Modelo murino de trasplante de islotes: un método quirúrgico para infundir islotes pancreáticos en la vena porta y prevención de la hemorragia postoperatoria

Resumen

Fuente: Gou, W. et al. Minimizando el sangrado de la vena porta post-infusión durante el trasplante de islotes intrahepáticos en ratones. J. Vis. Exp. (2021)

En este video, describimos un procedimiento para infundir células de los islotes pancreáticos en la vena porta hepática, seguido de la aplicación de espuma de gel para prevenir con éxito el sangrado. La hemorragia postoperatoria es una causa frecuente de alta mortalidad durante el trasplante de islotes.

Protocolo

1. Trasplante de islotes

1. Inducir y mantener al ratón bajo anestesia general con isoflurano al 2%. Comprobar la ausencia de reflejos pedales para asegurar una correcta anestesia del animal.
2. Afeita y retira el pelo en la zona del abdomen del ratón.
3. Administrar una dosis única preoperatoria de Buprenorfina (0,1 mg/kg i.p.).
4. Desinfecte el área quirúrgica con tres toallitas alternas de 2% de yodo y 75% de alcohol.
5. Realizar una laparotomía con micro tijeras para generar una incisión de 1-1,5 cm.
6. Abra la cavidad peritoneal con un retractor. Siga con el método A o el método B como se detalla a continuación.

Método A: (detener el sangrado con espuma de gel, Figura 1A)

1. Preparación del ratón
   1. Coloque una gasa estéril alrededor de la incisión.
   2. Extraiga suavemente el intestino con una pinza y manténgalo sobre la gasa.
   3. Identifique la vena porta por su ubicación y expóngala bien.
   4. Cubra el intestino con una gasa tibia y húmeda en solución salina durante toda la cirugía.
2. Inserte la aguja de la jeringa de insulina precargada del islote a través de la vena porta cerca del duodeno (Figura 1B). Para ello, sostenga la aguja con el orificio (bisel) hacia abajo y coloque el ángulo de la superficie de apertura paralelo a la pared de la vena porta antes de penetrar a través de la pared.
   1. Tire del émbolo para extraer un poco de sangre (20-50 μL) en la jeringa para mezclar primero los islotes.
   2. Infunda los islotes en la vena porta lentamente mientras tira y empuja repetidamente la zambullida.
   3. Coloque un trozo de espuma de gel (de aproximadamente 0,5 cm x 0,5 cm) para cubrir el lugar de la inyección.
   4. Presione la espuma de gel hacia abajo con una punta de algodón mientras saca la aguja de la vena porta.
   5. Continúe presionando el gel durante unos 2 minutos para confirmar que no hay sangrado activo.
   6. Pasa la punta de algodón por encima y lejos de la espuma de gel para asegurarte de que la espuma de gel cubra bien la vena porta.

Método B: (detener el sangrado con una almohadilla de grasa, Figura 1C)

1. Exponga la vena porta a fondo.
   1. Use dos puntas de algodón para sostener la vena porta expuesta tanto del lado izquierdo como del derecho.
   2. Identifique la almohadilla de tejido graso entre el duodeno y la vena porta.
   3. Penetre a través de la almohadilla de grasa antes de insertar la aguja en la vena porta (Figura 1D).
   4. Infundir los islotes, siguiendo el procedimiento similar descrito anteriormente en el Método A.
   5. Saca la aguja mientras presionas la grasa con una punta de algodón.
   6. Continúe presionando la almohadilla de grasa durante 1 minuto después de retirar la aguja.
2. Después de confirmar que no hay sangrado de la vena porta, regrese suavemente el intestino a la cavidad peritoneal en su posición original.
3. Dejar 0,5 mL de solución salina tibia (36-37 °C) en la cavidad abdominal antes del cierre.
   nota: La solución salina tibia facilita el movimiento y la recuperación del intestino después de la cirugía y previene la necrosis intestinal.
4. Cierre la capa muscular con una sutura 5-0.
5. Cierre la capa de piel con una sutura 4-0.
6. Coloque el ratón en una jaula limpia sobre una almohadilla térmica hasta que se recupere por completo de la anestesia.
7. Continúe administrando un analgésico (p. ej., buprenorfina 0,1 mg/kg i.p.) cada 12 h y calor suplementario durante 48 h después de la cirugía.
   NOTA: El procedimiento de trasplante de islotes tarda aproximadamente 15-20 minutos en completarse.

Resultados

Figura 1: Ilustración de los procedimientos de trasplante de islotes intrahepáticos.(A, C). Esquemas de los pasos clave utilizados en el Método A y el Método B. (B, D). Los islotes se inyectaron directamente a través de la vena porta (C) o indirectamente a través de la palma de grasa (D).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
10% Formalina tamponada neutra v/v	Fisher Científico	23426796
1 mL Jeringa con aguja	Ahs	AH01T
Jeringa de 20 ml	Bd	301031
Agujas hipodérmicas de 25G x 5/8"	Bd	305122
Almohadillas de preparación con alcohol, estériles	Fisher Científico	22-363-750
Sistema de anestesia animal	VetEquip, Inc.	Inc. 901806
Clorhidrato de buprenorfina, inyección	Par Productos Estériles LLC	NDC 42023-179-05
Etanol absoluto (200 pruebas), grado de biología molecular	Fisher Científico	BP2818500
Tijeras de disección Micro extrafinas de 4" rectas y afiladas	Roboz Instrumento Quirúrgico Co.	RS-5882
Gelfoam (esponja de gelatina absorbible USP)	Compañía Pharmacia & Upjohn	34201
Pinza Graefe 4" punta extra delicada	Roboz Instrumento Quirúrgico Co.	RS-5136
Almohadilla térmica	amazona	B07HMKMBKM
Portaagujas Hegar-Baumgartner 5.25"	Roboz Instrumento Quirúrgico Co.	RS-7850
Jeringa de insulina con aguja de calibre 27	Bd	879588
Almohadillas de preparación de yodo	Fisher Científico	19-027048
Isoflurano	Cuidados Intensivos Piramal	NDC 66794-017-25
Sutura de polipropileno 4-0	Med-Vet Internacional	MV-8683
Sutura de polipropileno 5-0	Med-Vet Internacional	MV-8661
Cloruro de sodio, solución intravenosa al 0,9%	VWR	2B1322Q
Paño quirúrgico estéril	Med-Vet Internacional	DR1826