4.17
En el método de Maxam-Gilbert, o escisión química, el ADN molde se desnaturaliza primero y se radiomarca en el extremo 5' con un fósforo 32.
La reacción de secuenciación se lleva a cabo en cuatro tubos de reacción diferentes con cuatro productos químicos diferentes con la capacidad de modificar diferentes nucleótidos en el ADN.
Por ejemplo, el ácido fórmico solo atacará las purinas, la adenina o la guanina, mientras que la hidracina solo atacará a las pirimidinas: citosina o timina. Del mismo modo, los productos químicos como el sulfato de dimetilo solo atacarán a un solo nucleótido.
A continuación, se utiliza piperidina para escindir el ADN en las bases modificadas, generando fragmentos de ADN radiomarcados de diferentes longitudes.
A continuación, las cuatro reacciones se ejecutan en paralelo en un gel y se visualizan mediante autorradiografía. A continuación, se puede descifrar la secuencia del ADN molde leyendo la autorradiografía de abajo hacia arriba
El mismo año que se descubrió el método de secuenciación de Sanger, otro grupo de científicos, Allan Maxam y Walter Gilbert, demostraron su método de…
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