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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Laparotomía
- Anestesiar a los animales con xilacina (10 mg/kg) y solución de ketamina (80 mg/kg), por vía subcutánea (0,1 mL/10 g de peso corporal) utilizando una jeringa de 1 mL y una aguja de 13 x 0,45 mm de 26 G 1/2. Verifique que haya suficiente profundidad de anestesia pellizcando el dedo del pie. Controle la temperatura corporal usando almohadillas térmicas. Asegúrese de que todos los materiales quirúrgicos sean estériles.
- Limpie el área abdominal con una solución de povidona yodada al 5% y use una recortadora para eliminar el vello entre el pecho y la parte inferior del abdomen (aproximadamente 2 cm2). Limpie el área quirúrgica con alcohol al 70%.
- Inmovilice al animal en la tabla quirúrgica con cinta quirúrgica. Con unas tijeras se cortan 5 mm de la piel horizontalmente, en la parte superior del abdomen y 1 cm por debajo de la apófisis xifoides. Repita el corte en el peritoneo. Esto dará como resultado una laparotomía con una exposición mínima de la cavidad.
>2. Localización y exposición del páncreas
- Con la ayuda de un retractor, tire del hígado hacia la cabeza del ratón, a ~ 1 cm del intestino.
- Localice la región del páncreas a la que se le inyectará taurocolato de sodio (cabeza del páncreas). Ubique el duodeno con referencia al hígado: debajo del hígado, en el lado derecho (a la izquierda mientras se ve el ratón). El duodeno es la primera parte del intestino delgado y está conectado a la porción final del estómago.
- Con la ayuda de pinzas, levante el hígado hacia la cabeza del animal y tire suavemente de la porción del intestino delgado. Fije los dos extremos laterales del intestino delgado con una sutura de polipropileno 6-0 para ver mejor la porción distal del conducto biliar común.
3. Inducción de pancreatitis aguda grave
- Ocluya temporalmente el conducto biliar común proximal con una pinza de microvasos para evitar que la infusión retrógrada se filtre al hígado. El conducto biliar común se puede ver en el lado hepático del duodeno y su unión con el duodeno aparecerá blanca. Exponga el órgano fuera de la cavidad abdominal.
- Punción de la región periampular (parte blanquecina de la pared del intestino delgado) para acceder a la colédoca con una aguja de 0,4 mm conectada a un tubo de polietileno de 0,54 mm.
- Realizar una oclusión temporal del colédoco distal con 8-0 sutura para evitar que la solución de taurocolato de sodio se filtre al duodeno.
- Ponga en marcha la bomba de infusión y programe una perfusión de solución de taurocolato sódico al 2,5% (diluida en solución salina al 0,9%) a una velocidad constante de 10 μL/10 g de peso corporal durante 3 min.
- Después de la infusión, retire el clip de microvaso, el 8-0 temporal sutura, y la aguja de inyección desde el conducto pancreático biliar para reconstituir el flujo fisiológico de la bilis.
- Al final, sutura el abdomen con sutura de polipropileno monofilamento no absorbente 6-0. El tiempo entre la laparotomía y la sutura final debe ser de un máximo de 30 min (ver Figura 1).
- Después de la cirugía, aloje a los animales en cajas de polietileno forradas con virutas de madera y agua y comida ad libitum.
- Trate a los ratones de control de la misma manera que a los ratones experimentales, pero asegúrese de que la infusión consista únicamente en solución salina. Realizar el procedimiento quirúrgico y la infusión de solución salina (10 mL/min, durante 3 min) en un grupo control (SHAM) para eliminar el sesgo inflamatorio causado por la cirugía y la canulación.
- Utilice tramadol 12,5 mg/kg por vía subcutánea cada 8 horas, comenzando después de la recuperación postquirúrgica.
