Recuperación prenatal de embriones de ratón: un procedimiento para cosechar embriones de ratón embarazada

Resumen

Fuente: Yun, K. Evaluación de los defectos de obstrucción de la unión del tracto urinario mediante la inyección de tinte azul de metileno. J. Vis. Exp.(2017)

Este video muestra la recuperación de embriones de una rata preñada. Los embriones perinatales recuperados se pueden utilizar como sistemas modelo para estudiar el desarrollo de los mamíferos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Disección de embriones prenatales

1. Tijeras y pinzas de disección limpias con etanol al 70%.
2. Para recolectar embriones perinatales en E18.5 o E19.5, primero se debe aplicar la eutanasia a las ratas embarazadas mediante inhalación de CO₂ y luego realizar la luxación cervical de acuerdo con las pautas éticas><. nota: La rata hembra embarazada suele dar a luz a partir de E18.5, sin embargo, los riñones más grandes son más fáciles de manipular. Por lo tanto, los riñones con E19.5 más cerca del nacimiento son más fáciles de realizar este análisis. Sin embargo, los cachorros con obstrucciones bilaterales del tracto urinario mueren después del nacimiento. Dependiendo de las características de los ratones experimentales, se debe determinar empíricamente un día/hora de recolección apropiado.
3. Rocíe etanol al 70% en la superficie abdominal ventral y luego abra la cavidad abdominal ventralmente con tijeras de disección y fórceas.
4. Levanta todo el útero y sepáralo del cuerpo cortando con tijeras de disección las puntas de los cuernos uterinos.
5. Enjuague todo el útero con 1x PBS en una placa de Petri.
6. Cortar el útero segmentariamente con tijeras de disección y extraer la decidua placentaria con pinzas de disección para exponer los embriones en sacos vitelinos.
7. Primero se retira el saco vitelino y luego se retira la membrana amniótica con pinzas de disección para liberar los embriones perinatales.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tijeras de operación delicadas	Roboz Instrumento Quirúrgico Co.	RS-6702
Pinzas de microdisección	Roboz Instrumento Quirúrgico Co.	RS-5135
Pinzas Dumont; Patrón #5	Roboz Instrumento Quirúrgico Co.	RS-5045
Calidad Biológica Inc. SOLUCIÓN SALINA NORMAL - 500ML	Pescador	50-983-204