Cribado de toxicidad química basada en embriones: evaluación de los efectos en el desarrollo de embriones de pez cebra

Resumen

Fuente: Hao J. et al., Pantalla de molécula pequeña in vivo a gran escala basada en pez cebra. J. Vis. Exp. (2010)

En este artículo, los embriones de pez cebra se utilizan para el cribado de toxicidad química. La toxicidad química se correlaciona con las lecturas del fenotipo. El protocolo de muestreo muestra un enfoque metodológico para realizar el cribado de toxicidad química.

Protocolo

>1. Transferencia de la biblioteca de moléculas pequeñas

Si bien la transferencia de compuestos se puede automatizar con métodos de transferencia robóticos, describiremos el método de transferencia manual.

1. Las bibliotecas de moléculas pequeñas se suministran normalmente en un formato de 96 pocillos, y cada compuesto se almacena en DMSO como un stock de 10 mM. Aproximadamente 60 minutos antes de que los embriones alcancen la etapa en la que se van a agregar los compuestos, descongele un número deseado de placas de 96 pocillos que contengan alícuotas de moléculas pequeñas (placa fuente). Tome nota del número de ser....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Biblioteca de moléculas pequeñas de compuestos estructuralmente diversos dispuestos en un formato de 96 wll a 10 mM de stock en DMSO. Cada placa maestra se alícuota en placas de almacenamiento de polipropileno de 96 pocillos (Corning) y se almacena a -80 °C hasta uso.
Drierita	W.A. HAMMOND DRIERITE CO, Xenia, OH
Pipetas de 12 canales, 2-20 μL	Eppendorf
Cinta de sellado de aluminio para placas de 96 pocillos	Nunc, Rochester, NY
Dmso	Sigma, San Luis, MO
Incubadora básica, 28,5 °C	Fisher Científico
Placas de ensayo de poliestireno de 96 pocillos de fondo redondo	Corning COSTAR; Lowell, MA
Microscopio estereoscópico con base de luz transmitida	Leica Microsystems, Bannockburn, Illinois
Medio embrionario E3: 5 mM de NaCl, 0,17 mM de KCl, 0,33 mM de CaCl2, 0,33 mM de MgSO4, que contiene 0,003% de PTU (feniltiocarbamida, Sigma; St. Louis, MO).			La PTU se puede preparar como una solución 10x disolviendo 0,3 g de PTU en 1 L de medio embrionario E3. Las soluciones que contienen PTU deben protegerse de la luz cubriéndolas con papel de aluminio.

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