Ensayo de evitación y tigmotaxis del pez cebra: un método de alto rendimiento para examinar el comportamiento de las larvas en respuesta a estímulos visuales aversivos

Abstract

Fuente: Richendrfer, H., et al. Análisis de comportamiento automatizados de alto rendimiento en larvas de pez cebra. J. Vis. Exp.(2013)

El video describe el ensayo de evitación y tigmotaxis de las larvas de pez cebra. El video examina el comportamiento de las larvas de pez cebra en respuesta a estímulos aversivos visuales.

Protocol

1. Captura de imágenes

1. Se pueden colocar hasta 20 larvas en cada carril de las placas. Por lo general, se utilizan 5 larvas por carril para facilitar el seguimiento más preciso de la velocidad de nado y para reducir el número de larvas que se necesitan por experimento. Los carriles se pueden llenar con agua de huevo con o sin productos farmacéuticos o tóxicos, dependiendo del experimento. Sin embargo, los carriles no deben llenarse por completo hasta que se coloquen en los gabinetes de imágenes; Esto evitará el desbordamiento. Para mantener la consistencia, las larvas deben tener un período de aclimatación de diez minutos después de colocarlas en los moldes de agarosa y colocarlas en la parte superior de la pantalla de la computadora portátil. Mover eficientemente las larvas de la placa de Petri al carril de agarosa ayudará a reducir el estrés de las larvas. Esto es más fácil cuando las larvas están alojadas en tanques poco profundos o placas de Petri.
2. Los gabinetes de imágenes incluyen una cámara digital Canon utilizada para la fotografía de lapso de tiempo y una computadora portátil. La cámara debe colocarse en la parte superior del gabinete y apuntar hacia la parte inferior del gabinete, donde se debe colocar una computadora portátil con pantalla de 15.6 pulgadas con la pantalla hacia arriba (Figura 1). Cuatro placas deben colocarse a mano directamente en la parte superior de la pantalla de la computadora portátil. En este momento, los carriles se pueden rellenar con agua de huevo o tratamiento químico para que quede al nivel de la parte superior del carril (para eliminar las sombras en los bordes de los carriles en las imágenes).
3. Una presentación de PowerPoint se utiliza como estímulo aversivo para las larvas. En el pasado, se mostraban bolas rojas en movimiento a las larvas de pez cebra en 6 o 12 placas de pocillos múltiples. El PowerPoint actual comienza con un fondo blanco en blanco durante 15 minutos, seguido de 15 minutos de una barra roja móvil en la mitad superior de la placa (Figura 2). Para eliminar el sobrecalentamiento de las larvas, lo mejor es comprar una computadora portátil con una temperatura de pantalla que no supere los 28 °C. Para evitar la evaporación del líquido dentro de los carriles de agarosa, el tiempo máximo de imagen debe mantenerse por debajo de una hora.
4. La cámara digital debe estar programada para la fotografía de lapso de tiempo, tomando fotografías cada 6 segundos para un total de 300 imágenes por experimento. Sin embargo, la frecuencia y la duración se pueden ajustar en función del experimento y de la cuantificación del comportamiento. En el pasado, los tiempos de imagen extendidos se empleaban utilizando intervalos más largos entre cada imagen. La cámara se puede configurar a una resolución más baja para obtener imágenes a velocidad de video (30 cuadros por segundo). Mientras que la resolución más baja limita las grabaciones a una sola placa multipocillo, las grabaciones de video son apropiadas para obtener imágenes de eventos de natación rápida.

Results

Figura 1. Cabinas de imagen: Las cabinas de imagen se construyeron especialmente en nuestro laboratorio y se utilizaron para análisis de comportamiento de alto rendimiento. Se colocó una cámara digital de 15 megapíxeles en la parte superior del gabinete mirando hacia abajo para recopilar imágenes de lapso de tiempo de las larvas en placas de varios carriles colocadas en la parte superior de la pantalla de una computadora...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cabinas de imagen	Torres WoodCraft
agarosa	pescador	BP1356-100
cámara digital	Canon EOS	Rebelde T1i
Ordenadores portátiles	Acer Aspire		Cualquiera es bueno siempre y cuando tenga un diámetro de 15.6 pulgadas. Pantalla LCD con resolución de 1366 x 768 píxeles y un brillo de 220 cd/m2.
Placas de un pocillo	pescador	Teléfono 12-565-493
PowerPoint 2010	Microsoft
Difusor de plástico	Pendaflex	52345