Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Cirugía de Implantación de Poste de Cabeza
NOTA: Asegure el uso de instrumentos estériles y organice la cirugía y la recuperación en diferentes zonas. Una vez dominado, el procedimiento de implantación dura unos 30 minutos.
- En el caso de la analgesia, 30 minutos antes del inicio de la cirugía, inyectar buprenorfina (0,05 mg/kg) por vía subcutánea y volver a colocar al animal en su jaula de origen
nota: Los efectos analgésicos de la buprenorfina duran aproximadamente 12 h, mucho después del final del procedimiento. En nuestra experiencia, los ratones no muestran ningún signo de sufrimiento relacionado con esta intervención, pero se recomienda una dosis posterior de 0,05 mg/kg de buprenorfina 24 horas después de la cirugía.
- Anestesiar al animal en una cámara con gas isoflurano al 2,5%-3%. Espere 3 min y compruebe si el ratón está correctamente anestesiado observando la respiración y la falta de movimiento dentro de la cámara. Pase el ratón a un cono de nariz sobre una mesa quirúrgica con una almohadilla térmica y, mediante un pellizco interdigital, verifique que no haya reflejo de retirada y baje el isoflurano al 1,5%.
- Afeita la cabeza del ratón con una maquinilla de afeitar eléctrica. Para obtener un ambiente estéril, frote el área afeitada con una solución de yodo y luego con alcohol al 70%. Repita este procedimiento dos veces más.
- Inyecte clorhidrato de lidocaína (2%, 2 mg/kg) debajo de la piel de la cabeza para anestesia local y espere 5 minutos para que comiencen los efectos. Para evitar daños oculares debido a la sequedad, cubra los ojos del ratón con ungüento oftálmico tópico veterinario
.
- Con un par de pinzas romas, agarre la piel por la parte posterior de la cabeza y, con unas tijeras romas (o bisturí), haga una incisión longitudinal de aproximadamente 1,5 cm para exponer el cráneo.
- Con la ayuda de un bisturí, rasque el periostio. Tenga cuidado de no rascarse demasiado, ya que la fijación del poste de la cabeza puede verse comprometida si el cráneo comienza a sangrar ligeramente.
- Aplique una gota del activador verde (ver Tabla de Materiales) en el centro del cráneo. Esto mejorará la fijación del cemento al aumentar la permeabilidad ósea.
- Preparar el cemento: mezclar una cucharada (ver Tabla de Materiales) de polímero con cinco gotas de monómero y una gota de catalizador. Con la ayuda de un pincel, aplique una cantidad generosa de la mezcla de cemento entre los puntos de referencia de la calavera lambda y bregma.
- Coloque rápidamente el poste de la cabeza en el cemento con un movimiento de deslizamiento que va de lambda a bregma. Después de colocar el poste de la cabeza, vuelva a aplicar más cemento alrededor de la parte inferior para asegurarse de que el poste de la cabeza se adhiera correctamente al cráneo. Para garantizar una correcta fijación, asegúrese de que el cemento se aplique abundantemente y que se seque antes de continuar con el siguiente paso.
nota: Con este procedimiento de fijación, el poste de la cabeza no se desprenderá y permitirá pruebas repetidas a largo plazo; En nuestras manos, la eliminación de los postes de cabeza es del <10%.
- Prepara la mezcla de resina aplicando una proporción de polvo a líquido que permita una consistencia suave de la mezcla. Aplique la resina donde se aplicó el cemento, así como alrededor del poste de la cabeza para proteger su superficie.
- Espera 3 min a que la resina se seque y cierra la piel en la parte posterior de las orejas con sutura de monofilamento. Con un hisopo de algodón, aplique una solución de yodo diluida (10%-20%) en el área operada.
nota: Asegúrate de que la piel no se pegue a la resina.
- Apague la anestesia y coloque al animal bajo una luz roja cálida para evitar la hipotermia. Coloque comida humedecida e hidrogel u otra fuente de agua a base de gel en el piso de la jaula. No deje al ratón desatendido hasta que recupere la conciencia. Tan pronto como el animal se recupere por completo del procedimiento (por lo general, de 30 minutos a 1 hora después), colóquelo en una jaula con grupos de tres o cuatro para estimular las interacciones sociales.