$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Preparación del animal
- Inyectar analgesia 30 min antes de la cirugía (4 mg/kg de carprofeno y 0,1 mg/kg de buprenorfina).
- Registre el peso corporal del ratón para ajustar la dosis de Rosa de Bengala que se inyectará (10 μL/g, es decir, 100 μg/g).
- Colocar el ratón en la cámara de inducción con un caudal de isoflurano del 4% para anestesiarlo hasta que se detenga el movimiento espontáneo del cuerpo y las vibrisas.
- Transfiera el ratón al marco estereotáctico y colóquelo en posición prona con la nariz dentro de la máscara de anestesia. Fijar el animal y mantener la concentración de isoflurano al 4% durante 1 min. A continuación, reduzca y mantenga la concentración de isoflurano al 2%.
- Inserte suavemente la sonda rectal para controlar la temperatura durante los procedimientos quirúrgicos. Configure la almohadilla térmica asociada controlada por retroalimentación para mantener la temperatura corporal del mouse a 37 °C.
- Aplique el ungüento oftálmico de dexpantenol en ambos ojos y limpie la piel y el pelaje circundante con un agente desinfectante.
>2. Modelo de fototrombosis
- Haga una incisión longitudinal de 2,0 a 2,5 cm y retraiga para exponer el cráneo. Realice la exposición del cráneo con un solo corte para evitar complicaciones en la herida.
- Retire el periostio suavemente con algodón e identifique las suturas coronales.
- Póngase las gafas protectoras, encienda el láser de 561 nm y marque el bregma +3 mm a la izquierda.
- Apague el láser, coloque una pegatina con un orificio de 4 mm de diámetro colocado en las coordenadas marcadas mencionadas anteriormente.
- Inyectar al ratón Rosa de Bengala (10 μL/g), por vía intraperitoneal. Coloque el rayo láser a 4-5 cm del cráneo, encienda el láser de 561 nm e ilumine el cráneo durante 20 minutos.
- Aplique dos gotas de solución salina al 0,9% sobre el cráneo para rehidratar, suturar la herida y coloque al animal en una cámara de recuperación a 37 °C para recuperarse de la anestesia. Después de 1 hora, devuelva los ratones a sus jaulas en una habitación con temperatura controlada.
- Inyectar analgesia cada 12 h durante 3 días después de la cirugía (4 mg/kg de carprofeno y 0,1 mg/kg de buprenorfina).