Name: דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 36 s
Description: למדו ליצור מודל של פגיעה מוחית בחולדות עוברים באמצעות היפוקסיה-איסכמיה שיטתית ודלקת תוך-שפירית. מודל זה חושף מנגנוני פגיעה פרינטלית הקשורים לזיהום ואי-ספיקת שלייה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לדן Firl, כריס קורבט וג&#39;סי Denson, PhD. מימון ניתן על ידי NIH NINDS R01 NS060765 לSR, P30 Cobre תכנית הפיילוט לLJ ותכנית חתימת בריאות הילד לLJ באוניברסיטת ניו מקסיקו.

מוסדי טיפול ושימוש בועדות בבית החולים לילדים בבוסטון וגם באוניברסיטת ניו מקסיקו למדעי בריאות המרכז אישרו את כל הפרוצדורות. הערה: לפני תחילת ההליך, החותם, לעקר וחיטוי כל מכשירי הניתוח ווילאות כירורגי. בנוסף, להכין תרופות לאחר ניתוח בבקבוקונים סטריליים כולל bipivucaine 0.125% ו 0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות. גם להכין את פתרון lipopolysaccharide (LPS) סטרילי: 0.04 מ&quot;ג / מיליליטר LPS (0111: B4) בתמיסת מלח סטרילית מכילה לדלל צבע הכחול של אוון. 1. הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרום הרדמה בחולדת ספראג Dawley עוברית יום 18 (E18) בהריון בתערובת של 3% חנקן isoflurane מאוזן 70% וחמצן 30%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר עכברוש מתא האינדוקציה ולמקם את פרקדן החולדה על שמיכת מים במחזור עטופה כירורגית נקבעה על 37 מעלות צלזיוס. העבר את ההרדמה לחרטום ולהפחית isofluraרמת ne עד 2%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להחיל משחת עיניים לכל עין כדי למנוע התייבשות של קרנית. במהלך ההליך לפקח ללא הרף טמפרטורה, קצב נשימה וקצב לב של החיה. הפיסיולוגיה של האם צריכה להישאר יציבה לאורך כל ההליך. </li></ol> 2. הכנת כירורגי וליטוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוצץ חיה קטן באמצעות להסיר את כל השיער באזור הבטן התחתון. לגלח בתבנית מלבנית בזהירות כדי למנוע שסחבו את הפטמות או יצירת פריחה גילוח שיכול להיות מעצבן לסיעוד בעתיד של גורים שנולדו בשידור חי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את עור בטן לסירוגין יישום של לשפשף אתנול povidone- יוד ו -70% עם צמר גפן סטרילי. חזור על השיחים כך שpovidone- יוד ו -70% אתנול הוא כל מיושם 3x לסירוגין אופנה. בואו יבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר עומק ההרדמה באמצעות היעדר רפלקס הבוהן קמצוץ. בהיעדר רפלקס וגירויים כאב, להפחית את רמת isoflurane עד 1%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במגבות ניתוח סטרילי,לעטוף את החיה. דואג למקם את הווילאות בזווית מתאימה כזה שהם למקסם את כמות השקיה הנוזל הם סופגים, ואינם חוסמים את זרימת דם לקרני הרחם. </li></ol> 3. הבטן laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל לעשות חתך קו האמצע 3 סנטימטר בעור הבטן מוכן. בבוטות לנתח את שכבת העור מfascia הבטן עם מספריים. בעזרת מלקחיים ומספריים כירורגיות, לרומם את שכבת fascial הבטן ולעשות חתך של alba Linea avascular כדי לקבל גישה לחלל הצפק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים תחבושות על הצד החיצוני של החתך ולהרטיב עם תמיסת מלח סטרילית. בעזרת מלקחיים בוטים ולחץ חיצוני על הבטן, להסיר בעדינות את קרן הרחם מחלל הצפק ולארגן בגזה הלחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להימנע מהסתבכות בזהירות וקשר עם מעיים. לארגן עוברים באמצעות מלקחיים על ידי יצירת קשר רקמת השריר רק בין שקים מי שפיר הבודדים.לחשוף ולבודד את עורקי רחם 4 באמצעות נתיחה בוטה. יש להקפיד לנתח את עורקי רחם: הערה. רקמה וכלי מקיף את עצמם מאוד עדינים. נזק לכלי אימהיים יכול לגרום לדימום, ובמקרים חמורים, מוות עוברי ואימהי. </li></ol> 4. מיקום של קליפים מפרצת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח קליפ פרצה G עכברוש 30 בכל עורק רחם. להבטיח הפסקת זרימת דם, כוללים הפרוקסימלי וקטניות דיסטלי, ומחשיך של כלי הרחם כולל שליות נפרדות. לכסות את הקרניים חשופות ותחום כירורגית כל עם גזה ולהשקות עם תמיסת מלח סטרילית. דואג לשמור על השדה לח עם השקיה בערך כל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 60 דקות, להסיר את הגזה ולהשקות את השדה. ודא שקרן הרחם והכולים טבולה במידה מספקת להסרת סרטון מוצלחת. הוצא בעדינות כל קליפ פרצה באמצעות מלקחיים. יש להיזהר שלא לגרום לטראומה לכלי השיט, ושימורשלמות רקמות עין במהלך ההסרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביסודיות להשקות את קרן הרחם ושדה, דואג להסיר כל אשכולות תועים של גזה מהצ&#39;קים מי השפיר. </li></ol> 5. הזרקה של lipopolysaccharide לשפיר Sacs <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בבסיסו של כל שק מי שפיר בודד, רק קדמי לצלחת השליה, להזריק של LPS (4 מיקרוגרם / שק) עם הצבע הכחול של אוון בדילול 100 μl למי שפיר. שימוש במלקחיים בוטים לייצב ולסובב כל שק מי שפיר למיקום אופטימלי להזרקה. הצבע הכחול של לדלל אוון הוא חומר ניגוד שהוא מועיל במאשר מיקום מזרק מתאים והזרקה. הערה: שימוש במזרק רק 0.3 מיליליטר אינסולין אולטרה דק עם מחט G 8 מ&quot;מ 31 מצורפים לזריקות תוך-השפיר. שימוש במחטי מד גדולים יותר תגרום לאובדן כרוני מי שפיר, מוות עוברי וספיגה של ההריון. כמויות קטנות של דליפה מי שפירה עם הסרת המזרק יכולות להיות mitigated על ידי לחץ ישיר לשק מי השפיר. עוברי עכברים מסוימים עשויים לסבול מידת המיעוט מי שפיר. עם זאת, אובדן חריף מי שפיר מלנקב עם מחטים גדולות מד, או לנקב מקרי וכתוצאה מכך דליפת נוזל כרונית, תוצאות באובדן של העובר ובמקרים חמורים, אובדן ההריונות שכנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשקות את רחם קרנות 3x עם תמיסת מלח סטרילית. </li></ol> 6. סגירת laparotomy <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, לחזור בזהירות את קרן הרחם לחלל הצפק. הבטחת מרחב מספיק בין שקים מי השפיר וחתך קו האמצע, מחדש משוער קצות שכבת musculofascial באמצעות תפר 3-0 משי ריצה. להיות מודע למיקום של שקים מי השפיר בזמן סגירת חתך השריר. היזהר שלא לתפור לאו באמצעות שק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> -משוער מחדש את שכבת העור, באמצעות תפר 3-0 משי ריצה, סגירת שכבת העור. הערה: laparotomy צריך להיות סגור בשתי שכבות של תפרים רציפים כדי לאפשרלעור והרחבת שרירים עם הגדלת הריון. תפרים רציפים מאפשרים למתח פצע מופץ באופן שווה. תפרים בהפרעה הם פחות רצויים כקשרים מרובים הם מעצבן וניתן לעסו בקלות על ידי החולדה על מתאושש מהרדמה. סיכות כירורגי אינן רצויים. זנבות של הקשרים כירורגית יש לחתוך (&lt;3 מ&quot;מ) קצר מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1 מיליליטר של קצוות סביב פצע 0.125% מתחת לעור bupivacaine באמצעות מחט 26 G. לנהל מנה אחת של 0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות תת עורי בעורף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את isoflurane ועכברוש יבש מגבת לפי צורך. מניחים בכלוב בבית נקי ולעקוב אחר התאוששות מן ההרדמה. ודא עכברוש לא יהפוך היפותרמיה. </li></ol> 7. לאחר ניתוח שחזור וטיפוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג העכברוש כל שעות 8-12 במשך 72 שעות ולאחר מכן מדי יום עד גורים נולדים (כ E22 או E23). לנהל מינונים נוספים של שעות / 72 שעות q8-12 עצירות או PRN כפי שהוכתב על ידי IACUC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג חולדות לסימנים של כאב, אי נוחות, דימום מנרתיק או דימום מהאתר כירורגית. בדוק את התפרים וחתך ודואג להבטיח חולדה לא לעיסה או הסרת התפרים שלהם בטרם עת. למרות שנדיר במיוחד, חולדות שתתפשרנה התפרים שלהם נמצאות בסיכון לבקיעת פצע. הערה: לפעמים חולדות עשויות להבלע כמויות עודפות של פריטי מצעים או שאינו מזון, מכונה פיקה, כתופעת לוואי של ממשל עצירות. למרות שמאוד נדיר, חולדות חייבות להיות במעקב לפיקה וחסימת מעי לאחר פוטנציאלית. </li></ol> 8. עיבוד רקמות וCryosectioning <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתכונן לHematoxylin וEosin (H &amp; E) מכתים של המוח לאחר הלידה, להסיר גורים מהכלוב בביתם ביום שלאחר לידה 2 (P2). בעזרת מספריים כירורגיות לערוף גורי חולדה ובעדינות להסיר את המוח מהגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרוק מוח תיקון בצינור חרוטי 15 מיליליטר מכיל 7 מיליליטר של paraformaldehyde 4% בופר פוספט(PBS). מניחים מוח על 4 מעלות צלזיוס ולתקן במשך 72 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 72 שעות, להעביר את המוח לפתרון PBS סטרילי המכיל 30% סוכרוז (w / v) ולחזור ל4 מעלות צלזיוס. הערה: ברגע שהמוח של הירידה בתמיסת סוכרוז הם מוכנים להיות מחולקים על cryostat. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות להקפיא את המוח ולעלות על העלי cryostat לרכישת חלקי העטרה קפוא. חותך 20 מיקרומטר סעיפי העטרה קפוא והר בשקופיות. סעיפים להבטיח נאספים באופן סדרתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר שקופיות לייבוש בטמפרטורת חדר למשך הלילה. חנות שקופיות ב -20 ° C. </li></ol> 9. Hematoxylin וEosin מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח שקופיות רכובים סעיפים קפוא וחמות לטמפרטורת חדר. הערה: הכן את כל הפתרונות טריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגלשות מקום בשקופית סט חם עד 50 מעלות צלזיוס במשך שעה 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת שקופיות למדף מכתים. טובלים שקופיות 10x במים מזוקקים כפולים deionized (DDH 2 O). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בhematoxylin 100% במשך 5 דקות. סִישלי בhematoxylin יכולות להיות מותאם תלות בדרגה של מכתים סגול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 15x באלכוהול חומצה (250 מיליליטר אתנול 70% + 1 מיליליטר חומצה הידרוכלורית מרוכז). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ב 1% ליתיום קרבונט למשך 2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 4x ברז H 2 O, ולתת לעמוד בH רז הנקי 2 O דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ב -95% אתנול דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 7x ב100% Eosin. מספר מטבלים בEosin יכול להיות שונה בהתאם למידת צביעה הוורודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טובלים שקופיות 5x באתנול 95%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5x שקופיות לטבול בשינוי טרי של 95% אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות ב 100% אתנול 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בשינוי טרי של 100% אתנול 1 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בקסילן 100% במשך 15 דקות. הערה: צעדי קסילן וcoverslipping צריך להתרחש במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה שקופיות בשינויים טריים של קסילן במשך 15 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coverslip עם Permount ולתת יבש במנדף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונת שקופיות עם מיקרוסקופ אור. </li></ol>

<ol><li>Blencowe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preterm+birth+associated+neurodevelopmental+impairment+estimates+at+regional+and+global+levels+for+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Preterm birth associated neurodevelopmental impairment estimates at regional and global levels for 2010.</a> Pediatr Res. 74, Suppl 1. 17-34 (2013).</li>
<li>Mwaniki, M. K., Atieno, M., Lawn, J. E., Newton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+neurodevelopmental+outcomes+after+intrauterine+and+neonatal+insults+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Long term neurodevelopmental outcomes after intrauterine and neonatal insults a systematic review.</a> Lancet. 379, 445-452 (2012).</li>
<li>Dammann, O., Leviton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+or+sustained+systemic+inflammation+and+the+preterm+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Intermittent or sustained systemic inflammation and the preterm brain.</a> Pediatr Res. 75, 376-380 (2014).</li>
<li>Leviton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiologic+and+histologic+characteristics+of+the+extremely+preterm+infant%27s+placenta+predict+white+matter+damage+and+later+cerebral+palsy%5BTitle%5D)+AND+%22the+ELGAN+study+Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Microbiologic and histologic characteristics of the extremely preterm infant's placenta predict white matter damage and later cerebral palsy.</a> the ELGAN study Pediatr Res. 67, 95-101 (2010).</li>
<li>Redline, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+responses+in+the+placenta+and+umbilical+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Inflammatory responses in the placenta and umbilical cord.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 11, 296-301 (2006).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+chorioamnionitis+is+the+most+common+placental+lesion+in+late+preterm+birth%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Chronic chorioamnionitis is the most common placental lesion in late preterm birth.</a> Placenta. 34, 681-689 (2013).</li>
<li>Lee, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+histologic+chorioamnionitis+is+a+risk+factor+for+adverse+neonatal+outcome+in+late+preterm+birth+after+preterm+premature+rupture+of+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Acute histologic chorioamnionitis is a risk factor for adverse neonatal outcome in late preterm birth after preterm premature rupture of membranes.</a> PloS one. 8, e79941(2013).</li>
<li>Pappas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chorioamnionitis+and+early+childhood+outcomes+among+extremely+low+gestational+age+neonates%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Peds%22%5BJournal%5D)">Chorioamnionitis and early childhood outcomes among extremely low gestational age neonates.</a> JAMA Peds. 168, 137-147 (2014).</li>
<li>Gaillard, R., Arends, L. R., Steegers, E. A., Hofman, A., Jaddoe, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+and+third+trimester+placental+hemodynamics+and+the+risks+of+pregnancy+complications+the+Generation+R+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Second and third trimester placental hemodynamics and the risks of pregnancy complications the Generation R Study.</a> Am J Epidemiol. 177, 743-754 (2013).</li>
<li>Trivedi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+placental+inflammation+but+not+adrenal+activation+is+associated+with+extreme+preterm+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Fetal placental inflammation but not adrenal activation is associated with extreme preterm delivery.</a> Am J Obstet Gynecol. 206, 236(2012).</li>
<li>Yanowitz, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+disturbances+in+premature+infants+born+after+chorioamnionitis+association+with+cord+blood+cytokine+concentrations%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic disturbances in premature infants born after chorioamnionitis association with cord blood cytokine concentrations.</a> Pediatr Res. 51, 310-316 (2002).</li>
<li>Jantzie, L. L., Corbett, C. J., Firl, D. J., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+Erythropoietin+Mitigates+Impaired+Cerebral+Cortical+Development+Following+Subplate+Loss+from+Prenatal+Hypoxia+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Postnatal Erythropoietin Mitigates Impaired Cerebral Cortical Development Following Subplate Loss from Prenatal Hypoxia Ischemia.</a> Cereb Cortex. , (2014).</li>
<li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+attenuates+loss+of+potassium+chloride+co+transporters+following+prenatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin attenuates loss of potassium chloride co transporters following prenatal brain injury.</a> Mol Cell Neurosci. 61, 152-162 (2014).</li>
<li>Jantzie, L. L., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythropoietin+signaling+promotes+oligodendrocyte+development+following+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Res%22%5BJournal%5D)">Erythropoietin signaling promotes oligodendrocyte development following prenatal systemic hypoxic ischemic brain injury.</a> Pediatric Res. 74, 658-667 (2013).</li>
<li>Mazur, M., Miller, R. H., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+erythropoietin+treatment+mitigates+neural+cell+loss+after+systemic+prenatal+hypoxic+ischemic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Peds%22%5BJournal%5D)">Postnatal erythropoietin treatment mitigates neural cell loss after systemic prenatal hypoxic ischemic injury.</a> J Neurosurg Peds. 6, 206-221 (2010).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+induced+by+graded+prenatal+systemic+hypoxic+ischemic+insults+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Developmental changes induced by graded prenatal systemic hypoxic ischemic insults in rats.</a> Neurobiol Dis. 18, 568-581 (2005).</li>
<li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroanatomical+sensorimotor+and+cognitive+deficits+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neuroanatomical sensorimotor and cognitive deficits in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Brain Pathol. 22, 1-16 (2012).</li>
<li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+prenatal+ischemia+on+behavior+cognitive+abilities+and+neuroanatomy+in+adult+rats+with+white+matter+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Impact of prenatal ischemia on behavior cognitive abilities and neuroanatomy in adult rats with white matter damage.</a> Behav Brain Res. 232, 233-244 (2012).</li>
<li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+musculoskeletal+and+locomotor+alterations+in+adult+rats+with+white+matter+injury+following+prenatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Intl+J+Devel+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mild musculoskeletal and locomotor alterations in adult rats with white matter injury following prenatal ischemia.</a> Intl J Devel Neurosci. 29, 593-607 (2011).</li>
<li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+pattern+of+interaction+between+in+utero+hypoxia+ischemia+and+intra+amniotic+inflammation+disrupts+brain+development+and+motor+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflam%22%5BJournal%5D)">Complex pattern of interaction between in utero hypoxia ischemia and intra amniotic inflammation disrupts brain development and motor function.</a> J Neuroinflam. 11, 131(2014).</li>
<li>Back, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+vulnerability+of+late+oligodendrocyte+progenitors+to+hypoxia+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Selective vulnerability of late oligodendrocyte progenitors to hypoxia ischemia.</a> J Neurosci. 22, 455-463 (2002).</li>
<li>Jantzie, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+Expression+of+N+Methyl+d+Aspartate+%28NMDA%29+Receptor+Subunits+in+Human+White+and+Gray+Matter+Potential+Mechanism+of+Increased+Vulnerability+in+the+Immature+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Developmental Expression of N Methyl d Aspartate (NMDA) Receptor Subunits in Human White and Gray Matter Potential Mechanism of Increased Vulnerability in the Immature Brain.</a> Cereb Cortex. 25, 482-495 (2015).</li>
<li>Jantzie, L. L., Robinson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Models+of+Encephalopathy+of+Prematurity%5BTitle%5D)+AND+%22Devel+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Preclinical Models of Encephalopathy of Prematurity.</a> Devel Neurosci. , (2015).</li>
<li>Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transformations+of+neurodevelopmental+sequences+across+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species.</a> J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).</li>
<li>Herlenius, E., Lagercrantz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+neurotransmitter+systems+during+critical+periods%5BTitle%5D)+AND+%22Exper+Neurol%22%5BJournal%5D)">Development of neurotransmitter systems during critical periods.</a> Exper Neurol. 190, S8-S21 (2004).</li>
<li>Kelsom, C., Lu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+specification+of+GABAergic+cortical+interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biosci%22%5BJournal%5D)">Development and specification of GABAergic cortical interneurons.</a> Cell Biosci. 3, 19(2013).</li>
<li>Kinney, H., Back, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+oligodendroglial+development+Relationship+to+periventricualr+leukomalacia%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Pediatr+Neuro%22%5BJournal%5D)">Human oligodendroglial development Relationship to periventricualr leukomalacia.</a> Semin Pediatr Neuro. 5, 180-189 (1998).</li>
<li>Robinson, S., Li, Q., DeChant, A., Cohen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+loss+of+gamma+amino+butyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Peds%22%5BJournal%5D)">Neonatal loss of gamma amino butyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg Peds. 104, 396-408 (2006).</li>
<li>Xu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+development+of+the+GABAergic+system+in+the+human+cerebral+cortex+and+white+matter%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Late development of the GABAergic system in the human cerebral cortex and white matter.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 70, 841-858 (2011).</li>
<li>Segovia, K. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arrested+oligodendrocyte+lineage+maturation+in+chronic+perinatal+white+matter+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Arrested oligodendrocyte lineage maturation in chronic perinatal white matter injury.</a> Ann Neurol. 63, 520-530 (2008).</li>
<li>Robinson, S., Li, Q., Dechant, A., Cohen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+loss+of+gamma+aminobutyric+acid+pathway+expression+after+human+perinatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Neonatal loss of gamma aminobutyric acid pathway expression after human perinatal brain injury.</a> J Neurosurg. 104, 396-408 (2006).</li>
<li>Boksa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prenatal+infection+on+brain+development+and+behavior+a+review+of+findings+from+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Effects of prenatal infection on brain development and behavior a review of findings from animal models.</a> Brain Behav Immun. 24, 881-897 (2010).</li>
<li>Burd, I., Brown, A., Gonzalez, J. M., Chai, J., Elovitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+term+chorioamnionitis+unraveling+causes+of+adverse+neurological+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Repro+Sci%22%5BJournal%5D)">A mouse model of term chorioamnionitis unraveling causes of adverse neurological outcomes.</a> Repro Sci. 18, 900-907 (2011).</li>
<li>Bergeron, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White+matter+injury+and+autistic+like+behavior+predominantly+affecting+male+rat+offspring+exposed+to+group+B+streptococcal+maternal+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Devel+Neurosci%22%5BJournal%5D)">White matter injury and autistic like behavior predominantly affecting male rat offspring exposed to group B streptococcal maternal inflammation.</a> Devel Neurosci. 35, 504-515 (2013).</li>
<li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Ureaplasma+parvum+lipoprotein+multiple+banded+antigen+on+pregnancy+outcome+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Immunol%22%5BJournal%5D)">Effects of Ureaplasma parvum lipoprotein multiple banded antigen on pregnancy outcome in mice.</a> J Reprod Immunol. 100, 118-127 Forthcoming.</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

אנצפלופתיה של פגות קשה לדגמן בבעלי חיים בגלל האינטראקציה המורכבת של אטיולוגיה, כמובן זמן התפתחות נוירולוגית, מורכבות של מערך רשת מוחי אנושי, חופפות מנגנונים של פגיעה, ופנוטיפים השונים של מערכת העצבים המרכזית מעליב באו לידי ביטוי בפגים אנושיים. EOP קשור נקודות תורפה ספציפיות תאים מסוג (כלומר oligodendrocytes לא מפותח) 21, כמו גם מסלולים התפתחותית-מוסדרים מגוונים (כלומר subplate, מובילי קרום ויחידות משנת קולט) 12,13,22. עם זאת, התקדמות משמעותי...

עם מעל 12% מתינוקות שנולדו בארצות הברית לפני גיל הריון מוערך 37 שבועות 1, פגיעה מוחית סביב הלידה (PBI) מפגות היא גורם משמעותי לנכות קבועה. PBI מפגות, אנצפלופתיה מכונה גם של פגות (EOP), משפיעה על כל מערכת העצבים המרכזית (CNS). פגיעה במערכת העצבים המרכזית לעתים קרובות מתחילה ברחם, ומחריפה על ידי תהליכים טרום-לידתי כולל chorioamnionitis וסיבוכים לאחר לידה כגון היפוקסיה ואלח דם. PBI מעלבונות מערכתיים משנה התפתחות נוירולוגית ומוביל לשיתוק מוחין, אפילפסיה, עיכוב קוגניטיבי והפרעות נוירו-פסיכיאטריות רבות המשפיעים על ויסות רגשית, זיכרון ותפקוד ביצועי 1,2. למרות התקדמות רבה נעשתה, הבנה מוגבלת שרידים איך ההשלכות התאיות ומולקולריות של פגיעה במערכת העצבים המרכזית מלידה מוקדמת לתרגם למספר רב של השלכות נוירולוגיות בילדים שנולדו פגים. זה חוסר ידע האחוריERS אבחון בזמן אמת של חומרת פציעה של מערכת העצבים המרכזית ומינון הודיע ​​התערבויות המתעוררות. בנוסף, אסטרטגיות טיפוליות מתאים לגיל לאוכלוסיית חולים זו פגיעה להישאר חמקמקות. דלקת תוך רחמי היא מאוד נפוצה בפגות קיצוניות וכרוך מפל דלקתי עוברי-אימהי-שליה מורכבת 3. הזיהום תוך רחמי הוא לעתים קרובות תת-קליני. ממצאי שליה ספציפיים בקנה אחד עם דלקת חריפה, או chorioamnionitis היסטולוגית, הם גורמים עיקריים לתגובה הדלקתית העוברית והם ביחד עם פגיעה מוחית הקשורים לידה מוקדמת 3-5. ואכן, יש התגובה הדלקתית העוברית השלכות קליניות מובהקות לתוצאות ארוכת טווח מלידה מוקדמת. תינוקות שהם קטנים לגיל הריון (SGA) או שחווים זיהום פגיעים במיוחד ל3,4 גירעונות נוירולוגיות. Chorioamnionitis היא לידה מוקדמת אבחנה פתולוגית טיפוסית הבאה <sup&gt; 6,7, ובדיקה היסטולוגית מגלה סימנים של דלקת ב- 70% של שליות מתינוקות שנולדו פגים מאוד 4. יתר על כן, chorioamnionitis קשור עם ליקוי קוגנטיבי בשנתי 8. ראיות של כלי דם האימהי underperfusion בשליה של תינוקות שנולדו פגים מאוד קשורות גם עם שיתוק מוחין בילדות 9. ההשפעה סינרגיסטית של פגמי זלוף chorioamnionitis והשליה מודגמת היטב על ידי גבוה להפליא הסיכון של תוצאות נוירולוגיות חריגות באוכלוסיית חולים זו בגיל שנתי 10,11. לחקות פגמים אנושיים מערכתיים זלוף השליה וchorioamnionitis קשורים לדלקת נגרם לפתוגן, פיתחנו מודל של היפוקסיה-איסכמיה לפני הלידה החולפת המערכתית (תשי&quot;ב) בשילוב עם lipopolysaccharide תוך מי שפיר (LPS) בחולדות. המטרה שלנו הייתה להתאים המודל של תשי&quot;ב לבד בחולדות 12-16 לכלול דלקת תוך רחמי,כדי להקל על מודלים פרה-קליניים של פגיעה במערכת העצבים המרכזית הקשורים ללידה מוקדמת. תשי&quot;ב לבד חשף אובדן מתמשך של תאי שושלת oligodendroglial, תאי עצב בקליפת המוח, גדל מוות של תאים, ורמות גבוהות ציטוקינים פרו-דלקתיות, עם מרווחי איסכמי מתקדמים המובילים לדפוס מדורג של פגיעה בקנה אחד עם פגיעה המוחית לפני הלידה 16. גם שינויים במרכיבי איסכמי של מודל זה הוכיחו גירעונות בקידוד זיכרון, קצר וזיכרון לטווח ארוך ושינויים קלים בשרירים ושלד חולדות כשהם מזדקנים 17-19. ואכן, יש לנו הפגנו בעבר כי השילוב של תשי&quot;ב + LPS משחזר סימני ההיכר של pathophysiological EOP, כוללים oligodendrocyte ואובדן עצבי, פגיעת axonal, דלקת סלולרית והפרעות תפקודיות 20.

<table><tbody><tr><td>תמיסת מלח, 0.9%</td> <td>Sigma</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>LPS 011B4</td><td>Sigma</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Evan's Blue Dye</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות</td><td>ביוג'ל</td><td>40870</td><td></td></tr><tr><td>או מגבות</td><td>Cardinal Health</td><td>287000-008</td><td></td></tr><tr><td>רפידות הכנה לאלכוהול סטריליות PDI</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>מיני ארקו קליפרס נטענים</td><td>קנט סיינטיפיק קורפ</td><td>CL8787</td><td></td></tr><tr><td>בטדין פילינג כירורגי</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>חומר סיכה לעיניים</td><td>לרענן Lacri Lube</td><td>00023-0312</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים קהים</td><td>Roboz</td><td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>מספריים</td><td>Roboz</td><td>RS-6808</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>מספריים כירורגיים</td><td>FST</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>מזרק</td><td>BD</td><td>309628</td><td>1 מ"ל</td></tr><tr><td>מחט</td><td>BD</td><td>305122</td><td>25 גרם 5/8</td></tr><tr><td>מחט</td><td>BD</td><td>305128</td><td>30 גרם 1</td></tr><tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה</td><td>פישרברנד</td><td>23-400-114</td><td>ספוג גזה כותנה סטרילי 6 אינץ'</td></tr><tr><td></td><td>פישרברנד</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחט</td><td>קנט Scientific Corp.</td><td>INS600109</td><td>12.5 ס"מ</td></tr><tr><td>כלי שיט STR קליפס</td><td>קנט סיינטיפיק קורפ</td><td>INS600120</td><td>30G Pressure 3-0</td></tr><tr><td>Perma תפרי משי ידניים</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td>קלוע שחור, 3-0 (2 מטרי), 18 אינץ', לא נספג,&nbsp; PS-1 מחט 24 מ"מ, 3/8 מעגל</td></tr><tr><td>מזרקי אינסולין</td><td>BD</td><td></td><td>328438 0.3 סמ"ק 3 מ"מ 31G</td></tr><tr><td>פנטוברביטל</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>בופיבקאין</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ליתיום קרבונט</td><td>אקרוס כימיקלים</td><td>554-13-2</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus שקופיות מיקרוסקופ</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>המטוקסילין</td><td>לייקה</td><td>3801521</td><td>Surgipath Gill II Hematoxylin</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica</td><td>3801601</td><td>Surgipath Eosin</td></tr><tr><td>Xylenes</td><td>Fisherbrand</td><td>X3S-4</td><td>כיתה היסטולוגית</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisherbrand</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Coverglass</td><td>Fisherbrand</td><td>12-548-5P</td><td>פישר בסט פרימיום כיסוי זכוכית</td></tr></tbody></table>

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide intra-השפיר בחולדות

Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

אנצפלופתיה של פגות (EOP) היא מונח המקיף את מערכת העצבים המרכזית (CNS) מומים הקשורים ללידה מוקדמת. למטרות translational מראש הטובות ביותר ולחשוף אסטרטגיות טיפוליות חדשות לפגיעה במוח הקשורים ללידה מוקדמת, מודלים פרה של EOP חייבים לכלול מנגנונים דומים פציעה העולמית לפני הלידה נצפה בבני אדם וכרוך במספר רכיבים של המערכת האימהית-שליה-העוברית. באופן אידיאלי, צריכים לייצר מודלים ספקטרום דומה של ליקויים תפקודיים בבעלי החיים הבוגרים ולשחזר היבטים רבים של הפתופיזיולוגיה. לחקות פגמים אנושיים מערכתי שליה זלוף, underperfusion שליה ו / או chorioamnionitis קשורים לדלקת נגרם לפתוגן בלידה מוקדמת מוקדם, פיתחנו מודל של היפוקסיה-איסכמיה לפני הלידה החולפת המערכתית (תשי&quot;ב) בשילוב עם lipopolysaccharide תוך מי שפיר (LPS). בחולדות ספראג Dawley הריון, תשי&quot;ב באמצעות o חסימת עורק הרחםn יום עוברי 18 (E18) גורם פגם underperfusion שליה מדורג קשור עם העלייה בניזק במערכת העצבים המרכזית בעובר. בשילוב עם זריקות LPS פנים-השפיר, דלקת שליה היא גדלה ונזק במערכת העצבים המרכזית הוא מורכב עם חריגות עניין, הליכה והדמיה לבנה קשורות. העלבונות טרום לידה הקורס הכנה ללידה תשי&quot;ב ותשי&quot;ב + LPS לפגוש כמה מהקריטריונים של מודל EOP כולל משחזר את העלבון תוך רחמי, גורמים לאובדן של תאי עצב, oligodendrocytes ואקסונים, אובדן subplate, וליקויים תפקודיים בבעלי חיים מבוגרים המחקים אלו שנצפו בילדים שנולדו מאוד פגים. יתר על כן, מודל זה מאפשר לנתיחה של דלקת נגרמת על ידי סוגים מסתעפים פציעה.

בעקבות תשי&quot;ב + LPS בE18, hematoxylin והכתים eosin חושפים ליקויים משמעותיים ההיסטופתולוגיים בשתי השליה (איור 1) ובמוח (איור 2). שליות נבדקו על E19 וE21 הן גס בצקים עם מיקרו-דימום, ונמק בכל decidua והמבוך. חודר לתוך דלקתי משמעותי וכלי דם מוגברים הוא ציינו גם. המוח נבדק על P2 לחשוף ventriculomegaly, כמו גם חומר לבן ואובדן תא עצב subplate לעומת שמס. בעבר, דיווחנו כי תשי&quot;ב + LPS גורם דלקת ומניב חומר לבן מתמשך ומומי axonal במקביל לירידת ערך מש...

אנצפלופתיה של פגות מקיפה את ההפרעות במערכת העצבים המרכזית הקשורות לפגיעה מלידה מוקדמת. דוח זה מתאר מודל חולדה רלוונטי מבחינה קלינית של איסכמיה מערכתית חולפת ברחם ומתן ליפופוליסכריד תוך מי שפיר (LPS) המחקה כוריואמניוניטיס, ואת ההשפעה הקשורה של גירויים זיהומיים ותת-עירוי שליה על התפתחות מערכת העצבים המרכזית.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

המטרה הכללית של הליך כירורגי זה היא לספק מודל הניתן לשחזור של פגיעה מוחית הקשורה ללידה מוקדמת קיצונית, באמצעות השראה של היפוקסיה סיסטמית חולפת, איסכמיה ודלקת בתוך מי השפיר (intra amniotic) ברחם, כדי לשחזר אי-ספיקה של השילייה וכוריואמניוניטיס בחולדות. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח לגבי הפתוגנזה של פגיעה מוחית פרינטלית הנובעת מתהליכים תוך-רחמיים, ובכך להקל על פיתוח אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא גורמת לפגיעה סיסטמית המדמה פגיעות תוך-רחמיות הנובעות הן מזיהום והן מהיפוקסיה ואיסכמיה, המייצרות גירעונות נוירולוגיים תפקודיים בחולדה הבוגרת.מודל זה מתאים במיוחד להבנת מנגנוני הפגיעה הקשורים לדלקת. מאחר שניתן לבחון גירויי היפוקסיה, איסכמיה וזיהומים באופן 개별י או כפגיעה משולבת, את הפרוצדורה תדגים לינדסיי צ'אן, טכנאית מהמעבדה שלנו. לפני תחילת הפרוצדורה, השתמשו במכונת גילוח לבעלי חיים קטנים כדי להסיר את כל הפרווה מאזור הבטן התחתונה ביום עוברי.18 חולדות הרריות בתבנית מלבנית, תוך הקפדה לא לפצוע את הפטמות או לגרום לגירוי גילוח. לאחר מכן, באמצעות מקלוני צמר גפן סטריליים, קרצפו את העור בשלוש מריחות לסירוגין של povidone iodine ו-70% ethanol. כאשר העור יבש, ודאו את עומק ההרדמה המתאים באמצעות צביטה בבוהן, וכסו את בעל החיים בבד סטרילי.לאחר מכן, השתמש בסקאלפל כדי לבצע חתך של שלושה סנטימטרים בקו האמצע של בטן בעל החיים, ולאחר מכן בצע דיסקציה קהה של שכבת העור מהפסציה הבטנית באמצעות מספריים. בעזרת פינצטה ומספריים כירורגיים, הרם את שכבת הפסציה הבטנית ובצע חתך דרך ה-avascular linear elbow.כאשר חלל הפריטונאום חשוף, הניחו גזה כירורגית בחלק החיצוני של החתך והרטיבו את הגזה בתמיסת סליין סטרילית. לאחר מכן, בעזרת פינצטה קהה ולחץ חיצוני על הבטן, הוציאו בעדינות את קרני הרחם מחלל הפריטונאום וסדרו את הקרניים על הגזה הלחוה. תוך הקפדה על מניעת הסבכה ומגע עם המעיים, השתמשו רק ברקמה השרירית שבין השקיים האמניוטיים הבודדים כדי לסדר את העוברים.לאחר מכן, באמצעות דיסקציה קהה, חשפו ובודדו את ארבעת העורקים הרחמיים. יש להקפיד לא לפגוע בכלי הדם האימהיים לאחר בידוד העורקים. הניחו תליב אנוריזמה לחולדות בכיול 30 gauge על כל כלי דם. לפני הנחת התליבים, חשוב לוודא שכל הרקמה שמסביב נקייה לחלוטין.בעת הנחת התפסנים, אחזו בהם בעזרת פינצטה קהה ולאחר מכן הניחו אותם במקביל. מעקב אחר הפסקת הדופק הוא קריטי כדי להבטיח היפוקסיה-איסכמיה מלאה לאחר שכל התפסנים הונחו. ודאו את הפסקת הדופקים הפרוקסימליים והדיסטליים ואת ההכהיה של כלי הדם הרחמיים, כולל בשליות הבודדות.לאחר מכן, כסו את כל שטח הניתוח בגזה והשקו את הרקמה בתמיסת סליין סטרילית. בכל 10 דקות למשך שעה לאחר 60 דקות, הסירו את הגזה והשקו את השטח שוב. כאשר קרני הרחם וכלי הדם רטובים מספיק, השתמשו בפינצטה כדי להסיר בעדינות כל תפסנית של מפרצת (aneurysm clip), תוך הקפדה לא לגרום לטראומה לכלי הדם ולשמור על שלמות הרקמה.לאחר מכן, בצעו שטיפה יסודית של הקרניים והשדה. פעם אחת אחרונה, תוך הקפדה על הסרת שאריות חוטים של גזה משקי השרי (amniotic sacs). כדי לטפל בעוברים ב-LPS, השתמשו בפינצטה קהה כדי לייצב ולסובב כל שק שרי, כך שבסיסו של כל שק שרי בודד יהיה גלוי.לאחר מכן, מלאו מזרק אינסולין דק במיוחד של 0.3 מיליליטר עם מחט 31 gauge באורך שמונה מילימטרים המחוברת אליו בתמיסת LPS, והזריקו 100 microliters מהתמיסה בדיוק קדמה לכל פלטה של השילייה. בעת הוצאת המחט, הפעילו לחץ ישיר על שק השליה כדי למנוע דליפת נוזלים. החדרת מחט 31 gauge דקה במיוחד לבסיס שק השליה היא קריטית למסירת LPS תקינה, מבלי לאפשר לנוזל שיליה לדלוף.לאחר שטיפה של קרני הרחם שלוש פעמים בתמיסת סלין סטרילית, השתמשו בפינצטה כדי להחזיר את הקרניים לחלל הפריטונאום. לאחר מכן, השתמשו בתפר משי 3-0 רץ כדי לקרב מחדש את קצוות השכבה השרירית-פסציאלית ללא תפירה לתוך השק או דרכו, ואחר כך סגרו את העור באמצעות תפר משי 3.0 רץ נוסף. לאחר מכן, השתמשו במחט בקוטר 26 gauge להזרקה תת-עורית.הזרק מיליליטר אחד של 0.125% bupivacaine מסביב לשולי הפצע. יבש את החולדה במגבת במידת הצורך, והזרק 0.1 מיליגרם לקילוגרם של buprenorphine בעורף. הנח את החיה בכלוב בית נקי תחת ניטור עד להחלמה מלאה.בעקבות היפוקסיה-איסכמיה סיסטמית חולפת ומתן LPS ביום עוברי 18, כפי שהודגם זה עתה, צביעת hematoxylin and eosin חושפת פתולוגיות היסטופתולוגיות משמעותיות הן בשליה והן במוח. ואכן, שלייה שנבדקה בימים עובריים 19 ו-21 נראית במבטה הכללי כעובה עם מיקרו-דימומים ונמק לאורך הדצידואה והלבירינת. כמו כן, נצפו חדירה דלקתית משמעותית ועלייה בוסקולריזציה.בדיקות נוספות של מוחות ביום השני לאחר הלידה חשפו הגדלה של הפקעות (ventricular megaly), וכן אובדן של החומר הלבן ושל נוירוני התת-לוח (subplate) בהשוואה לקבוצות הביקורת (shams). היפוקסיה סיסטמית חולפת, איסכמיה ו-LPS הפחיתו באופן משמעותי את הביטוי של חלבון ה-potassium chloride cotransporter two, טרנספורטר כלור מרכזי להתפתחות העכבה הגאבארגית (GABAergic inhibition) בקורטקס ביום ה-15 לאחר הלידה, ממצא העולה בקנה אחד עם הפגיעה בעלייה הביטויית (upregulation) התפתחותית שנצפתה במהלך התקופה הפוסט-נטלית הקריטית של הבשלת המעגלים. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה מעמיקה של אופן ביצוע ניתוח זה בחולדות הרמיות, וכיצד להשרות היפוקסיה-איסכמיה חולפת טרום-לידה באמצעות חסימה של העורק הרחמי, יחד עם דלקת תוך-רחמית באמצעות הזרקה של תמיסת ליפופוליסכריד לחלל מי השפיר. לאחר רכישת המיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו בתוך 90 דקות, אם היא מבוצעת כראוי.

modeling-encephalopathy-prematurity-using-prenatal-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

המודל עכברוש הלידה לפגיעה hypoxic-איסכמי המוח הוא מודל ומבוססת של אנצפלופתיה הילוד האנושי איסכמי היפוקסי (HIE). במאמר זה, אנו מתארים את המודל של HIE ב שלאחר הלידה גורי חולדה.

מודל hypoxic אנצפלופתיה איסכמי של איסכמיה הלידה

הקמנו מודלים של העכבר לויקומלציה periventricular (PVL), את הפגיעה במוח השולט על פגים מאופיין periventricular נגעים בחומר הלבן. היפוקסיה / איסכמיה עם / בלי זיהום מערכתי הם הגורמים העיקריים של PVL. קשירת הראש חד צדדית וחשיפה היפוקסיה עם / בלי זריקה lipopolysaccharide יוצר PVL כמו נגעים בעכברים P6.

עכבר מודלים של לויקומלציה periventricular

סרטון זה מדגים את התהליך של גרימת הפרעה במחסום הדם-מוח (BBB) ודימומים מוחיים במודל חולדה באמצעות ליפופוליסכריד (LPS). הוא מדגיש את רצף התגובות החיסוניות שמובילות לחדירות מוגברת של BBB ולאחר מכן לנזק לרקמת המוח.

השראת מיקרו-דימומים מוחיים במודל חולדה באמצעות ליפופוליסכריד

מקור: Jantzie, L. L., et. al. מידול אנצפלופתיה של פגות באמצעות היפוקסיה-איסכמיה טרום לידתית עם ליפופוליסכריד תוך מי שפיר בחולדות. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים פרוטוקול לגרימת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים בחולדות עובריות על ידי הגבלת זרימת הדם ברחם והזרקת LPS, מודלים של דלקת עצבית ושיבוש התפתחות המוח הרלוונטיים למחקרי לידה מוקדמת.

השראת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים למודל אנצפלופתיה בחולדות טרום לידתיות

ניתן לחקור אנצפלופתיה היפוקסית-איסכמית בעקבות חנק סביב הלידה באמצעות מודלים של בעלי חיים. אנו מדגימים את ההליכים הדרושים לביסוס מודל חזרזיר של אנצפלופתיה היפוקסית-איסכמית בילודים.

דגם חזרזיר של ילודים חוסר חמצן-איסכמי אנצפלופתיה

זילוח תוך רחמי קלה הופק על ידי היצרות עורק עם מפוליויניל מתכת העוטפת את העורקים הרחם ואת השחלות אצל חולדות עובריים ביום 17. הליך זה מיוצר זילוח טרום לידתי, פיגור גדילה תוך רחמי.

מודל עכברוש של זילוח תוך רחמי קלה עם היצרות Microcoil

השיטה מתארת דלקת-רגישות ארוי-איסכמי ופגיעה המוח hyperoxic ב P17 חמוס למודל האינטראקציה המורכבת בין דלקת ממושכת ופגיעה המוח חמצוני מנוסה במספר תינוקות טרום לטווח מאוחר.

מודל של החמוס של דלקת-מארוי מאוחר לטווח קדם-הסכמי פגיעה במוח

אנו מציגים מודל של דימום תוך חדרי ילודים באמצעות גורי חולדות המחקה את הפתולוגיה הנראית בבני אדם.

דוגמנות דימום תוך חדרי ילודים באמצעות הזרקה תוך-חדרית של המוגלובין

ניתן לעצב הידרוצפלוס פוסט-דימומי של פגות (PHHP) בחולדות יילודים על ידי שילוב של כוריואמניוניטיס ודימום תוך חדרי. השילוב של אירועים אלה לפני הלידה ואחרי הלידה מסכם במדויק את סימני ההיכר הקליניים של PHHP, כולל מקרוצפליה, ונטריקולומגליה, ולחץ תוך גולגולתי מוגבר, לאורך החיים.

מידול הידרוצפלוס פוסט-דימומי של פגות בחולדות

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

למדו ליצור מודל של פגיעה מוחית בחולדות עוברים באמצעות היפוקסיה-איסכמיה שיטתית ודלקת תוך-שפירית. מודל זה חושף מנגנוני פגיעה פרינטלית הקשורים לזיהום ואי-ספיקת שלייה.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

גלה סרטונים נוספים