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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Análisis de la huella
- Configuración de la pista (Figura 1A)
- Corta un trozo de papel blanco (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm) longitudinalmente en tres trozos de igual anchura. Coloca un trozo de papel blanco (9,9 cm x 42 cm) sobre la mesa.
- Coloca el cuadro de portería oscuro en el extremo distal del papel. Coloque otras cajas (aproximadamente de la misma longitud que la del papel) con las paredes a ambos lados de la pista, evitando la fuga de ratones.
- Coloque la tinta negra y la tinta roja en placas de Petri separadas (35 mm de diámetro).
2. Sesión de entrenamiento
NOTA: Realice la sesión de entrenamiento solo a las 4 semanas de edad.
- Coloque un ratón en el extremo proximal del papel (mire la cabeza hacia el cuadro de la portería). Deja que el ratón camine desde el extremo proximal hasta el área de la portería. Retira el ratón de la caja de la portería. Si el ratón se detiene en el papel, empuje suavemente el ratón hacia el cuadro de la portería con el dedo.
- Sostenga el ratón agarrando el pescuezo entre el pulgar y el índice para limitar el movimiento de las extremidades delanteras. Luego, agarre la espalda y la cola entre la bola del pulgar y los otros dedos para limitar el movimiento de las extremidades posteriores><.
nota: Si no se sujeta el ratón de forma suficiente, se producen manchas de tinta en la ropa.
- Sumerge la parte inferior de las extremidades delanteras en tinta roja y la parte inferior de las extremidades posteriores en tinta negra. Coloque inmediatamente el mouse en el extremo proximal del papel (mire la cabeza hacia el cuadro de meta). Deja que el ratón camine desde el extremo proximal hasta el área de la portería. Si el ratón se detiene en el papel, empuje suavemente el ratón hacia el cuadro de la portería con el dedo.
- Retira el ratón de la caja de la portería. Vaya a la sesión de prueba.
3. Sesión de prueba
- Después de la sesión de entrenamiento, prepare la pista para las huellas con un nuevo trozo de papel blanco cortado.
- Sostenga el ratón agarrando el pescuezo entre el pulgar y el índice para limitar el movimiento de las extremidades delanteras. Luego, agarre la espalda y la cola entre la bola del pulgar y los otros dedos para limitar el movimiento de las extremidades traseras.
- Sumerge la parte inferior de las extremidades delanteras en tinta roja y la parte inferior de las extremidades posteriores en tinta negra. Coloque inmediatamente el ratón en el extremo proximal del papel. Deje que el ratón camine desde el extremo proximal hasta el área de meta.
NOTA: Debido a que los ratones prefieren la oscuridad, caminar se vuelve más estable a medida que el mouse se acerca a la caja de meta oscura. Si el ratón se detiene en el papel, empuje suavemente el ratón hacia el cuadro de la portería con el dedo. A continuación, si no se obtienen huellas fiables para el análisis porque el ratón se detuvo, vuelva a intentar la sesión de prueba.
- Regresa el ratón a la jaula de inicio desde el área de portería. Limpie la caja de la portería con etanol al 70% después de cada sesión de prueba. Seca al aire el papel con la huella del pie.
>4. Análisis de huellas
- Obtenga tres medidas de cada parámetro (longitudes de zancada de las extremidades anteriores y traseras, anchos de base delanteras y traseras, superposición entre las extremidades anteriores y traseras, Figura 1B) con una regla de papel impreso a pie de página.
nota: Debido a que las huellas de los extremos proximal y distal con frecuencia muestran grandes variaciones debido a que se detienen o corren, elija la parte con un patrón de marcha constante de las pisadas. La parte central del papel con la huella al pie suele ser adecuada para el análisis.
- Para la longitud de la zancada, mida las distancias entre las mismas partes de la pata (por ejemplo, la almohadilla de la pata o la punta del pie).
- Para el ancho de la base delantera, dibuje una línea entre las huellas delanteras consecutivas derecha (o izquierda). Luego, mida la longitud de la línea vertical desde la almohadilla de la huella frontal izquierda (o derecha) hasta la línea dibujada entre las huellas derecha (o izquierda).
- Para el ancho de la base trasera, dibuje una línea entre las huellas traseras consecutivas derechas (o izquierdas). Luego, mide la longitud de la línea vertical desde la almohadilla de la huella trasera izquierda (o derecha) hasta la línea dibujada entre las huellas derecha (o izquierda).
- Para la superposición, mida la distancia entre las almohadillas de las huellas delanteras y traseras izquierda (o derecha).
- Promedie las tres medidas para cada individuo. Utilice el promedio individual de cada parámetro para el análisis estadístico.
- Para la longitud de la zancada, utilice el promedio de las medias individuales de las zancadas izquierda y derecha.
- Para la asimetría de la longitud de zancada, utilice el valor absoluto de la diferencia entre los promedios individuales de la longitud de zancada de la extremidad izquierda y la de la extremidad derecha.
- Para el análisis estadístico de los otros parámetros (ancho de la base delantera, ancho de la base posterior y superposición), utilice directamente el promedio individual.
