Disección del cristalino del ojo: una técnica para observar la morfología del cristalino del pez cebra

En este artículo

Resumen

Fuente: Vorontsova I. et al, Evaluación de la localización del núcleo del cristalino de pez cebra y la integridad sutural. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe el protocolo que se desarrolla para diseccionar lentes de pez cebra adultos y larvales para analizar la morfología cortical del cristalino y la integridad estructural de las suturas del cristalino.

Protocolo

1. Disección de lentes de pez cebra larvales y adultos

Anestesiar a los peces desde las larvas de 6 dpf hasta la edad adulta con tricaína hasta que no respondan al tacto pero aún muestren un latido cardíaco fuerte. Mida la longitud estándar de los peces según Schilling (2002) para la estadificación.
Extirpe inmediatamente los ojos con unas tijeras de microdisección y colóquelos en una placa de disección en PBS (se muestra la Figura 1 para ojos de adultos).
1. Haz un plato personalizado de 35 mm relleno de silicona para disecciones de lentes. Una vez que la silicona se haya endurecido, extirpe una hendidura de unos 2-3 mm de diámetro y 0,5 mm de profundidad para inmovilizar los ojos/lentes de los adultos durante la disección.
Disección de lentes de pez cebra adulto
1. Coloque un ojo de adulto en la hendidura del plato con la parte posterior hacia arriba llena de PBS. Inmovilice el ojo insertando pinzas en un ángulo de <45° a través del disco óptico. Tenga cuidado de no mellar ni comprimir la lente. Realizar dos o tres incisiones radiales a través de la retina y la esclerótica desde el disco óptico hasta la zona ciliar con tijeras de disección.
2. Retire la retina y la esclerótica como pétalos de flores e invierta el ojo, con la córnea hacia arriba. Inmovilice el cristalino indirectamente mediante la manipulación de la esclerótica y la córnea con el lado plano de las tijeras, mientras retira la retina y los tejidos adheridos con pinzas. Recorte con cuidado el exceso de tejido de la lente.
  nota: Es vital diseccionar cuidadosamente para obtener lentes consistentemente saludables.
Disección de lentes de pez cebra larvas
1. Coloque el lado posterior de un ojo larvario hacia arriba en la parte plana del plato de silicona lleno de PBS y use una aguja de tungsteno afilada para hacer cortes radiales a través de la retina y la esclerótica mientras inmoviliza el ojo con otra aguja o pinzas de tungsteno.
  nota: Tenga cuidado de no dañar la lente.
  1. Afile electrolíticamente la punta de un alambre de tungsteno de 0,1 mm de longitud suspendiendo la punta del alambre en NaOH al 10% (p/v) y aplicando una corriente alterna de bajo voltaje14. Fije la aguja en una pipeta Pasteur derritiendo el extremo del vidrio con un mechero Bunsen.
    nota: También se pueden utilizar herramientas alternativas de disección fina.
    cautela: El NaOH es corrosivo.
2. Saque suavemente el cristalino del ojo disociado con un lado romo de la aguja y retire con cuidado el tejido adherido.

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Resultados

Imágenes de microscopio de disección de ojo de pez; vistas anterior/posterior, extracción de lentes, barras de escala de 2 mm.
Figura 1: Disección del cristalino del pez cebra. (A) Se diseccionan los ojos de los peces anestesiados y se colocan con la parte posterior hacia arriba (B). (C) Los ojos se inmovilizan con fórceps a través del disco óptico (od) y se realizan dos o tre...