Inyección intraperitoneal: un método de administración de solución en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto

Resumen

Fuente: Luukinen, H., et al. Modelando la tuberculosis en el pez cebra adulto infectado por Mycobacterium marinum. J. Vis. Exp. (2018).

Este video describe una técnica de inyección intraperitoneal, un método para administrar soluciones en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto.

Protocolo

1. Infección experimental por M. marinum con inyección intraperitoneal

1. Pipetee una gota de 5 μL de la solución bacteriana diluida en un trozo de película de parafilm y extraiga la gota en una aguja de insulina de 30 G.
2. Utilice peces de tipo salvaje de 5 a 8 meses de edad y peces mutantes rag1−/−hu1999 para el experimento. Anestesiar el pez cebra adulto en el agua del tanque con éster etílico de ácido 3-aminobenzoico al 0,02% (pH 7,0). Coloque el pez con el lado ventral hacia arriba en una ranura sobre un plástico espumado húmedo.
   NOTA: Los peces mutantes no son capaces de someterse a una recombinación somática y producir células T y B funcionales.
3. Inyecte la aguja entre las aletas pélvicas en un ángulo de aproximadamente 45°. Mantenga la aguja abierta hacia arriba para observar que toda la abertura está dentro de la cavidad abdominal. Inyecte lentamente la suspensión bacteriana y retire con cuidado la aguja.
   nota: En caso de que el trazador rojo se escape del pez tras la inyección, excluya al pez del experimento.
4. Inmediatamente después de la inyección, transfiera el pez a un tanque de recuperación con agua dulce del tanque.
5. Tomar muestras de la suspensión bacteriana en placas 7H10 cada 15 min de la alícuota bacteriana en uso e incubar las bacterias a 29 °C durante 5 días y verificar la dosis de infección contando las colonias en las placas.
6. Comprobar el bienestar de los peces con regularidad y sacrificar a cualquier pez con síntomas de infección con una concentración superior al 0,02% de éster etílico del ácido 3-aminobenzoico (pH 7,0).
   nota: Aproximadamente, el 7% de los peces cebra adultos infectados con 34 ± 15 UFC y el 30% de los peces cebra infectados con 2029 ± 709 UFC habrán tenido síntomas a las 8 semanas. Los síntomas pueden incluir natación anormal, falta de respuesta al tacto, jadeo, edema o emaciación observable.
7. Mantenga el pez cebra de acuerdo con los estándares comunes.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Mycobacterium marinum	Colección de Cultura Tipo-Americana	ATCC 927
Rojo de fenol	Sigma-Aldrich	P3532
Tabletas de solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich	P4417-50TAB
Agar Middlebrock 7H10	BD, Thermo Fisher Scientific	11799042
Éster etílico de ácido 3-aminobenzoico (pH 7,0)	Sigma-Aldrich	A5040
Aguja de insulina Omnican 100 30 G	Braun	9151133
Jeringa de 1 ml	Henke Sass Lobo	4010.200V0