Aislamiento de ADN

El ADN debe aislarse de las células y cortarse en posiciones precisas para muchas aplicaciones, como la tecnología de ADN recombinante.

Aunque se utilizan diferentes tipos de métodos de extracción de ADN para diferentes tipos de células, hay tres pasos estándar: lisis celular, eliminación de proteínas y recuperación de ADN.

Dentro de las células eucariotas, el ADN está empaquetado dentro del núcleo. Por lo tanto, tanto la membrana celular como la membrana nuclear deben romperse para aislar el ADN.

Este paso puede realizarse mecánicamente mediante la descomposición de las células mediante molienda o sonicación, o químicamente mediante el uso de detergentes y enzimas para disolver partes de la membrana celular.

Una vez que se libera el contenido de la célula, los desechos se separan de los componentes solubles por centrifugación. El sobrenadante recuperado contiene ácidos nucleicos y proteínas solubles en agua.

Para eliminar las proteínas, se añaden enzimas, como la proteinasa K, la peptidasa o la lisozima, al sobrenadante para romper los enlaces peptídicos.

El ADN se recupera del sobrenadante a través de la precipitación mediante la adición de alcohol y una sal, como el acetato de sodio.

El precipitado aislado se disuelve en agua o en un tampón.