Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Anestesia y canulación traqueal
- Pesar al ratón para determinar la dosis de fármacos anestésicos, la medicación analgésica postoperatoria y el volumen corriente del ventilador. Precaliente la almohadilla térmica a 37 °C. La configuración quirúrgica se muestra en la Figura 1.
- Inyectar al ratón por vía intraperitoneal una mezcla de ketamina y xilacina a una dosis de 80 mg/kg y 10 mg/kg, respectivamente.
- Afeita rápidamente el pelo del ratón en la garganta y el lado izquierdo de la caja torácica con una maquinilla de afeitar eléctrica.
- Verifique la profundidad de la anestesia pellizcando la cola y/o las patas traseras y coloque al animal en posición supina sobre la almohadilla térmica. Coloque una pequeña compresa de gasa debajo de la cabeza del animal para evitar el sobrecalentamiento de los ojos. Aplicar gel ocular para evitar la sequedad ocular.
- Asegure las cuatro extremidades con cinta adhesiva en la superficie de la almohadilla térmica. Pase un bucle de sutura de seda 5-0 por debajo de los incisivos superiores y pegue el extremo del bucle con cinta adhesiva en la almohadilla térmica. Esto mantendrá la boca del animal abierta y facilitará la canulación.
- Aplicar la crema depilatoria en las zonas preafeitadas y masajear suavemente con un bastoncillo de algodón durante 1 min. Limpiar el exceso de pelo y crema con una gasa. Use gotas de solución salina al 0.9% y gasa para limpiar las áreas de la incisión. Aplique trozos de gasa estéril en la garganta y el tórax afeitados y sumérjalos en yodopovidona.
nota: Recomendamos la aplicación de un fármaco anestésico local (lidocaína o bupivacaína) en los sitios de las incisiones.
- Ajuste el ventilador a un volumen corriente de 7 mL/kg y una tasa de ventilación de 140 carreras/min.
nota: A partir de ahora, trabaje bajo un microscopio estereoscópico de microcirugía.
- Sujetar la piel en el centro de la garganta y realizar una incisión de 0,5 cm siguiendo una línea caudal/cefálica con unas tijeras pequeñas. Separe los lóbulos de la glándula salival, luego separe suavemente la fascia del músculo esternohioideo con pinzas de disección curvadas hasta que la laringe y la tráquea sean visibles. Asegure los bordes de la abertura con retractores unidos a bandas elásticas.
nota: Realice este paso sin incisión de los músculos. Un operador capacitado podrá intubar al animal a través de la cavidad oral sin visualización de la tráquea, por lo que este paso es opcional.
- Sostenga suavemente la lengua hacia los lados. Con pinzas, inserte la aguja interior desafilada de una cánula de 16 G en la tráquea. Visualice la inserción correcta en la tráquea a través de la incisión de la garganta.
- Conecte la cánula al ventilador y asegure una ventilación correcta colocando el tubo de escape en el agua. La presencia de burbujas indica una intubación correcta.
nota: Para mantener los pañuelos húmedos durante el funcionamiento, coloque una gasa estéril empapada con solución salina al 0,9% y yodopovidona en la incisión de la garganta. Controle la humedad durante el procedimiento.
>2. Ligadura de la arteria coronaria LAD
- Suelte la pata anterior izquierda de la cinta adhesiva y mueva con cuidado el mouse a la posición de decúbito del lado derecho. Asegure la extremidad anterior izquierda una vez que el animal esté en la posición correcta.
- Identifique la línea entre los músculos pectorales menores y mayores izquierdos y haga una incisión oblicua en la piel de 1 cm con unas tijeras siguiendo la línea. Con microtijeras romas para diseccionar, separe la fascia de los músculos pectorales sin incisión. Mantenga los músculos pectorales separados con retractores unidos a bandas elásticas.
- Ajuste el ventilador con una presión positiva al final de la espiración (PEEP) de 3 cm H2O.
- Abra la cavidad torácica usando pinzas romas en el 3er espacio intercostal entre la 3ra y la 4ta costilla. Evite tocar la arteria torácica interna, ya que existe peligro de sangrado. No toque el corazón ni los pulmones. Aplique dos retractores en la caja torácica, uno en cada costilla (Figura 2A).
- Con una pinza fina curvada, retire con cuidado el pericardio y sepárelo sin dañar el corazón y los pulmones.
- Localice la arteria coronaria descendente anterior (DA) izquierda. La arteria LAD aparece como una línea superficial de color rojo brillante que va desde el borde de la aurícula izquierda hacia el ápice.
- Utilice un soporte para agujas para pasar una sutura de seda 7-0 por debajo de la DAA de 2 a 3 mm por debajo de las aurículas izquierdas. Tira de la seda lentamente para evitar que el tejido del corazón se desgarre. Ata la ligadura con tres nudos. La parte inferior izquierda del ventrículo izquierdo palidecerá instantáneamente tras la ligadura (Figura 2B-E)
nota: Es importante no profundizar demasiado en la cavidad ventricular ni permanecer demasiado superficial. En el caso de los animales operados de forma simulada, tire de la seda de sutura por debajo de la DA y retírela lentamente evitando que el tejido se desgarre.
- Suelte los retractores de las costillas, sujete la 3ª costilla con pinzas y haga dos pasadas con una sutura de seda 6-0 debajo de la 3ª y 4ª costillas.
cautela: No perfore el corazón o el pulmón. No aprietes los nudos todavía.
- Coloque tres gotas de solución salina al 0,9% a 37 °C en la abertura y cierre el tubo de escape de espiración durante 2 o 3 ciclos respiratorios para inflar correctamente los pulmones. Apriete la sutura y asegúrela con dos lanzamientos.
- Libera los retractores que sujetan los músculos y ayúdalos a recuperar su lugar correcto.
- Cerrar la piel torácica con dos puntos de seda de sutura 5-0 y asegurar con dos mantas. Cierre la piel de la garganta con una puntada de seda de sutura 5-0 y asegúrela con dos mantas.
