Modelo de miocardiopatía del pez cebra: cardiotoxicidad inducida por fármacos

Resumen

Fuente: Ma X., et. al. Un modelo de miocardiopatía inducida por doxorrubicina en pez cebra adulto. J. Vis. Exp. (2018).

Este video describe la técnica de crear un modelo de miocardiopatía de pez cebra con variaciones mínimas entre los grupos experimentales y en la muestra, creamos un modelo de miocardiopatía de pez cebra utilizando el fármaco doxorrubicina.

Protocolo

1. Inyección de DOX en peces adultos

1. Coloque una placa de Petri limpia de 100 mm con una esponja en su interior, bajo un microscopio de disección, luego ajuste el enfoque. Corta la esponja para hacer una cavidad de unos 4 cm de longitud para sujetar un pez. Haz una cavidad más larga para un pez más grande.
2. Prepare una aguja de 34 G con una microjeringa de 10 μL. Enjuague la aguja con 1x tampón HBSS para eliminar las burbujas y los bloqueos de la jeringa y el tubo.
3. Anestesiar a los peces adultos en agua embrionaria que contenga 0,16 mg/mL de tricaína durante 2 min.
   NOTA: La anestesia prolongada durante 5 minutos seguida de una inyección de DOX puede causar fácilmente la muerte de los peces.
4. Remoje la esponja en agua de embrión con tricaína y transfiera el pescado a la esponja para inyectarlo.
5. Realice la inyección de IP DOX mediante cualquiera de los dos métodos que se describen a continuación.
   1. Inyección de IP clásica
      1. Coloca el pez con el abdomen hacia arriba en la cavidad de la esponja. Inserte rápidamente la aguja, con un ángulo de 45° con respecto al cuerpo del pez en la línea media entre las aletas pélvicas, y penetre aproximadamente 1-2 mm. Libere toda la solución DOX lentamente. Espere 5 segundos antes de sacar la aguja. Verifique la entrega de DOX por un color rojo visible en el vientre del pez.
   2. Inyección de IP alternativa
      1. Coloque el pez lateralmente sobre la esponja con la parte anterior a la derecha. Estabilice suavemente el pez con una pinza de extremo romo con la mano izquierda y sostenga la microjeringa con la mano derecha.
      2. Coloque la aguja por debajo de la línea lateral por encima de la aleta pélvica, con el bisel hacia arriba. Apuntando a la posición de las 7 en punto en un ángulo de 45°, inserte la aguja 3-4 mm en la cavidad del pez ubicada entre las aletas pélvicas y anales, y luego presione lentamente el émbolo. Verifique la entrega de DOX por un color rojo visible en el vientre del pez.
6. Transfiera rápidamente los peces inyectados a un tanque de cruce limpio lleno de agua dulce del sistema para permitir que los peces se recuperen. Enjuague la aguja una vez con 1x tampón HBSS entre inyecciones.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tanque de cruce	Acuareo	ZHCT100	Cría de peces
Clorhidrato de doxorrubicina	sigma	D1515-10MG
Solución salina equilibrada de Hank (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehículo para DOX
Placa de Petri de 100 mm	halcón	431741
Microjeringa NanoFil de 10 μL	WPI (en inglés	NANOFIL	Para inyección
Aguja de calibre 34	WPI (en inglés	NF34BV-2	Para inyección
Tricaína	plata		Anestesia de peces

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