v</td></tr><tr><td>セレクトフロスト顕微鏡スライド</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-550-003</td><td></td></tr><tr><td>ビレックスII 256</td><td>ディバーシー株式会社</td><td>5019317</td><td>水で1:256を希釈します</td></tr><tr><td>Luer-Lokチップ 1mlシリンジ</td><td>ベクトン・ディキンソン</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>皮下注射用使い捨て針</td><td>Exelint International, Co.</td><td>26402</td><td>26ゲージ</td></tr></tbody></table>

当然の雌ラットをサイクリングで馴化恐怖の消滅を研究するためのプロトコル

Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

条件付け恐怖の絶滅は広範囲に男性のげっ歯類で研究されてきた。最近では、特定の行動のタスクとレスポンス行動のための神経機構は、女性と男性では異なっていることを示す研究が増えてきた。調査研究にメスを使用すると、それらの発情周期中の性腺ホルモンの変化の挑戦を表すことができます。このプロトコルは、雌ラットの恐怖絶滅メモリの統合におけるエストロゲンの役割を調査するのに有用である十分に確立された手順を説明します。発情周期と外因性エストロゲンの投与の前に消光訓練の位相が2​​4時間後に吸光リコールに影響を与えることができる。ここで説明発情相同定のための膣拭き取り技術は自然に性腺ホルモンをサイクリングの検査と操作を補助する。この基本的な齧歯動物モデルの使用は、中恐怖消去メモリを調節することができるエストロゲンメカニズムを描写することができるメス。

この恐怖消リコールプロトコルでは、パーセント凍結は恐怖の指標として測定した。よく消滅と絶滅の訓練の記憶を保持した動物は、絶滅のリコール時の行動試験の最終日に、低恐怖を示した。オスとメスのラットは大幅にエアコン、絶滅の間、条件付け恐怖の表情が異なり、相（ 図2）覚えていません。動物は高および低エストロゲン発情位相群として別々に分析されている場合しかし、性差が明らかになります。発情周期の低エストロゲン発情後期フェーズの間に絶滅の訓練を受ける雌ラットは、絶滅の3日目のメモリだけでなく、発情前期の訓練を受けたもの（ 図3）を覚えていません。これらの発情後期の女性はまた、男性に比べて消光リコール（貧弱な絶滅メモリ）の間に有意に大きな恐怖の回復を示す。しかし、発情後期の女性は皮下injecあるときテッドは絶滅学習の前にエストラジオール15μgの/ kgの用量で、恐怖の絶滅メモリの統合は、絶滅のリコール（ 図4）の間に低凝固によって実証されるように強化されているように見える。したがって、これらのデータは、性腺ホルモンは恐怖消去リコールを調節し、また、...

性腺ホルモンは、恐怖、消滅記憶を含む多くの実験パラダイムにおける記憶形成を調節します。このプロトコルは、発情周期のモニタリングや外因性エストロゲン投与など、自然に循環する女性の絶滅時に特に性腺ホルモンの影響を調査するための一連の方法を説明しています。

Extinction of conditioned fear has been extensively studied in male rodents. Recently, there have been an increasing number of studies indicating that ...

この手順の全体的な目標は、エスラサイクルの低ホルモン状態と高ホルモン状態の間の女性の恐怖絶滅行動に対する性腺ホルモンの影響と、エストラジオールが外因的に投与された場合の役割を調べることです。これは、まず成体の雌ラットのesraサイクルをモニタリングし、実験前に彼らがどの段階にあるかを特定することによって達成されます。次に、発情期にある動物は、居住と恐怖の条件付けのために割り当てられた部屋に入れられます。翌日、動物が発情期になると、雌にエストラジオールまたはビヒクルを注射し、恐怖の絶滅訓練を受けます。最後に、3日目に、動物は前日の絶滅セッションの想起をテストするために同じチャンバーに戻されます。最終的に、ESTストリースの同定のための膣スワブにより、研究者は性腺ホルモンの自然な変動を操作して、恐怖の消滅記憶への影響を研究することができます。このプロトコルは、性差の分野で重要な疑問、例えば、恐怖の消滅過程は男性と女性で異なるのかなど、答え出すために使用することができます。もしそうなら、これらの違いを満たすホルモンと神経生物学的メカニズムは何ですか?このプロトコルの主な利点は、そうする方法を共有することにより、絶滅を恐れる女性の研究を促進するのに役立つことです。これらの方法に不慣れな研究者は、手順が時間がかかり、適切な技術に大きく依存する可能性があるため、eserサイクルを確実に監視するのに苦労することがよくあります。これらの研究の意味合いは、恐怖や不安に関連する障害に対する性別特異的な治療オプションに貢献する可能性があります。これは、女性が男性の2倍もこれらの精神病理を発症する可能性が高いことを考えると、重要なことかもしれません。リサ・マンは、研究室のポスドクであり、またケア・コバートでもあります。ラボの研究助手が手順を示します 発情周期を監視するためのサンプルを収集するには。0.9%生理食塩水を準備した後、綿の先端のアプリケーターを液体に浸し、ペーパータオルを使用して余分な溶液の先端を吸い取り、ラットの尾を上に保持し、苦痛を引き起こさないように注意してください。綿の先端を膣管に深くなりすぎないようにそっと挿入し、壁の周りを転がして緩んだ膣細胞を捕らえてからすばやくします。液体を移しすぎないようにチップを取り外し、アプリケーターチップを事前にラベル付けされた顕微鏡スライドにそっと転がし、サンプルがスライドに移動することを確認します。少なくとも2サイクルにわたってサンプルを採取し、1枚のスライドで数日間連続して転写することで、日々のESTエクストラをより適切に追跡し、特定することができます。相変化 スライドが乾いたら、固定液に10回、次に染色液に10回浸漬します。そして最後に、対比染色液に5回入れます。水でやさしくすすいでください。コンディショニング実験の開始前に顕微鏡で見る前にスライドを完全に風乾させ、ハウスライトを1日20〜30分間オンにして3日間、女性をコンディショニングチャンバーに事前にさらして、環境に順応できるようにします。彼らが事前に露出したボックスを研究のチャンバーとして割り当てます。セッションと動物の間のボックスを徹底的に清掃して、行動やESTストレスサイクルに影響を与える可能性があるため、臭いを取り除きます。動物がESTエクストラサイクルの発情期にあることを確認したら、慣れ条件付け段階を開始します。最初のトーンコンディション刺激の前に、動物が刺激中に携帯電話を消費する秒数を測定することにより、フリーズのプレトトーンベースライン測定を行います。時間間隔がない場合は、2番目に動かない状態で過ごした時間を試行の期間で割って、フリーズスコアを計算します。ME発情期に絶滅訓練を行うには、ESTROの最終日にラットをスワブで決定するようにコンディショニングします。動物をコンディショニングチャンバーに入れ、CSのみの慣れ試験を実施します。CSトーンを30秒間誘導します。次の試行まで平均 3 分待った後、コンディショニングの前に CS 単独の試行をさらに 4 回、合計 5 回の試行を繰り返します。フットショックグリッドフロアを電気刺激発生器に接続します。無条件刺激として0.5〜0.6ミリアンペアの刺激レベルを使用するか、慣れセッションの直後のCSとして4キロヘルツ80デシベルトーンを使用します。恐怖条件付けのペア CS US 試行を開始するには、32 番目の CS トーンを提示し、その後、約 3 分間の試行間隔で区切られた 0.5 秒の米国ショックを示します。コンディショニング セッションの最後に、ペアの試行をさらに 6 回繰り返します。動物を自宅のケージに戻し、2日目の翌日まで動物施設に戻します。プロトコルの初日を受けたすべての動物のME発情期を綿棒で拭いて特定した後、ゴマ油または0.9%生理食塩水で十分なエストラジオールを準備し、各動物が1キログラムあたり15マイクログラムの用量を受け取り、ホルモンを皮下投与します。肩甲骨の間のゆるい皮膚を首で軽くつまむように持ち上げ、皮膚のひだによって形成される三角形に注射器を挿入します。動物が注射を受けてから30分後、動物をコンディショニングチャンバーに入れ、20CSを単独で行うことにより、絶滅訓練を開始します。各試行は、32番目の4キロヘルツ、80デシベルトーンで構成され、24時間後の試行の間に約3分間あります。3日目は、1日目と2日目にセッションを完了した動物を、割り当てられたコンディショニングチャンバーに入れた後、綿棒で拭きます。リコールセッションの完了時に、試験の間に約3分を挟んで3つのCs単独の試験を実施することにより、絶滅リコールセッションを開始し、動物を自宅のケージに戻し、この恐怖絶滅プロトコルのテキストプロトコルに従ってデータを分析します。よく消滅し、絶滅訓練の記憶を保持していた動物は、絶滅リコール中の行動試験の最終日に低い恐怖を示しました。ここで示したように、雄と雌のラットは、条件付けられた恐怖表現に大きな違いはない。各フェーズでは、動物を高エストロゲンES相グループと低エストロゲンES相グループとして別々に分析すると、性差が明らかになります。このグラフは、ESTエクストラサイクルの低エストロゲンmeesフェーズ中に絶滅トレーニングを受ける雌ラットである恐怖の絶滅記憶に対するエストロフェーズの影響を示しています。3日目の絶滅記憶や、PROEで訓練された記憶を思い出さないでください。しかし、絶滅前にメトリ雌に1キログラムあたり15マイクログラムのエストラジオールを皮下注射すると、恐怖の記憶の定着が促進されるように見えます。これは、消滅想起時の凍結が少ないことで示されるように、恐怖の消滅記憶の固定化が見られます。したがって、これらのデータは、性腺ホルモンが恐怖の消滅想起を調節し、条件付けられた恐怖の消滅行動の性差を媒介できることを示しています。カニューレ挿入手術や免疫組織化学などの追加の手順は、ここで説明する方法と組み合わせて実行して、エストラジオールは恐怖、消滅、記憶の固定を調節するために脳内でどこに作用しているのか、エストラジオールはこれらの領域内のニューロン活動をどのように変化させているのかなどの質問に答えることができますか?このビデオを見た後、あなたは明確なex拡張の自然なリサイクル雌ラットとエストラジオールの影響を研究する方法について明確に理解しているはずです。

protocol-for-studying-extinction-conditioned-fear-naturally-cycling

Research

JoVE Journal

Behavior

行動

復職の手続きとして知られている再発の動物モデルは、薬物探索に再発のストレスの役割を研究するために広く使用されている。ここで、我々は、穏やかな、断続的な電気フットショックへの急性曝露を経由して実験用ラットに求めてコカインの回復を誘導する方法で報告する。...

実験用ラットに求めてコカインのフットショック誘発性回復を勉強するための手順

恐怖条件は絶滅と呼ばれるプロセスを介して抑制性の低下が、そのような時間やストレスへの暴露の通路のような条件の下で再浮上することができますすることができます。我々のプロトコルは再固定ウィンドウ（再活性メモリの再貯蔵期）に絶滅を導入することによって、恐怖の回復を防ぐ新しい方法を提示します。...

再固定ウィンドウの間に絶滅の訓練は恐怖の回復を防ぎ

出典: Childs, J. E., et al.絶滅学習に関連する経路の可塑性を誘導するツールとしての迷走神経刺激。J. Vis. 経験。(2015年)このビデオでは、凍結行動を軽減するためのラットモデルにおける迷走神経刺激 (VNS) の方法を示します。恐怖状態のラットは、音の再曝露中に VNS...

凍結行動を軽減するためのラットモデルにおける迷走神経刺激

以下の実験では、マウスでの痕跡恐怖条件付けのためのプロトコルを記述します。連想記憶のこのタイプは、中立的な刺激と無条件刺激を分離し、トレース期間を含む。...

マウスにおける恐怖条件付けをトレース

迷走神経刺激（VNS）は、行動の範囲を変更するには、前脳にターゲットを絞ったシナプス可塑性を誘導するためのツールと​​して浮上しています。このプロトコルは、恐怖の絶滅メモリの統合を容易にするためにVNSを実装する方法について説明します。...

ツールとしての迷走神経刺激は、絶滅の学習のための関連経路の可塑性を誘導するために

ここで応力が強化された恐怖 (特性的自己) を学習実験ラット ・...

恐怖のストレス強化学習、心的外傷後ストレス障害の堅牢な齧歯動物モデル

我々は、ラットの過剰訓練および恐怖インキュベーションを生み出す拡張された恐怖調節プロトコルを記述する。このプロトコルは、25のトーンショックの組み合わせ(すなわち、オーバートレーニング)と、トレーニング後の48時間(短期)および6週間(長期)のコンテキストおよびキューテスト中の条件付き凍結応答の比較を伴う単一のトレーニングセッションを伴う。...

ラットの拡張恐怖調節プロトコルを用いた恐怖インキュベーション

防御的な行動応答は、脅威の強度、近接性、および暴露のコンテキストに依存します。これらの要因に基づいて、個々の被験者内の条件付き凍結と飛行行動の間の明確な移行を引き出す古典的なコンディショニングパラダイムを開発しました。このモデルは、不安、パニック、心的外傷後ストレス障害に関与する病理を理解するために重要です。...

凍結と飛行行動を研究する新しいパブロビアン恐怖コンディショニングパラダイム

恐怖の文脈における飛行行動を研究するために、修正された恐怖条件付けプロトコルを導入します。このプロトコルは、マウスが恐怖条件付けにおける手がかりの提示中に一貫して飛行行動を示すことを保証します。...

マウスの飛翔行動を誘導するための修正された恐怖条件付け

観察的恐怖パラダイムは、げっ歯類の代理凍結を感情的共感のモデルとして評価します。この手順では、観察者のげっ歯類を同種のデモンストレーターにさらし、嫌悪感のある足のショックを受けて、共感的な凍結反応を引き出す必要があります。観察的恐怖アッセイを採用することにより、研究者は感情的共感の根底にある神経メカニズムを調査できます。...

マウスにおける感情的共感のモデルとしての観察的恐怖

学ぶ雌ラットの発情周期モニタリングとエストラジオール投与による恐怖消去メモリの変化。性腺ホルモンが記憶形成に与える影響を神経科学と行動心理学の観点から解明する実験プロトコルです。

当然の雌ラットをサイクリングで馴化恐怖の消滅を研究するためのプロトコル

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