Bandas del arco aórtico transversal en modelo de ratón: una técnica mínimamente invasiva en ratones para la inducción de alta presión en el ventrículo izquierdo

En este artículo

Resumen

Fuente: Zaw, A. M. et al. Constricción aórtica transversal mínimamente invasiva en ratones. J. Vis. Exp. (2017)

En este video, demostramos un protocolo experimental para la constricción aórtica transversa mínimamente invasiva en ratones para examinar la insuficiencia cardíaca inducida por sobrecarga de presión.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación del sitio de operación

Desinfecte el lugar de operación con alcohol isopropílico al 75%. Ajuste la temperatura de la almohadilla térmica a 37 °C para evitar cambios en la frecuencia cardíaca y respiratoria del animal en cuestión.
Utilice instrumental quirúrgico esterilizado en un esterilizador de desplazamiento por gravedad a 121 °C durante 30 min o por otros métodos apropiados.
Tome de 2 a 4 agujas de calibre 30 y dúblelas con un soporte para agujas, como se ve en la Figura 1, para hacer una herramienta para la ligadura y separación de tejidos y para usar como retractor. Monte la aguja ahora curvada en un aplicador de algodón para usar en cirugía.
Empule una aguja de calibre 27 y cúbrala 90º con el portaagujas. Alisar la punta frotando una superficie dura para hacer un espaciador de 0,4 mm en el paso de ligadura.

>2. Preparación animal

Anestesiar a un ratón macho de 22 a 25 g C57BL/6N de 2 meses de edad con una mezcla adecuada de ketamina y xilacina en relación con el peso corporal: 100 mg/kg + 10 mg/kg i.p. Confirme la anestesia con el reflejo de pellizco de cola negativo.
Eliminar el vello de la parte anterior del cuello y el pecho con una aplicación de 2 a 3 minutos de crema depilatoria. Retira la crema con agua tibia y un aplicador de algodón.
Aplicar ungüento o gel oftálmico en los ojos del animal para evitar que se reseque la córnea.
Coloque al animal en una almohadilla térmica en posición supina y realice un seguimiento intraoperatorio, asegurándose de mantener la documentación adecuada en un intervalo de 15 minutos.
Use cinta de papel quirúrgico para asegurar las extremidades a la almohadilla térmica para mantener al animal en la posición correcta durante la cirugía.
Desinfectar la piel alternativamente con alcohol y solución de povidona yodada tres veces.
Utilice un paño estéril con un campo de operación expuesto para evitar la contaminación. Use guantes estériles nuevos para cada ratón y según sea necesario.

>3. Procedimiento de ligadura

Abra la piel del ratón en la posición de la línea media del cuello y el pecho con un bisturí.
Tire de la glándula tiroides hacia la cabeza separando suavemente los tejidos conectivos con unas tijeras sin filo.
Separe la capa muscular de la tráquea en la línea media hacia ambos lados con las agujas curvas.
Con las tijeras romas, corte el esternón hasta la segunda costilla (aproximadamente 5 mm). Abra el corte con un retractor o pinzas curvas.
Separe los lóbulos del timo entre sí y la pared torácica inferior separando el tejido conectivo con la aguja curvada; el arco aórtico transversal y las dos arterias carótidas serán claramente visibles en este punto.
Coloque la aguja curva debajo del arco y perfore entre la pared del vaso y el tejido conectivo del otro lado empujando la cabeza curva hacia afuera.
Con la aguja curva, tire de la sutura de monofilamento 6-0 debajo del arco aórtico.
Coloque el espaciador en el bucle y fije la sutura en su lugar con un nudo doble. Retire el espaciador suavemente.
Confirme una constricción exitosa con la posición del nudo y corte los extremos de la sutura.
Cierre la pared torácica con una sutura de seda 6/0 con un patrón de sutura interrumpido simple. Cierre la piel con una sutura monofilamento 6/0 en un patrón de sutura continuo.

>4. Cuidados postoperatorios

Aplique una solución de povidona yodada en el sitio de sutura y coloque al animal en una jaula precalentada para su recuperación y monitoreo postoperatorio.
Inyecte buprenorfina (0,05-0,1 mg/kg s.c. cada 12 h) después de que el animal haya recuperado la conciencia para aliviar el dolor y proporcionar al ratón un alimento blando adecuado.
Regrese al animal a una sala de ciclo de luz/oscuridad de 12 horas después de la recuperación completa.

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

figure-results-1
Figura 1: Proceso de formación de los ganchos de aguja deseados doblando una punta de aguja de calibre 30 de 1 pulgada. (A) La punta de aguja original de 1 pulgada y calibre 30. (B) Sujete la punta de la aguja con el portaagujas y dóblela aproximadamente a la mitad de su longitud. Dobla la aguja en forma de bucle, usando el soporte de la aguja y la...