El laberinto acuático con reubicación de plataformas: un método para evaluar la memoria de trabajo

Resumen

Fuente: Hausser, N., et al. Detección de déficits de comportamiento en ratas después de una lesión cerebral traumática.J. Vis. Exp (2018).

En este video, describimos la prueba del laberinto acuático de Morris con reubicación de plataforma, una tarea de navegación utilizada para estudiar la memoria de trabajo en roedores.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Laberinto acuático de memoria de trabajo

1. equipo
   1. Utilice un tanque lleno de agua hasta una altura de 28 cm y manténgalo a 26 ± 1 °C.
   2. Utilice una plataforma de vidrio acrílico transparente de 10 cm de diámetro en un soporte de 26 cm de altura.
      nota: La superficie superior de la plataforma debe estar recubierta de silicona en forma de círculo con una X que la atraviese. Esto permite que las ratas suban a la plataforma y les da tracción para que no se resbalen.
   3. Reúna un cronómetro, una lámpara de calor, toallas desechables, almohadillas absorbentes, jaulas adicionales y una red de peces de acuario pequeña y de mango largo. Use un sistema de seguimiento de video computarizado que esté conectado a una cámara de video para grabar a la rata nadando y enviar los datos a la computadora. Guarde el video y los datos en la computadora para su posterior análisis.
2. Prueba de laberinto acuático de memoria de trabajo
   1. Dé a las ratas cuatro pares de pruebas cada día durante cinco días consecutivos, coloque la plataforma en cada uno de los cuatro cuadrantes y comience a arrancar las ratas desde cada uno de los cuatro puntos de partida (N, S, E, W) como se describe a continuación.
   2. En primer lugar, defina los pares de ubicación-plataforma de inicio que se utilizarán a lo largo del experimento.
      NOTA: El orden de los cuadrantes donde se encuentra la plataforma y el punto de partida utilizado debe estar en un orden diferente para cada uno de los cinco días de natación, pero el mismo para cada rata.
      1. Utilice cuatro puntos de partida (N, S, E o W) y cuatro ubicaciones de plataforma (cuadrantes 1, 2, 3 o 4; Figura 1). Por ejemplo, (N, 2; E, 4; S, 1; W, 3; véase la figura 1). Planifique un orden equilibrado (no aleatorio) para evitar puntos de inicio demasiado cerca de las plataformas (Ningún punto de partida es el mismo cuadrante que la ubicación de la plataforma). Configure una hoja de datos utilizando los cuadrantes de la plataforma y cuatro puntos de partida.
      2. Escriba un protocolo para el software de seguimiento de video que se utilizará para filmar a las ratas nadando y recopilar datos específicos (por ejemplo, duración del nado, velocidad, distancia recorrida antes de encontrar la plataforma)
         nota: El software de seguimiento detendrá automáticamente la grabación después de la duración especificada. El protocolo debe permitir especificar dónde se coloca la plataforma, cuántos ensayos se van a realizar por animal y cuántos animales se van a probar por sesión, así como la duración máxima permitida (por ejemplo, 120 s).
      3. Pruebe de 4 a 6 ratas por sesión.
         nota: Más de 6 ratas crean un problema en el tiempo entre ratas y pueden provocar errores por parte del manipulador. Las cajas de calentamiento también se llenan.
   3. Prueba 1
      1. Abra el software de seguimiento de video y cargue el protocolo correcto, incluido el mapa del laberinto de agua.
      2. Coloque la plataforma en la ubicación asignada (p. ej., 2; Figura 1) y compruebe que coincide con el mapa del software. Prepare el software de seguimiento para que se inicie cuando la rata entre en el campo de visión de la cámara de vídeo.
      3. Coloque la rata en el tanque frente a la pared en la ubicación asignada (p. ej., N; Figura 1) e inmediatamente inicie el temporizador.
      4. Permita que la rata 120 s encuentre la plataforma. Cuando la rata encuentre la plataforma, detenga el temporizador y registre el tiempo en la hoja de trabajo. Si la rata no logra encontrar la plataforma, llévela a la plataforma con la mano y grabe 120 s. Deje que la rata permanezca en la plataforma.
   4. Prueba 2
      1. Compruebe que el software esté listo para la versión de prueba 2. Vuelva a colocar la rata en el tanque en la misma posición inicial (N). Repita el paso 1.2.3.4.
   5. Después de la prueba 2, coloque a la rata en el recinto calentado durante 4 min. Mueva la plataforma a la segunda ubicación (4; Figura 1), y compruebe que coincide con el mapa del software.
   6. Repita los procedimientos de la prueba 1 y 2 (pasos 1.2.3 a 1.2.4) hasta que se completen los cuatro emparejamientos de ubicación/plataforma iniciales.

Resultados

Figura 1. Diagrama del laberinto de agua.Este diagrama muestra las posibles ubicaciones de las plataformas (1, 2, 3, 4) y los puntos de inicio (N, S, E, W) para el laberinto acuático de Morris con memoria de trabajo. A las ratas se les permiten dos ensayos desde cada emparejamiento de ubicación/plataforma de inicio. Hay un intervalo de 15 s entre ensayos y 4 minutos de descanso en una...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Ratas Sprague-Dawley	Laboratorios Charles Rivers	CD-IGS ratas código de cepa 001	Macho albino 300-350g a la llegada
Piscina de fibra de vidrio	Fabricante desconocido		72" de diámetro x 30" de profundidad (~ 500 gal)
Plataforma de plexiglás	Hecho a mano por Maggie Parsley		10 cm de diámetro y 26" de alto con silicona aplicada a la superficie de la plataforma para proporcionar una superficie de agarre
Cajas de plexiglás para animales con tapa	Taller mecánico UTMB		2 cajas de 10" de ancho x 16" de largo x 9" de alto
Luces puntuales/lámparas de calor	Home Depot (en inglés)		3 alrededor de la piscina 2 sobre cajas para secar animales
AnyMaze	Instrumentos de San Diego	9001	http://www.sandiegoinstruments.com/any-maze-video-tracking/