Disección de tejido palatino de un modelo murino adulto: un procedimiento quirúrgico para recolectar paladar duro y paladar blando de la cavidad oral de un ratón adulto

En este artículo

Resumen

Fuente: Xuan Ngo, Y. et al. Aislamiento y cultivo de queratinocitos orales primarios del paladar de ratón adulto. J. Vis. Exp.(2021)

Este video muestra un procedimiento quirúrgico para diseccionar el tejido del paladar a partir de un modelo murino.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Disección de tejido del paladar de un ratón adulto

Sacrificar un ratón C57BL/6J adulto (macho o hembra) por dislocación cervical de acuerdo con las normas de la instalación relacionadas con el bienestar animal.
1. Retira el vello alrededor de la boca con una afeitadora. Con unas tijeras, corte desde la mejilla hacia la mandíbula, en ambos lados.
  nota: El ratón necesita ser anestesiado antes del sacrificio. Se utiliza una mezcla anestésica de medetomidina, midazolam y butorfanol (ver Tabla de materiales).
Use fórceps para abrir la boca de par en par y absorber la sangre con un hisopo de algodón. Para desinfectar el paladar, limpie el interior de la boca con un bastoncillo de algodón que contenga un 10% de povidona yodada.
Para extraer el paladar del ratón, primero use una hoja de bisturí quirúrgico para hacer una incisión marginal de espesor completo a lo largo del lado del paladar de los dientes maxilares. Luego, diseccione cuidadosamente todo el paladar con un raspatorium.
nota: Un raspatorium es una herramienta que se utiliza para elevar un colgajo mucoperióstico (ver Tabla de Materiales) (Figura 1B).
Transfiera rápidamente el tejido del paladar a un tubo de 15 mL que contenga 4 mL de medio completo + solución antibiótica-antimicótica. Mantenga los tejidos en hielo hasta que estén listos para la incubación.
nota: Para la recolección de varios ratones, los tejidos del paladar se pueden mantener en hielo durante un máximo de 4 h.

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Resultados

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Figura 1: Descripción general del procedimiento de disección y aislamiento de queratinocitos orales de ratón. (A) Representación esquemática de la cavidad oral de ratón. (B) Instrumentos utilizados para diseccionar el paladar y aislar queratinocitos orales de ratón. (C) Imagen de campo claro del paladar del ratón. Barra de escala: 100...