Test de preferencia claro-oscuro: un método para estudiar el comportamiento relacionado con la ansiedad en el pez cebra

Resumen

Fuente: Holcombe, A., et al. Un Método Novedoso de Administración de Medicamentos a Múltiples Pez Cebra (Danio rerio) y la Cuantificación de la Retirada. J. Vis. Exp.(2014)

El video describe el ensayo de preferencia claro-oscuro para estudiar el comportamiento relacionado con la ansiedad en el pez cebra después de la exposición al etanol.

Protocolo

1. Pruebas de comportamiento

1. Obtenga una arena clara/oscura de 9,5 cm de ancho por 55 cm de largo y 9,5 cm de profundidad con un piso impermeable blanco (Figura 1B). Pega papel impermeable no reflectante blanco y negro en las paredes interiores de la arena con velcro, con la mitad de la arena cubierta de blanco y la otra mitad cubierta de negro. Llene la arena hasta una profundidad de 5 cm con agua de hábitat a una temperatura de 25-28 °C. Mantenga esta temperatura durante toda la prueba.
2. Minimice los estímulos visuales externos mediante la construcción de un recinto blanco de tres lados para que se sitúe la arena. Asegúrese de que el área de prueba tenga una iluminación superior difusa que no cause reflejos en la superficie del agua, pero que sea lo suficientemente brillante para el software de seguimiento de movimiento o la cuantificación manual post-hoc a partir de imágenes de video.
3. Coloque la arena en el recinto y configure los parámetros de registro y análisis de movimiento del software de seguimiento del comportamiento. Establezca la duración de la prueba en 5-15 min, dependiendo de la pregunta de investigación.
   NOTA: Aquí, usamos 5 min.
4. Transporta el grupo de peces que se van a analizar al área de investigación en el tanque de hábitat y colócalos fuera del recinto de la arena. Aclimata el pescado durante 10 min.
5. Atrape suavemente un pez del grupo apropiado y colóquelo en el centro de la arena clara / oscura, asegurándose de soltar el pez cuando se coloque paralelo al eje largo de la arena para evitar sesgar al pez hacia la zona clara u oscura.
6. Comience a registrar el comportamiento inmediatamente después de que se libere al animal. Esté atento a cualquier problema de software con el seguimiento de los peces o si los peces saltan o se congelan. Gire la arena 180° después de que la mitad de los sujetos hayan sido examinados para evitar confusiones debidas a los sesgos resultantes de qué extremo de la arena está orientado hacia el extremo abierto del recinto.
7. Una vez finalizada la prueba, retírelos suavemente con una red y retírelos de la arena a un tanque de retención o tanque de hábitat.

2. Análisis

1. Examina el tiempo que pasas en zonas claras frente a oscuras. Para cada grupo y cada pez, obtenga el tiempo relativo que se pasa en las zonas claras y oscuras y analice utilizando una prueba t de una muestra (o una prueba de rango con signo de Wilcoxon para datos no paramétricos; diferencia de (la mitad del tiempo total del ensayo) 150 segundos) para determinar si los grupos prefieren significativamente un área sobre la otra.
2. Para comparar las preferencias, calcule un índice de preferencia restando el tiempo que se pasa en la zona clara del tiempo que se pasa en la zona oscura y compare las diferencias entre los grupos. Las pruebas t se pueden utilizar para comparar dos grupos. Compare múltiples grupos con un análisis de varianza unidireccional utilizando la prueba HSD post hoc de Tukey cuando sea necesario (o la prueba de Kruskal-Wallis con la prueba post hoc de comparación múltiple de Dunn para datos no paramétricos).
3. Compare la velocidad, el número de transiciones de zona, los meandros y la inmovilidad entre grupos. Utilice el análisis de varianza unidireccional utilizando la prueba HSD post hoc de Tukey cuando sea necesario (o la prueba de Kruskal-Wallis con la prueba post hoc de comparación múltiple de Dunn para datos no paramétricos).

Resultados

Figura 1: Procedimiento de transferencia y la arena Luz/Oscuridad. Estas fotos ilustran el procedimiento de transferencia. (A) Primero, los peces se sitúan en el tanque de transferencia (izquierda). El tanque de dosificación que contiene etanol se muestra (derecha). (B-C) Mover los peces desde el tanque de transferencia a la solución de etanol requiere que el investigador levante el inse...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Arena Luz/Oscuridad	costumbre		Construya según la descripción del procedimiento: 9,5 cm de ancho, 9,5 cm de profundidad, 55 cm de largo.
Sistema de carcasa de sobremesa de tres estantes	Hábitats acuáticos	N/A
Tanque de desove de 1,5 L con deflector de 400 μm	Hábitats acuáticos	N/A
Software de seguimiento de movimiento Ethovision XT	Tecnología de la información de Noldus
Etanol de grano puro	Luxco, INC	N/A