Electrofisiología del pez cebra adulto: un método para medir la actividad eléctrica extracelular de las neuronas in vivo

Resumen

Fuente: Johnston, L., et al. Registro electrofisiológico en el cerebro de un pez cebra adulto intacto. J. Vis. Exp. (2013)

El protocolo describe el procedimiento para realizar electrofisiología en pez cebra adulto. Este método se puede utilizar para medir la actividad neuronal in vivo.

Protocolo

1. Electrofisiología

1. Apague la llave de paso de intubación y desconecte rápidamente la cerradura Luer que conecta la base de intubación al goteo de tricaína.
   1. Mueva la configuración de intubación intacta al microscopio de electrofisiología y conéctelo al sistema de perfusión.
   2. Abra el agua del hábitat y perfuntra a una velocidad de 1 ml / min durante ~ 1 hora, para lavar la tricaína.
2. Usando un micromanipulador bajo control visual, coloque el electrodo secundario de manera que la punta del electrodo pueda insertarse en la fosa nasal del animal o en la inmersión detrás de la mandíbula superior.
3. Inserte la aguja del electrodo primario en la abertura de la craneotomía. Inserte la aguja en el tejido, de modo que la punta se coloque bastante superficial dentro del tectum óptico.
   1. Si el electrodo es demasiado profundo, la señal eléctrica puede ser pequeña.
4. Recopile y analice la diferencia eléctrica registrada entre los electrodos de referencia primarios y secundarios. Este proceso permitirá obtener registros extracelulares.
   1. Recopile los datos en modo sin interrupciones a una frecuencia de muestreo de 5 kHz, con un filtro de paso bajo de 0,1 kHz y un filtro de paso alto de 1 Hz.
   2. No comience a registrar la actividad electrofisiológica hasta que el agua del hábitat se haya perfundido durante un mínimo de 45 minutos.
   3. Registre una línea de base de actividad nativa durante al menos 15 minutos antes de la adición de medicamentos experimentales. Comience la perfusión con los fármacos experimentales de elección y registre durante el tiempo deseado. En preparaciones saludables, es posible registrar la actividad neurológica durante 2-3 horas.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Hábitat agua			pH 7,0-7,4, conductividad de 400-450 μS; mantenido por Instant Ocean y Bicarbonato de sodio
Tricaína tamponada con Tris al 0,4%	Sigma-Aldrich	E10521	pH 7,2-7,4; almacenado a -20 oC
Tubos de jeringa Luer Lock de 60 ml	Becton, Dickinson y compañía	309653
Llaves de paso de 3 vías con conexiones Luer
0.010 en alambre de plata	A-M Systems, Inc.
Portaelectrodos de la serie Q
Placa de Petri Fisherbrand de 100 mm x 15 mm	Fisher Científico	NC9299146
34 G Aguja biselada	Instrumentos de Precisión Mundial, Inc.	NF34BV
37 cm x 42 cm Kimwip	Kimberly-Clark Profesional	TW31KEM
Tubo de 1/8 de pulgada de diámetro
Tubo de 1 mm de diámetro
Microscopio (Leica MZ APO)	Se puede utilizar otro microscopio