Ensayo de respuesta optocinética: un método para medir la agudeza visual en el pez cebra

Resumen

Fuente: Cameron, D. J., et al. La respuesta optocinética como medida cuantitativa de la agudeza visual en el pez cebra. J. Vis. Exp.(2013)

Este video describe el ensayo de respuesta optocinética en pez cebra. El video mide los movimientos oculares reflejos en función del estímulo visual en movimiento y determina la agudeza visual en el pez cebra.

Protocolo

1.Respuesta optocinética (OKR)

1. Construya el dispositivo de grabación OKR personalizado utilizando un tambor giratorio de 14,5 cm de diámetro, un microscopio estereoscópico con ajustes de intensidad de luz ajustables (300-8.000 lux) y un ordenador (Figura 1A).
   1. Conecte una cámara al microscopio que proporcionará una transmisión en vivo a un monitor adyacente y permitirá la captura y grabación de imágenes.
   2. Controle el tambor giratorio mediante un microcontrolador conectado a una computadora que se adaptará a varias selecciones de velocidad y dirección.
2. Anestesiar al pez en tricaína al 0,016% durante 2-3 minutos y luego colocar el pez en una pequeña plataforma con los ojos y las branquias suspendidos sobre el borde.
3. Coloque una esponja / toalla delgada sobre el cuerpo del pez y coloque 2-3 piezas de espuma, con la forma adecuada para acomodar el pez, sobre el pez para mantenerlo inmovilizado. Se encontró que limitar el movimiento de la cola del pez era un aspecto crucial para la inmovilización sin causar lesiones al pez, y se logró mejor usando una pieza plana de espuma. (Figura 1B)
4. Coloque el pez dentro de un tanque cilíndrico lleno de agua, que encaja dentro del tambor giratorio del dispositivo de registro OKR. Utilice imanes en la plataforma para colocar el pez en posición vertical, con los ojos a unos 7,3 cm del borde del tambor. El pez debe revivir de la anestesia en unos pocos minutos: se reanudará la respiración normal y se deben observar movimientos oculares aleatorios.
5. Coloque una rejilla base de 0.07 ciclos por grado (cpd) en el tambor giratorio y active los controles de la computadora para comenzar la rotación y la captura de video (se usó una velocidad de 12 rpm para este documento, pero las velocidades de 8-16 rpm deberían dar resultados similares).
6. Una vez que la rejilla base obtenga un OKR inicial, detenga brevemente la rotación y reemplace la rejilla con una rejilla más pequeña (frecuencia espacial más alta).
7. Repita este proceso hasta que ya no se pueda obtener un OKR. Vuelva a probar con la rejilla más pequeña que provocó un OKR después de un enfoque de escalera modificado y, a continuación, repita con la rejilla que no pudo obtener una respuesta para verificar la pérdida del OKR. Este proceso puede repetirse para verificar una respuesta verdadera a la rejilla más pequeña detectable si la rejilla final cambió en relación con el primer evento de extinción.
8. Obtenga mediciones de la agudeza monocular colocando un oclusor de plástico negro sobre las rayas adyacentes al ojo opuesto. Repita el procedimiento anterior (pasos 1.6-1.7).
9. Obtenga la agudeza del ojo opuesto reposicionando el oclusor y repitiendo los pasos 1.6-1.7 nuevamente.
10. Tenga en cuenta la distancia a la que se encuentra cada ojo de las rayas durante el procedimiento de prueba utilizando la tira de medición de referencia debajo de la pecera para que se puedan calcular mediciones precisas de la agudeza en los siguientes pasos.

2. Cálculo de la agudeza visual

1. Obtenga la agudeza visual calculando el cpd: donde a es la distancia desde el centro de la lente hasta la rejilla, y h es la longitud de un ciclo de la rejilla más pequeña en la que se observó OKR (Figura 1C).
2. Para las mediciones combinadas de la agudeza visual, se utiliza el valor a promedio del ojo izquierdo y derecho.

Resultados

Figura 1. A) El dispositivo OKR consta de un tambor giratorio de 14,5 cm de diámetro y un microscopio con ajustes de intensidad de luz ajustables (300-8.000 lux). Una cámara proporciona una transmisión en vivo en un monitor adyacente. El tambor giratorio tiene varios ajustes de velocidad en el sentido de las agujas del reloj y en el sentido contrario a las agujas del reloj, y las rejillas de frecuencia e...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Cámara de seguridad de video blanco y negro con luz súper baja	Súper Circuitos	PC164CEX-2	Se puede utilizar cualquier cámara con poca luz
Microcontrolador Arduino Duemilanove	Industrias Adafruit		El Arduino Uno también es compatible con el software de control de velocidad.
Metanosulfonato de tricaína	VWR	101107-950