Xenoinjerto derivado de paciente de pez cebra (zPDX): un modelo de cáncer

Resumen

Fuente: Wang L. et. al., Modelo de xenoinjerto heterogéneo derivado del paciente de cáncer de páncreas utilizando larvas de pez cebra como huéspedes para la evaluación comparativa de fármacos. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe la técnica para crear un modelo de xenoinjerto derivado de un paciente de pez cebra. En el protocolo de muestra, evaluamos la eficacia de los fármacos Gemcitabina y Navitoclax en el modelo de xenoinjerto de tumor pancreático.

Protocolo

1. Inyectando Suspensión de Células Mixtas en el Pez Cebra

1. Añadir 10 veces la solución de tricaína en el agua E3 para anestesiar las larvas de pez cebra y transferir las larvas (del paso 2.3) a la placa de inyección llena de E3 modificado (E3 con 1 g/L de glucosa y 5 mmol/L de L-glutamina).
2. Llene 25 μL de suspensión de células mixtas en la aguja de microcapilares e inserte la aguja en el manipulador de microinyección.
3. Ajuste la presión y el tiempo de inyección. Inyecte 50-80 células (~8 nL) en el saco vitelino de 48 hpf de pez cebra.

>2. Cultivo del pez cebra xenoinjertado (modelo zPDX)

1. Transfiera las larvas de pez cebra post-xenoinjertadas a 40 mL de solución de mezcla (solución E3 con 1 g/L de glucosa y 5 mmol/L de L-glutamina) a 32 °C.

>3. Administración de fármacos en el pez cebra xenoinjertado y la evaluación de la viabilidad de las células tumorales/fibroblastos

1. Determinación de la concentración óptima de gemcitabina/navitoclax.
   1. Coloque 10 embriones de pez cebra de tipo salvaje a 48 hpf en cada pocillo de una placa de 12 pocillos.
   2. Añadir diferentes concentraciones de gemcitabina o navitoclax en cada pocillo e incubar a 32 °C durante dos días.
   3. Después de 2 días, calcule la dosis de tolerancia máxima (MTD) de gemcitabina y navitoclax en la que las larvas de pez cebra no muestren una malformación significativa y un comportamiento anormal, y las concentraciones de trabajo se establezcan por debajo de la MTD.
2. Tratamiento de modelos zPDX con gemcitabina/navitoclax.
   1. Coloque 10 larvas xenoinjertadas en cada pocillo de una placa de 12 pocillos.
   2. Divida las larvas en cuatro grupos, trate el grupo de control en E3 que contenga 0,1% de DMSO, y trate los otros grupos con 5 μg/mL de gemcitabina y/o 50 μM de navitoclax, e incube a 32 °C durante dos días.
3. Evaluación de la viabilidad celular y composición celular en modelos zPDX.
   1. Anestesiar las larvas xenoinjertadas después del tratamiento y colocarlas en metilcelulosa al 3%.
   2. Triture las larvas desde la vista lateral utilizando un microscopio de fluorescencia o un microscopio confocal.
   3. Cuantifique la intensidad de las señales de fluorescencia roja y verde utilizando el software ImageJ y GraphPad.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
L-glutamina	GIBCO	21051024
Gemcitabina	Gemzan
Metilcelulosa	sigma	M0262
Navitoclax(ABT-263)	Selleck	S1001	Inhibidor de Bcl-xL
equipo
Microinyector	NARISHIGE
Microscopio confocal	LEICA	SP8	0.00