1. Infección experimental por M. marinum con inyección intraperitoneal
<ol>
	<li>Pipetee una gota de 5 μL de la solución bacteriana diluida en un trozo de película de parafilm y extraiga la gota en una aguja de insulina de 30 G.</li>
	<li>Utilice peces de tipo salvaje de 5 a 8 meses de edad y peces mutantes rag1−/−hu1999 para el experimento. Anestesiar el pez cebra adulto en el agua del tanque con éster etílico de ácido 3-aminobenzoico al 0,02% (pH 7,0). Coloque el pez con el lado ventral hacia arriba en una ranura sobre un plástico espumado húmedo. 
	NOTA: Los peces mutantes no son capaces de someterse a una recombinación somática y producir células T y B funcionales.</li>
	<li>Inyecte la aguja entre las aletas pélvicas en un ángulo de aproximadamente 45°. Mantenga la aguja abierta hacia arriba para observar que toda la abertura está dentro de la cavidad abdominal. Inyecte lentamente la suspensión bacteriana y retire con cuidado la aguja. 
	nota: En caso de que el trazador rojo se escape del pez tras la inyección, excluya al pez del experimento.</li>
	<li>Inmediatamente después de la inyección, transfiera el pez a un tanque de recuperación con agua dulce del tanque.</li>
	<li>Tomar muestras de la suspensión bacteriana en placas 7H10 cada 15 min de la alícuota bacteriana en uso e incubar las bacterias a 29 °C durante 5 días y verificar la dosis de infección contando las colonias en las placas.</li>
	<li>Comprobar el bienestar de los peces con regularidad y sacrificar a cualquier pez con síntomas de infección con una concentración superior al 0,02% de éster etílico del ácido 3-aminobenzoico (pH 7,0). 
	nota: Aproximadamente, el 7% de los peces cebra adultos infectados con 34 ± 15 UFC y el 30% de los peces cebra infectados con 2029 ± 709 UFC habrán tenido síntomas a las 8 semanas. Los síntomas pueden incluir natación anormal, falta de respuesta al tacto, jadeo, edema o emaciación observable.</li>
	<li>Mantenga el pez cebra de acuerdo con los estándares comunes.</li>
</ol>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mycobacterium marinum </td>
			<td>Colección de Cultura Tipo-Americana </td>
			<td>ATCC 927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rojo de fenol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3532</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tabletas de solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417-50TAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar Middlebrock 7H10</td>
			<td>BD, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11799042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Éster etílico de ácido 3-aminobenzoico (pH 7,0)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aguja de insulina Omnican 100 30 G</td>
			<td>Braun</td>
			<td>9151133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jeringa de 1 ml</td>
			<td>Henke Sass Lobo</td>
			<td>4010.200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inyección intraperitoneal: un método de administración de solución en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto

Fuente: Luukinen, H., et al. <a href="https://www.jove.com/v/58299/" target="_blank">Modelando la tuberculosis en el pez cebra adulto infectado por Mycobacterium marinum</a>. J. Vis. Exp. (2018).
Este video describe una técnica de inyección intraperitoneal, un método para administrar soluciones en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto.

Inyección intraperitoneal: un método de administración de solución en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto

Fuente: Luukinen, H., et al. Modelado de la tuberculosis en el pez cebra adulto infectado con Mycobacterium marinum.  J. Vis. Exp. (2018).
Este video describe un ...

- Ayuna a un pez adulto durante 24 horas antes de la inyección para vaciar el tracto gastrointestinal y crear espacio adicional en el abdomen. El día del procedimiento, anestesia al pez con tricaína y colóquelo en una ranura en una esponja húmeda con el lado ventral hacia arriba.
A continuación, pipetee la cantidad deseada de solución inyectable en un trozo de película de laboratorio y jáquelo en una aguja de insulina. Coloque la aguja entre las aletas pélvicas en un ángulo de 45 grados con respecto al eje antero-posterior del cuerpo y empújela suavemente en la línea media. Avance la aguja aproximadamente de 1 a 2 milímetros en la cavidad abdominal, el espacio entre la pared abdominal y los órganos internos, e inyecte lentamente la solución de interés. Espere cinco segundos antes de sacar la aguja para evitar derrames. Ahora, retira la aguja con cuidado.
Después de la inyección, transfiera rápidamente el pez a un tanque de recuperación que contenga agua dulce del tanque. Si el pez no comienza a nadar de inmediato, agita el agua cerca de las branquias para ayudarlo a recuperarse de la anestesia. En el protocolo de ejemplo, inyectaremos una solución de mycobacterium marinum en peces mutantes RAG1 para estudiar la infección.
- Primero, coloque una gota de 5 microlitros de la solución bacteriana diluida sobre un trozo de película de parafina. Luego, coloque la gota en una aguja de insulina de calibre 30. Use un pez de cinco a ocho meses de edad para este experimento, siendo uno un pez de tipo salvaje y el otro un pez mutante RAG.
Coloque estos peces con el lado ventral hacia arriba en las ranuras de un trozo de plástico espumado húmedo. Inyecte la aguja de insulina entre las aletas pélvicas en un ángulo de 45 grados. Mantenga la aguja abierta hacia arriba para asegurarse de que toda la abertura esté dentro de la cavidad abdominal. Luego, inyecte lentamente la solución bacteriana. Después de esto, retire con cuidado la aguja e inmediatamente transfiera el pez a un tanque de recuperación lleno de agua dulce del tanque.
Tome muestras de la alícuota bacteriana en uso cada 15 minutos en placas 7H10. Incubar estas muestras a 29 grados centígrados durante cinco días para verificar la dosis de infección. Verifique el bienestar de los peces con regularidad, asegurándose de sacrificar a cualquier pez con síntomas de infección incubándolos en agua con más del 0,02% de éster etílico del ácido 3-aminobenzoico.

intraperitoneal-injection-method-solution-delivery-into-abdominal

Research

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Danio rerio (zebrafish)

Adult

Intraperitoneal Injection: A Method of Solution Delivery into the Abdominal Cavity of an Adult Zebrafish

8.3K vistas. - Ayuna a un pez adulto durante 24 horas antes de la inyección para vaciar el tracto gastrointestinal y crear espacio adicional en el abdomen. El día del procedimiento, anestesia al pez con tricaína y colóquelo en una ranura en una esponja húmeda con el lado ventral hacia arriba. A continuación, pipetee la cantidad deseada de solución inyectable en un trozo de película de laboratorio y jáquelo en una aguja de insulina. Coloque la aguja entre las aletas pélvicas en un ángulo ...

Inyección intraperitoneal: un método de administración de solución en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto

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Name	Company	Catalog Number
Mycobacterium marinum	Colección de Cultura Tipo-Americana	ATCC 927
Rojo de fenol	Sigma-Aldrich	P3532
Tabletas de solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Agar Middlebrock 7H10	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
Éster etílico de ácido 3-aminobenzoico (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	A5040
Aguja de insulina Omnican 100 30 G	Braun	9151133
Jeringa de 1 ml	Henke Sass Lobo	4010.200V0