Axotomía láser de dos fotones: un método para dañar los axones en embriones de pez cebra y observar la recuperación axonal

Resumen

Fuente: O'Brien G. S., et al. Axotomía de dos fotones e imágenes confocales de lapso de tiempo en embriones vivos de pez cebra. J. Vis. Exp. (2009).

Este video describe el método para dañar los axones en embriones de pez cebra utilizando axotomía con láser de dos fotones y observando la recuperación axonal de la lesión.

Protocolo

1: Axotomía de dos fotones utilizando un microscopio de dos fotones hecho a medida con un láser Chameleon Ti-Sapphire

1. Prepárese para la toma de imágenes. Coloque los embriones montados en un portaobjetos debajo del microscopio. Concéntrese en un embrión con un objetivo de agua de 40X (0,8 NA). Encienda el láser. Hemos sido capaces de visualizar y dañar de forma reproducible las neuronas que expresan GFP utilizando los siguientes parámetros. Para visualizar los axones a una potencia no dañina, ajuste el láser a una longitud de onda de 910 nanómetros (nm) y una potencia de 30 milivatios (los mW enumerados son la cantidad de potencia en la muestra). Abra el s....